应用抑制消减杂交技术克隆人大肠癌转移相关新基因

目的 克隆新的大肠癌转移相关基因,为进一步阐述大肠癌转移的分子机制提供线索。方法 利用抑制消减杂交技术,以1对来自同一亲本、转移能力不同的大肠癌细胞株SW620和SW480为研究对象,构建2种大肠癌转移促进基因和转移抑制基因的cDNA消减文库。随机挑取文库克隆进行差异筛选,对所得的差异片段进行测序和同源性分析,利用Northern Blot对新基因的表达情况进行验证。结果 两种消减文库分别含有235和232个白色克隆,90%以上的白色克隆含有插入片段。随机挑取约200个阳性克隆进行差异筛选。共获得29个差异片段。测序及同源分析发现15个为未知基因,GenBank登陆号为CD485499-CD485513。其中与5号染色体序列同源的基因有6个。结论 抑制消减杂交技术是筛选、克隆大肠癌转移相关新基因的有效手段;5号染色体上可能存在多个与大肠癌转移相关的新基因位点;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。     

人大肠癌细胞PRL-3基因启动子Snail结合位点的初步研究

目的 确定转录因子Snail可与PRL-3基因启动子区结合.方法 应用生物信息学方法获得PRL-3基因启动子区域,并对其潜在的Snail结合位点进行预测,进一步应用Snail抗体染色质免疫共沉淀技术结合PCR技术检测PRL-3基因启动子序列,以确定转录因子Snail可与PRL-3基因启动子结合.结果 应用TRED在线分析系统确定PRL-3基因的启动子区域位于PRL-0基因上游-700 bp至299 bp之间,在该启动子区域存在多个转录因子如Snail、n-MYC、ARNT、E74A、NF-kappaB、NRF-2及AML-1等的结合位点;在启动子区域的-500 bp至-451 bp之间存在Snail结合的核心寡核苷酸序列CACCTG,在其他多个区域存在多个类似这一核心序列的DNA序列;应用染色质免疫沉淀技术结合PCR扩增的方法对人大肠癌细胞株SW480细胞进行分析,发现Snail可与人大肠癌细胞株SW480 PRL-3基因的启动子区域的DNA片断结合.结论 转录因子Snail可与人大肠癌细胞SW480 PRL-3基因启动子结合,参与PRL-3基因的调控.     

特发性非特异性间质性肺炎6例临床病理分析

目的探讨特发性非特异性间质性肺炎的临床病理学特征和鉴别诊断。方法对6例特发性非特异性间质性肺炎进行临床、影像学、组织病理学和免疫组化观察,并复习相关文献。结果高分辨CT显示双肺对称性毛玻璃样阴影。镜下肺组织呈均匀一致性病变,主要表现为间质慢性炎症和纤维化,肺泡间隔增宽。免疫组化示增生的肺泡上皮和支气管上皮CK、EMA（＋）。结论特发性非特异性间质性肺炎是一种重要的特异性间质性肺炎类型,应注意与寻常型间质性肺炎、淋巴细胞性间质性肺炎及过敏性肺炎等进行鉴别,对指导临床治疗和判断预后具有非常重要的意义。     

PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建及在SW480细胞中的表达

目的 构建PRL-3基因慢病毒干扰载体及建立PRL-3基因稳定干扰的结直肠癌细胞亚系.为PRb-3基因功能研究奠定基础.方法 设计PRL-3基因特异性RNAi靶序列,与pENTRTM/U6线性载体定向连接,构建pENTRTM/U6真核入门表达载体.通过与pENTRTM/U6 entry clone与pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST载体进行重组,获得pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体.利用包装细胞293FT获得重组的慢病毒,感染大肠癌细胞株SW480细胞,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰PRL-3基因的细胞亚系.结果 成功构建PRL-3 pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度为6×105U/L.RT-PCR、Western blotting结果 表明,克隆1 PRL-3mRNA及蛋白显著降低.结论 成功构建人PRL-3基因特异性的慢病毒干扰载体,获得PRL-3基因稳定干扰的大肠癌细胞亚系.     

3,4′,5-三羟基芪-3-β-单-D-葡萄糖苷对大肠癌细胞系蛋白激酶C的抑制效应

目的研究3,4’,5-三羟基芪-3-β-单-D-葡萄糖苷(3,4’,5,-trihydroxystibene-3-β-mono-D-glucoside,THMG)对大肠癌细胞粘附性、浸润力及蛋白激酶C活性的影响;探讨THMG抗转移作用的信号转导机制。方法利用Boyden小室法等细胞生物学技术检测4种大肠癌细胞(HR8348,Hce-8693,HT29,LoVo)在0.4,0.8,1.6和3.2mmol·L~(-1)等浓度THMG作用下的粘附率、浸润力。[γ-~(32)P]ATP掺入法测定蛋白激酶C活性。结果在3.2mmol·L~(-1)浓度时THMG对HR-8348,Hce-8693,HT-29和LoVo粘附抑制率分别为75.7％,69.4％,67.6％和78.8％,浸润抑制率分别为82.7％,85.7％,89.7％和92.7％,且随着浓度加大,粘附和浸润抑制率提高。3.2 mmol·L~(-1)THMG对HR-8348,Hce-8693,HT-29和LoVo的蛋白激酶C活性抑制率分别是35.1％,36.8％,41.5％,49.6％,呈剂量依赖性关系,与对照组比较具有统计学显著性(P<0.001)。粘附性及浸润力抑制程度与蛋白激酶C活性的抑制程度呈显著性相关(P<0.05)。结论 THMG可能通过抑制蛋白激酶C活性对信号转导系统具有调变作用,THMG对信号转导系统的影响可能是抗粘附抗侵袭效应的重要机制之一。     

肝枯否氏肉瘤一例

肝枯否氏肉瘤又称肝血管肉瘤,甚为罕见。我们最近见一病例,在十年前曾使用过胆囊造影剂,现报告如下。患者男性,53岁,农民,广东籍。因上腹部胀痛包块25天于1983年8月4日入院。入院后持续性腹痛,不向它处放射,无畏寒、发热、黄疸、食欲下降、消瘦及乏力等。T36.5℃,P66,BP13.07/8.00kPa。体     

心脏恶性神经鞘瘤一例

患者女，１９岁。无明显诱因于１９９８年５月２７日出现双足水肿，１周后口唇紫绀，在当地医院以“急性肾炎”治疗后水肿消失，但口唇紫绀加重，伴活动后心悸、气促于１９９８年７月１８日入我院。体检：口唇明显紫绀，心浊音界向左扩大，心律齐，肝肿大。心电图示：窦性心律，全导联低电压。超声心动图示：右心房带蒂肿物，右室流出道阻塞。手术所见：肿瘤蒂部位于三尖瓣，呈浸润性生长，突入右心房和右心室。病理检查：巨检：手术切除肿瘤组织３块，体积分别为７．５ｃｍ×４．５ｃｍ×４．０、６．５ｃｍ×４．３ｃｍ×４．０、６．０…     

用六胺银法的改良法显示组织胞浆菌

组织胞浆菌病是流行于北美的一种真菌传染性疾病。国内于1958年首次报道一例,至今仅有9例报道,但未见有关技术方面的专门报道。为此,我们用Grocott-Gomori六胺银法改良法显示该菌,取得了满意的结果. 材料来源于本室的尸体解剖,肺、肝、肠、心、肾和气管组织,常规制片。用改良的Grocott-Gomori六胺银法显示,用PAS、AB和粘液卡红法作比较。