膜表达热休克蛋白70真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞的转染

目的构建普遍适合性的膜表达热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,修饰并建立HSP 70表达并结合在细胞膜表面的肿瘤细胞.方法RT-PCR法从人胚肾中获取HSP 70的cDNA,扩增成带酶切位点的目的基因.选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆酶位点中.DNA测序证实后,以脂质体转染的方法,将载体转染到黑色素瘤细胞.用G418抗性筛选获得阳性克隆.结果酶切电泳和DNA测序证实载体构建正确;目的基因的上游带信号肽序列,下游带跨膜序列.RT-PCR产物电泳、Westem Blotting、激光共聚焦显微镜和流式细胞术证实大量HSP 70表达并结合在转染的黑色素瘤细胞膜表面.结论成功地构建了膜表达HSP 70的真核表达载体;转染到黑色素瘤细胞后,细胞膜表面表达丰富的HSP70.转染细胞可以进一步制备新型瘤苗.     

骨髓间充质干细胞治疗心力衰竭的研究进展

充血性心力衰竭(心衰)是现代社会发病率、病死率不断提高的主要心血管疾病，急性心肌梗死(心梗)是重要的致病原因。心梗后，心肌细胞坏死、凋亡造成心肌数目减少，心室重构促使心衰发生。通常认为，哺乳动物成体心肌为终分化组织，没有成肌前体细胞，受损后无分化和增生潜能，故心肌细胞丢失多不可逆。尽管有研究显示心衰时心肌细胞存在有     

CIK细胞在恶性血液系统疾病中的应用研究

细胞因子诱导的杀伤 (Cytokine inducedkiller ,CIK)细胞是一种非主要组织相溶性复合体 (MHC)限制的免疫效应细胞 ,同时表达CD3和CD5 6。CIK细胞可以由人外周血的单个核细胞在体外经与多种细胞因子和CD3单克隆抗体共同培养获得 ,其增殖能力强、杀瘤活性高、副作用小 ,是目前恶性血液病细胞免疫治疗中最具前景的细胞之一。     

顺铂、卡铂和双环铂细胞毒作用及小鼠血液系统毒副作用的比较

顺铂和卡铂均为高效、广谱的抗癌药 ,对头颈部癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肝胚细胞瘤、子宫癌、卵巢癌等具有很好的疗效[1] 。双环铂 (又名安托可金 )是新近开发研究的铂类抗癌药物 ,是含有两个羧酸的二氨合铂 ,具有较强的抗肿瘤活性[2 ] 。本实验利用体外培养的小细胞肺癌株 (NCI H4 46 )观察了三种铂类药物的细胞毒作用 ,并通过实验小鼠对三者的血液系统毒副作用进行了比较。1　材料与方法1.1动物与瘤株　健康BALB/C小鼠 ,体重 19±2 g ,由中国医科大学实验动物部提供。小细胞肺癌株 (NCI H4 46 )购自中国科学院上海细胞生物学…     

释疑解难

鉴于目前免疫学检验项目的广泛应用 ,一些读者希望介绍有关免疫学检验项目的正常值和临床意义 ,我编辑部摘录部分较新项目 ,分期刊出 ,以飨读者。     

CpG寡聚脱氧核苷酸在灵长类动物中免疫调节活性的研究进展

包含CpG基序的寡聚脱氧核苷酸(ODN)具有类似于微生物DNA激活内在免疫系统的能力，可提高适应性免疫力而抑制传染性生物的早期传播。CpG ODN在疫苗佐剂的设计以及哮喘、过敏、传染病和癌症的治疗中显示出良好的应用前景。由于CpG识别体系在进化中出现的种间差异，在啮齿类动物中表现出最强活性的CpG ODN却无法有效地刺激灵长类动物产生免疫应答。已有大量证据表明CpG ODN在小鼠中具有治疗活性，而其在灵长类动物中作用的研究仍需继续深入。现就作用于灵长类动物的CpG ODN的分类、作用机制和其作为疫苗佐剂与免疫保护剂以及在癌症、过敏和哮喘等多种疾病治疗上的应用研究进行综述。     

生长激素、肝细胞生长因子和烟酰胺对人胎胰岛细胞的增殖作用

目的研究生长激素(GH)，肝细胞生长因子(HGF)和烟酰胺(NIC)对体外培养的人胎胰岛细胞的增殖作用及其交互作用。方法采用La(2^7)正交设计法在体外培养的人胎胰岛细胞的各组中分别加入不同浓度及组合的GH，HGF和NIC，培养48h后，收集各孔细胞，DTZ染色，计数。结果GH，HGF和NIC均起主要作用，HGF和NIC的交互作用不可忽视，最佳的生长因子组合及适配浓度为GH(100ng／ml)HGF(25ng／ml)NIC(100mmol／L)。结论GH，HGF和NIC均能促进体外培养的胰岛细胞的增殖，且组合GH(100ng／ml)HGF(25ng／ml)NIC(100mmol／L)的作用最大。     

过氧化氢导致线粒体DNA编码细胞色素C氧化酶基因突变与其编码蛋白结构与功能关系的研究

目的探讨过氧化氢(H2O2)导致线粒体DNA(mtDNA)编码细胞色素C氧化酶(COX)基因损伤(突变)后对其编码蛋白结构与功能的影响及两者之间的关系.方法采用生物信息学技术,运用计算机同源模建的方法模拟人天然COX亚单位和其突变体的空间结构,并利用已有的实验数据,结合模建的结果进行了结构、功能的分析、研究.结果在COX Ⅰ的三维结构中突变的部位(残基297～306)位于分子的最外部,而该区域参与了与B亚基(相当于COXⅡ亚基)的作用,该部位的突变使突变部位附近残基的侧链结构环境发生了极大的变化,导致附近的电荷性质、亲疏水性质和空间特性出现变化,这些变化对酶复合物的形成有直接的影响;COXⅡ突变后,组成分子结构的"椅靠"部分和"椅面"部分之间的夹角略有增大,而"椅靠"和"椅面"之间的夹角的变化将会影响整个酶分子的稳定性.结论H2O2导致的mtDNA编码COX Ⅰ、COXⅡ亚基基因突变使其编码的COX蛋白空间结构发生改变,这种改变是其功能改变(如酶蛋白活性下降)的主要原因.     

血红素氧合酶-1在冠心病患者中的表达

【目的】观察血红素氧合酶-1(HO-1)在冠心病患中的表达。【方法】将冠心病患分为急性心肌梗死组(AMI组)，非心肌梗死组(梗死前组)及陈旧性心肌梗死组(梗死后组)。利用免疫组化方法对冠心病患外周血单个核细胞中HO-1的表达进行定位分析，并通过计算机图像分析系统分析HO-1表达的程度及强度。通过Western blot对HO-1表达水平进行定量分析。比较各组冠心病患HO-1的表达情况。【结果】HO-1表达于胞浆。冠心病患HO-1表达明显高于正常人(P(0．01)，AMI组HO-1表达明显高于其他组冠心病患(P(0．01)，梗死后组HO-1表达也高于梗死前组(P(0．05)。【结论】冠心病患HO-1表达水平升高，其表达水平与冠心病严重程度有关。     

Involvement of Apoptosis in 3-nitropropionic Acid-induced Ischemicl Tolerance to Transient Focal Cerebral Ischemia in Rats

Preconditioningofbraintissueswithsub lethalstressesorstimulicanresultinresistancetosubse quentlethalischemiceventsinaresponsecalledis chemictolerance .Recently ,severalstudieshaveshownthatasinglesystemicdoseof 2 0mg/kg 3 NPAcausednohistopathologicalabnorm…