Ｍｉｒ－１６对人肺腺癌Ａ５４９细胞增殖及凋亡的影响

【目的】 探讨基因Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞株Ａ５４９中的表达状况以及Ｍｉｒ－１６对Ａ５４９细胞生物学行为的影响。【方法】 Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞中的含量采用实时荧光定量ＰＣＲ的检测,后将Ｍｉｒ－１６转染至Ａ５４９细胞,用ＭＴＳ、流式细胞仪检测细胞的增殖、凋亡及细胞周期。构建野生型及突变型ＷＩＰ１３’－ＵＴＲ的荧光素酶报告载体,检测荧光素酶的相对活性,验证在肺腺癌中ＷＩＰ１是Ｍｉｒ－１６的作用靶点。【结果】 在人肺腺癌Ａ５４９细胞中Ｍｉｒ－１６呈低表达;将Ｍｉｒ－１６转染至Ａ５４９细胞后表达上升,并可促进Ａ５４９细胞的增值率明显降低;早期凋亡的细胞比例增加;处于Ｇ１期的细胞比例明显增加,处于Ｓ期的细胞比例明显减少。与各对照组相比,Ｍｉｒ－１６显著抑制野生型ＷＩＰ１－３’ＵＴＲ表达载体的荧光素酶活性。【结论】Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞中低表达,并抑制肺腺癌细胞的增殖及促进细胞的早期凋亡,有望成为肺腺癌靶向治疗的新靶点。     

慢性阻塞性肺疾病加重期和稳定期Ｔｈ１７和Ｔｒｅｇ细胞的表达

摘 要： 【目的】 探讨慢性阻塞性肺疾病（ ＣＯＰＤ） 急性加重期、稳定期患者和肺功能正常吸烟者外周血中Ｔｈ１７ 、Ｔｒｅｇ细胞的表达。【方法】 选取慢性阻塞性肺疾病急性加重患者２８例、慢性阻塞性肺疾病稳定期患者２２例、吸烟肺功能正常者（对照组）２２例为研究对象。流式细胞术检测外周血中Ｔｈ１７细胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ Ｔｒｅｇ细胞的比例,ＥＬＩＳＡ 检测诱导痰ＩＬ－１７、ＴＧＦ－β１的水平。【结果】 急性加重期ＣＯＰＤ组的外周血Ｔｈ１７比例（％）较稳定期ＣＯＰＤ组增高（２．９２ ± ０．１６ ｖｓ １．２５±０．１４,Ｐ ＜ ０．００１）、痰液ＩＬ－１７水平（ｎｇ／Ｌ）较稳定期ＣＯＰＤ组增高（８２．３３ ± １７．３８ ｖｓ １２．６４ ± ２．７４,Ｐ ＜ ０．００１）,外周血Ｔｒｅｇ比例（％）低于稳定期ＣＯＰＤ组（８．５２ ± ０．４７ ｖｓ １１．４５ ± ０．７８,Ｐ ＜ ０．００１）。急性加重期ＣＯＰＤ组、稳定期ＣＯＰＤ组外周血中Ｔｈ１７比例与Ｔｒｅｇ比例均呈负相关（ｒ分别为－０．７２３和－０．６７４,Ｐ均＜ ０．００１）。【结论】 急性加重期ＣＯＰＤ的气道局部和全身的免疫反应以促炎的“Ｔｈ１７反应”占优势,稳定期ＣＯＰＤ以“Ｔｒｅｇ反应”占优势。     

眼前段生物学结构与青光眼激发试验的关系

【目的】 探讨房角狭窄者眼前段结构参数与青光眼暗室激发试验阳性的相关关系。【方法】 回顾性分析２６０例房角狭窄者的眼前段生物学参数和青光眼暗室激发试验结果。所有患者应用超声生物显微镜定量测量眼前段生物学参数,包括前房深度（ＡＣＤ）、瞳孔直径（ＰＤ）、晶状体矢高（ＬＶ）、周边虹膜厚度（ＩＴ）、虹膜膨隆度（ＩＣ）、房角开放距离（ＡＯＤ）、小梁网－睫状突夹角（ＴＣＰＡ）和房角同位关闭的象限数（ＮＰＡＣ）;所有患者均完成青光眼暗室激发试验。比较暗室激发试验阳性者与阴者间的眼前段结构差异,分析青光眼暗室激发试验中眼压升高的相关因素。【结果】 房角狭窄者青光眼暗室激发试验的阳性率为２７．３％;暗室试验中眼压升高的幅度与ＡＯＤ（ｒ ＝ －０．２４９,Ｐ ＜ ０．００１）、ＩＣ（ｒ ＝ －０．１２５,Ｐ ＝ ０．０４３）负相关,与 ＩＴ（ｒ ＝ ０．１８８,Ｐ ＝ ０．００２）、ＮＰＡＣ（ｒ ＝ ０．３０５,Ｐ ＜ ０．００１）正相关;暗室试验阳性者的ＩＴ和ＮＰＡＣ大于阴性者,ＡＯＤ小于阴性者。【结论】房角和虹膜参数与青光眼暗室激发试验结果相关,房角狭窄、房角同位关闭、厚虹膜是暗室激发试验阳性的危险因素。     

神经干细胞的单层培养及分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化

摘 要： 【目的】 建立神经干细胞（ＮＳＣ）体外培养方案,使ＮＳＣ的体外可以得到增殖和分化,并检测ＮＳＣ分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化。【方法】无菌条件下取ＳＤ大鼠胚胎端脑,无血清悬浮培养,形成Ｐ２代神经球后,将神经球消化成单细胞,分为神经球悬浮培养和单层贴壁培养,并对两种不同培养方式下的ＮＳＣ进行干性鉴定和分化能力鉴定。用不同浓度（２０、４０、８０ μｇ／Ｌ）的脑源性神经生长因子（ＢＤＮＦ）诱导ＮＳＣ分化,选出最合适的浓度。用ＢＤＮＦ最佳诱导浓度诱导ＮＳＣ分化,Ｑ－ＰＣＲ检测分化过程中ＨＥＳ１和ＭＡＳＨ１的表达变化。【结果】神经球悬浮培养和单层贴壁培养均可得到的ＮＳＣ;分化３ ｄ后,在不加入任何诱导因素的情况下,单层贴壁培养的ＮＳＣ能更高比例［（１９．５５ ± １．０９）％］地分化为β－ｔｕｂｕｌｉｎ Ⅲ阳性细胞;ＢＤＮＦ ４０ μｇ／Ｌ能诱导出更多的β－ｔｕｂｕｌｉｎ Ⅲ阳性细胞［（３４．１７ ± ０．６０）％］;在分化１、３ 和７ ｄ时,Ｑ－ＯＣＲ结果表明ＭＡＳＨ１在ＢＤＮＦ诱导下组较ＮＳＣ和对照组表达水平明显上升。【结论】单层贴壁培养的神经干细胞更利于分化为神经元,ＢＤＮＦ为４０ μｇ／Ｌ时能诱导出更高比例的神经元,ＢＤＮＦ可以诱导ＭＡＳＨ１在ＮＳＣ分化过程中表达明显上升。     

基于ＤＥＮＶ－ｐｒＭ／Ｅ基因构建ＤＥＮＶ－ＶＬＰ及其免疫学特性

摘 要：【目的】 构建和表达登革病毒４型病毒样颗粒,初步研究其免疫学特性。【方法】 用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＤＥＮＶ４－ｐｒＭ／Ｅ基因,构建重组质粒ｐＧＡＰＺ－ｓｐｒＭ／Ｅ－Ｄ４,转化Ｘ３３酵母菌株,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定目的蛋白表达。切片电镜检测病毒样颗粒,蔗糖密度梯度离心纯化。免疫三组Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠,每组１５只。采用间接ＥＬＩＳＡ检测抗原特异性抗体,间接免疫荧光法检测免疫血清与天然病毒粒子的结合,流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞表型,酶联免疫斑点法（ＥＬＩＳＰＯＴ）检测脾分泌ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α和ＩＬ－１０的细胞。【结果】重组质粒在酵母中以病毒样颗粒形式表达,为直径２０ ～ ３０ ｎｍ的球形颗粒,ＶＬＰ免疫组刺激小鼠产生抗体与灭活病毒组相似,流式及ＥＬＩＳＰＯＴ结果提示ＤＥＮＶ４－ＶＬＰ与灭活病毒组相似,用登革病毒抗原刺激后,分泌ＩＦＮ－γ,ＴＮＦ－α的细胞数目明显增加,各组分泌ＩＬ－１０细胞数目的整体水平均不高。【结论】应用毕赤酵母表达系统成功表达获得了ＤＥＮＶ４－ＶＬＰ,具有良好的免疫原性,可诱导Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠产生有效的体液免疫应答,并能诱导Ｔｈ１型免疫应答而诱导Ｔｈ２型免疫应答较弱。     

辅助生殖技术中ＨＢＶ携带者胚胎发育和ＩＶＦ结局的回顾分析

【目的】 探讨乙肝病毒（ＨＢＶ）感染以及不同感染模式的夫妇胚胎发育情况和体外授精／卵胞浆内单精子显微注射（ＩＶＦ／ＩＣＳＩ）结局。 【方法】 回顾性分析行ＩＶＦ／ＩＣＳＩ治疗, ６３７个ＨＢＶ感染患者周期与１ ８９２个未感染者周期的基础参数以及临床结局,同时进一步比较不同模式 ＨＢＶ感染者之间的临床结局。基础参数包括女方年龄、月经第３天基础内分泌水平、不孕原因、原发还是继发不孕、不孕年限、第几次周期、卵巢刺激方案是长方案还是短方案、ＩＶＦ还是ＩＣＳＩ。临床结局包括比较各组人群在获卵数、受精率、卵裂率、着床率、临床妊娠率、流产率方面有无差异。【结果】 一方或双方感染ＨＢＶ的夫妻与未感染的夫妻在基础参数方面没有显著性差异。获卵数、受精数、卵裂数、优质胚胎数、冷冻胚胎数、着床率、妊娠率以及流产率与未感染组比较没有差异（Ｐ均＞ ０．０５）,不同模式的 ＨＢＶ感染者之间着床率、妊娠率和早期流产率均没有显著差异（Ｐ均 ＞ ０．０５）。【结论】 ＨＢＶ感染夫妇的胚胎继续发育的潜能和ＩＶＦ结局与未感染者相似。不同模式的ＨＢＶ感染者ＩＶＦ结局相似。     

超声造影在肝脏局灶性病变鉴别诊断中的应用价值研究

目的 探讨超声造影对肝脏局灶性病变的诊断价值。方法 回顾性分析了2013-02～2015-02在我院经超声造影诊断为肝脏局灶性病变的90例患者的临床资料,以病理结果为金标准,比较超声造影诊断结果与病理结果的符合率。结果 超声造影检出恶性病灶68个,与病理结果符合率为93.2%(68/73);检出良性病灶24个,与病理结果符合率为82.8%(24/29)。超声造影诊断肝脏良恶性病灶的敏感性、特异性、假阴性率、假阳性率分别为93.2%(68/73)、82.8%(24/29)、6.8%(5/73)、17.2%(5/29)。结论 超声造影技术能提高肝脏良恶性病灶的检出率,可作为肝脏局灶性病变的鉴别诊断方法。     

妊娠中、晚期血清瘦素、β-hCG及ADAM12水平的变化及其与子痫前期发生的关系

目的：探讨妊娠中、晚期妇女血清瘦素、人绒毛膜促性腺激素β亚单位（β-hCG）及解整合素-金属蛋白酶12（ADAM12）的水平变化及这些指标对子痫前期（PE）发生的预测价值。方法：选择2007年6月—2008年5月在福建省妇幼保健院定期产检和住院分娩的189例妊娠妇女,分别测定妊娠中期（20～24周）和妊娠晚期（30～34周）血清瘦素、β-hCG、ADAM12的浓度,其中25例发展为PE者为病例组,164例正常妊娠者为正常组。根据受试者工作特征（ROC）曲线确定预测界限值。结果：①妊娠中期病例组血清β-hCG、ADAM12浓度显著高于正常组（P＜0.001）。②妊娠晚期病例组血清瘦素、β-hCG、ADAM12浓度明显高于正常组（P＜0.001）。③病例组妊娠晚期血清瘦素、β-hCG及ADAM12水平均较妊娠中期升高（P＜0.05）,正常组妊娠晚期血清瘦素水平较妊娠中期升高（P＜0.001）, 而血清β-hCG与ADAM12水平2组间差异无统计学意义（P＞0.05）。④妊娠中期以血清β-hCG≥32 μg/L、血清ADAM12≥818 μg/L为预测界值,两者联合阳性预测值为82.61%,高于单项阳性预测值（P＜0.05）。两者联合ROC曲线下面积与单项ROC曲线下面积比较差异无统计学意义（P＞0.05）。⑤妊娠晚期以血清瘦素≥23 μg/L、血清β-hCG≥37 μg/L及血清ADAM12≥900 μg/L为预测界值,三者联合阳性预测值达92.31%,高于单项阳性预测值（P＜0.05）。三者联合ROC曲线下面积大于单项β-hCG及瘦素ROC曲线下面积（P＜0.05）,但与单项ADAM12曲线下面积差异无统计学意义（P＜0.05）。⑥联合妊娠中、晚期血清β-hCG预测PE发生的阳性率为81.25%;联合妊娠中、晚期血清ADAM12预测PE发生的阳性率为90.48%,均比单一指标的阳性预测值高。结论：检测妊娠中、晚期妇女血清β-hCG及ADAM12水平可作为PE发生的有效预测指标;联合多项指标并动态监测可进一步提高对PE发生的阳性预测值及准确率。     

血液肿瘤患者急性药物性肺损伤的临床特征、诊断及治疗

 目的　回顾性分析急性药物性肺损伤病例的临床特征及诊断治疗经过,总结血液肿瘤患者急性药物性肺损伤的临床规律。方法　从2007年7月至2011年11月南方医院血液科住院患者中选择符合急性药物性肺损伤诊断标准患者,分析其临床特征、诊断治疗及预后转归。急性药物性肺损伤诊断标准：突发胸闷、气促、呼吸困难,排除心源性呼吸困难、支气管哮喘和肺栓塞;影像学以弥漫性肺间质浸润为主;抗感染治疗无改善,病原学检查阴性;停用药物、予糖皮质激素和机械通气治疗有效。结果　诊断急性药物性肺损伤4例,药物分别为伊马替尼、硼替佐米、利妥昔单抗和博来霉素,相应原发病分别为慢性粒细胞白血病、多发性骨髓瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤和外周T细胞淋巴瘤。除1例患者放弃治疗外,其余3例患者均获得临床治愈,随访未见复发。结论　伊马替尼、硼替佐米、利妥昔单抗和博来霉素可导致急性药物性肺损伤,临床表现为急性呼吸窘迫综合征,机械通气和大剂量糖皮质激素治疗可有效改善预后。     

CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白在丹参酮ⅡA诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化中的作用

 目的　探索CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）在丹参酮ⅡA（TanⅡA）诱导急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞分化中的作用。方法　反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot测定TanⅡA干预的NB4细胞的CHOP表达,通过形态学和膜表面标志检测APL细胞的分化,RNA干扰抑制CHOP表达。结果　TanⅡA诱导APL分化过程中伴有CHOP蛋白表达（1.933±0.987）和mRNA表达（1.587±0.815）的增加,相对于对照组蛋白和mRNA表达（0.537±0.110和0.713±0.090）,差异有统计学意义（mRNA水平F＝52.256,P＜0.01;蛋白水平F＝114.852,P＜0.01）;TanⅡA联合RNA干扰抑制CHOP的表达能更加有效的提高APL的分化[（50.767±1.241）% 与（16.167±2.122）%]（F＝989.431,P＜0.05）和凋亡[（89.233±5.581）%与（27.433±2.957）%]（F＝308.961,P＜0.05）。结论　CHOP在TanⅡA诱导APL分化过程中起着负向调节作用,抑制CHOP表达联合TanⅡA可能成为一个更好的治疗策略。