内源性血管生成抑制因子Arresten原核表达载体的构建及表达

目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达载体,并在E.coliDH5α进行表达。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA,经逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出Arresten基因,构建重组质粒pBV220-Arr转化E.coliDH5α进行原核表达。结果成功筛选出Arresten基因并构建了重组质粒pBV220-Arr,重组质粒在菌株中获得表达。结论构建的原核表达重组体pBV220-Arr能高效表达重组Arresten蛋白。     

食品标本处理方法对大肠埃希菌检出限影响

目的 研究快速、敏感、低成本的食品标本处理方法。方法 在牛肉馅中接种不同浓度的大肠埃希菌O157：H7，经离心、过滤，去除PCR抑制剂。浓缩菌株，用煮沸法和酶／冻融法裂解菌株，制备模板DNA。通过PCR检测大肠埃希菌O157：H7志贺毒素基因以评价该处理方法的可行性。结果 在未增菌条件下，PCR最低能检测到103CFU／g牛肉馅，增菌6h，最低能检测1CFU／g牛肉馅，整个检测过程只需要12h。结论 所采用的标本处理方法是一种灵敏、省时、低成本的方法，能显著地提高PCR检测食品标本中的大肠埃希菌O157：H7的灵敏度。     

DinB基因的超表达短期内可显著降低大肠杆菌的死亡率

 [目的]探讨大肠杆菌dinB基因在进化上的选择优势.[方法]应用竞争共培养和超表达的策略,测定共培养后含dinB基因的目的菌株和对照菌株的生长优势.第1组为含质粒pUC-dinB-rrnb的E.coli AB1157＋含质粒pUC-dinBR-rrnb的E.coli YG7207;第2组为含质粒pUC-dinB-rrnb的E..coli AB1157＋含质粒pUC-phoE-rrnb的E.coli YG7207;第3组为含质粒pUC-phoE-rrnb的E.coli AB1157＋含质粒pUC-dinBR-rrnb的E.coli YG7207;第4组为卡那霉素抗性（K^＋）菌株YG7207与无卡那霉素抗性菌株AB1157.[结果]第4组中,卡那霉素抗性菌株YG7207与无卡那霉素抗性菌株AB1157在培养物中的比例保持着良好的稳定.第1组和第2组混合培养中,K^＋抗性的菌株在培养物中的比例急剧下降,并很快接近或等于0;第3组培养物中,K^＋菌株（YG7207）的比例呈明显上升.[结论]超表达dinB基因的大肠杆菌菌株的生长优势不是由于对数期的生长速率提高所造成,对数后期细胞死亡率降低应该是超表达dinB基因的大肠杆菌菌株的生长优势的主要原因.     

Fura-2/AM荧光探针法用于大肠杆菌胞内游离钙的测定

目的探讨经超声处理后大肠杆菌胞内游离钙的变化。方法超声波作用影响大肠杆菌,用Fura-2/AM探针法测定胞内游离钙的变化。结果经超声作用后的大肠杆菌胞内游离钙水平升高,打开了钙依赖性的离子通道,膜两侧离子交流加速,膜通透性增加。结论Fura-2/AM荧光探针法可用于微生物大肠杆菌胞内游离钙的测定。经一定条件下超声作用后的大肠杆菌胞内游离钙水平升高。     

4年间我院儿科临床大肠埃希菌耐药性变迁分析

目的：监测我院4年间儿科临床分离的大肠埃希菌的耐药情况，了解其耐药性发生和发展的规律，以指导儿科临床合理选用抗大肠埃希菌药物。方法：2001年1月-2004年12月从儿科临床标本分离的84株大肠埃希菌按照分离时间分为2001-2002年组（2001年1月-2002年12月）48株和2003-2004年组（2003年1月-2004年12月）36株，分别比较两组产超广谱B内酰胺酶（ESBLs）和对22种抗菌药物敏感性试验结果。结果：ESBLs检测结果：2001-2002年组产ESBLs株检测率为37．5％（15／40），2003-2004年组产酶株捡出率为46．9％（15／32），经x^2检验，P〉0．05，无显著性差异。药物敏感性实验结果：2003-2004年组比2001-2002年组耐药率明显升高，22种抗生素中除外亚胺培南未发现耐药菌外，其他抗生素耐药率均有不同程度增高，增幅为（16．7％-88．9％），经x^2检验，均有极显著性差异（P〈0．01），其中耐药率上升最快的5种抗生索分别为头孢曲松、头孢唑啉、头孢嚷肟、头孢拉定、头孢呋辛。耐药率上升较慢的5种抗生素分别为阿米卡星、头孢西丁、头孢哌酮／舒巴坦、头孢他定和四环素。结论：儿科临床大肠埃希菌耐药性发展迅速，以对头孢类抗生素耐药性上升最为显著，且呈多重耐药趋势。治疗上不宜选用头孢类抗生索和复方磺胺甲嗯唑，应选用头孢西丁、加酶抑制剂复合抗生素以及亚胺培南。     

大肠埃希菌超广谱-β内酰胺酶胺酶的检测及耐药性分析

目的了解我院大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率及耐药情况,为临床治疗提供依据.方法对我院2002年1月～2004年12月住院病人分离的大肠埃希菌311株,采用NCCL推荐的纸片扩散表型确证试验进行ESBLs检测,用K-B法做药敏试验.结果检出ESBLs菌78株,检出率33.48%.产ESBLs菌的耐药率显著高于不产ESBLs菌(P＜0.005).产ESBLs菌对亚胺培南的耐药率低.结论应对ESBLs菌进行检测和监测,以指导临床用药.亚胺培南可作为ESBLs菌治疗的首选药.     

消毒剂对大肠杆菌O157：H7的杀灭效果及应用研究

目的：了解常用消毒剂对大肠杆菌O157：H7的杀灭效果和指导现场消毒实践。方法：采用能量试验和模拟现场试验，对4种消毒剂进行了实验室观察。结果：能量试验测出各种消毒剂最低有效杀灭浓度分别为：二氯异氢尿酸钠有效氯为100mg／L、碘伏有效碘为50mg／L、洗必泰为25mg／L、季铵盐为100mg／L。模拟现场试验结果，完全杀灭河水、井水及医院污水中污染的试验菌所需各消毒剂的剂量分别为：二氯异氢尿酸钠有效氯20．0mg／L、10．0mg／L和10．0mg／L，均需作用1h；碘伏有效碘10．0mg／L作用8h、5．0mg／L作用1h和40．0mg／L作用8h；洗必泰10．0mg／L、5．0mg／L和40．0mg／L，均需作用2h；季铵盐20．0mg／L作用1h、10．0mg／L作用lh和80．0mg／L作用2h。完全杀灭泥土和田间土壤载体中试验菌所需各消毒剂剂量分别为：二氯异氢尿酸钠有效氯250mg／L作用1min和400mg／L作用1min；碘伏有效碘90mg／L作用5min和120mg／L作用5min；洗必泰90mg／L作用1min和120mg／L作用5min；季铵盐为250mg／L作用1min和400mg／L作用5min。结论：试验结果对于有效切断大肠杆菌O157：H7传播途径、控制医院感染以及进一步研究该菌有重要意义。     

臭氧水消毒器对微生物杀灭效果的试验观察

目的：观察臭氧水消毒器产生臭氧水的杀菌效果。方法：采用悬液定量和载体定量杀菌试验进行检测。结果：该机产生含臭氧4．20mg／L的水溶液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌作用5min的杀灭率均为100％；当菌液中含有10％蛋白胨时，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌作用5min的杀灭率分别为55．67％、59．48％和37．44％。用消毒液流动浸泡载体定量杀菌试验，含臭氧4．20mg／L的水溶液作用30min对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的平均杀灭率分别为99．95％、99．99％和96．94％。结论：该臭氧水消毒器产生的臭氧水具有一定消毒效果。     

含氯复方消毒剂杀灭微生物效果的试验观察

目的:了解含氯复方消毒剂杀菌效果、稳定性及腐蚀性。方法:应用载体定量杀菌试验与金属腐蚀性试验。结果:以含有效氯2000mg/L的该消毒剂对布片上枯草杆菌黑色变种芽孢作用20min,含有效30mg/L的该溶液对布片上金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作用10min和3min,含有效氯20mg/L的该溶液对白色念珠菌作用10min,杀灭率均为100%。含有效氯1500mg/L的该消毒剂溶液对不锈钢片上乙型肝炎表面抗原作用30min,可将其抗原性破坏。含有效氯2000ml/L的消毒剂溶液对不锈钢无腐蚀,对铝、铜有轻度腐蚀,对碳钢有中度腐蚀。结论:含氯复方消毒剂具有高效杀菌作用,对金属有腐蚀性。