黄芪甲苷通过调节细胞自噬增强贝伐单抗在肺癌细胞系A549中抗肿瘤作用机制的研究

目的：验证黄芪甲苷可以通过调节细胞自噬增强贝伐单抗对肺癌细胞系A549细胞增殖能力的影响,讨论黄芪甲苷在A549中的抗肿瘤作用机制。方法：MTT方法检测黄芪甲苷单药以及与贝伐单抗联合应用对A549细胞增殖能力的影响。Western blot方法分别检测黄芪甲苷以及贝伐单抗处理A549后自噬相关蛋白P62和LC3的表达水平。RT-PCR方法检测黄芪甲苷处理后A549细胞内侵袭相关基因MMP-2和MMP-9的表达情况。ECIS方法检测黄芪甲苷处理后A549细胞黏附与迁移能力的变化。结果：MTT检测结果显示,100 mg/L的黄芪甲苷与750 mg/L的贝伐单抗联合应用对A549细胞的活力有显著的抑制作用,两药联合应用组与对照组相比差异有统计学意义,P值为0.0009。Western blot检测结果显示,黄芪甲苷能够通过影响自噬通路P62和LC3的表达从而抑制自噬的发生。RT-PCR方法显示黄芪甲苷能显著抑制侵袭相关基因MMP-2和MMP-9的表达,黄芪甲苷组与对照组相比差异有统计学意义,P值分别为0.0001和0.001。ECIS结果显示黄芪甲苷能够增强A549细胞的黏附能力并抑制其转移。结论：体外研究结果显示黄芪甲苷能够增强A549细胞的黏附能力并抑制其转移和侵袭,这一过程是通过抑制细胞自噬的发生,而贝伐单抗有较弱的促进自噬发生的作用,当两者联合时较单用贝伐单抗更强的抗肿瘤细胞增殖的作用。     

生血增髓颗粒剂的质量标准研究

目的：建立生血增髓颗粒剂的质量标准。方法：采用ＴＬＣ法对处方中的黄芪、人参、甘草、肉桂进行鉴别;用ＨＰＬＣＥＬＳＤ法测定黄芪甲苷的含量。结果：在ＴＬＣ色谱中均能检出黄芪、人参、甘草和肉桂,黄芪甲苷在２．７７５ｕｇ－１１．１０ｕｇ范围内线性关系良好,平均回收率为９７．７０％,ＲＳＤ为１．５１。结论：所建立的方法对处方中各组成药材可准确、快速地进行定性、定量检测。     

黄芪甲苷提取与测定方法的研究

 目的 研究黄芪甲替提取方法及HPLC检测条件。方法 色谱柱：Inertsil ODS-3(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相：乙腈-水(35：65);流速：1.0 ml·min〈sup〉-1〈/sup〉;蒸发光散射检测器参数：蒸发温度：100°C,雾化温度：80°C,出口温度：60°C,载气流速：1.5ml·min〈sup〉-1〈/sup〉。结果 80%甲醇索氏提取4h,水饱和正丁醇萃取3次,0.15 mol·L·min〈sup〉-1〈/sup〉氢氧化钠或40 %氨水洗涤3次;黄芪甲苷线性范围为4.582～22.913,平均回收率为100.4%,RSD=4.27%。结论 本法简便、灵教、准确。     

新生胶囊的质量标准研究

 目的 建立新生胶囊的质量控制方法。方法 采用TLC对新生胶囊中的黄芪、赤芍、延胡索、洋金花和甘草进行了定性,并用薄层扫描法对黄茂中的黄芪甲苷进行了含量测定。结果 黄芪甲苷在2～7μg·μl〈sup〉-1〈/sup〉范围内呈线性关系,回收率为96.3%,RSD为2.3%。结论该法简单快速,结果可命,可用于控制新生胶囊的质量。     

痫宁片的质量标准研究

采用TLC法对痫宁片中黄芪、三七、白芍及柴胡进行了定性鉴别;并采用薄层扫描法测定黄芪甲甙及人参皂甙Rg1的含量,其平均回收率分别为97.55%、97.30%;RSD分别为3.22%、2.96%.     

正交设计法优选黄芪提取工艺研究

目的 :探讨黄芪最佳提取工艺。方法 :采用正交设计优选 ,以黄芪甲苷为检测指标。结果 :最佳提取条件为 :用 12倍量的水浸泡 0 .5 h,煎煮三次 ,每次 2 h。结论 :本文优选的水提工艺黄芪甲苷提取率达到 90 %以上     

整合生物信息学与实验验证解析黄芪-莪术药对抗肝癌配伍机制

目的 整合生物信息学、网络药理学及分子对接技术预测黄芪-莪术药对抗肝癌配伍机制,并进行细胞实验验证。方法 利用R软件包Limma分析GEO数据库中肝癌基因表达数据,筛选肝癌靶点;通过TCMSP数据库结合文献报道,筛选潜在活性成分;采用TCMSP、SEA和SwissTargetPrediction数据库进行成分靶点预测,筛选抗肝癌靶点;对靶点进行京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析;构建蛋白质-蛋白质相互作用网络、成分-靶点网络、关键成分-靶点-通路网络,并结合网络贡献指数,筛选关键肝癌靶点、关键抗肝癌成分及其靶点、核心抗肝癌成分及其靶点;使用Autodock Vina软件对核心成分与核心靶点进行分子对接;通过细胞实验,验证所预测成分抗肝癌活性及其作用机制。结果 预测得到黄芪-莪术抗肝癌活性成分33个,抗肝癌靶点180个,关键肝癌靶点112个;筛选后得到关键成分29个,对应靶点15个;KEGG通路分析显示关键成分主要通过协同影响细胞周期、细胞衰老、p53信号通路等发挥配伍作用;进一步筛选得到核心成分6个（黄芪中黄芪皂苷II、黄芪甲苷、芒柄花素,莪术中莪术醇、姜黄素、双去甲氧基姜黄素）,对应靶点5个[细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent kinase 1,CDK1）、DNA拓扑异构酶2A（topoisomerase 2A,TOP2A）、极光激酶B（aurora B,AURKB）、检查点蛋白激酶1（check point kinase 1,CHEK1）、AURKA]。细胞实验结果显示,黄芪-莪术药对6个核心成分均对HepG2细胞增殖具有显著的抑制作用（P＜0.01）,且黄芪皂苷II与双去甲氧基姜黄素具有协同增效作用;黄芪皂苷II与双去甲氧基姜黄素可通过下调细胞周期相关蛋白表达水平（P＜0.05、0.01）,进而阻滞细胞周期。结论 黄芪-莪术药对的多种活性成分通过作用于相同或不同靶点抑制细胞周期、p53信号通路等相同或不同相关信号关通路,从而发挥协同配伍抗肝癌作用。     

新肾病1号方调控miR-199b-5p抑制肾小管上皮间充质转化改善肾纤维化的作用研究

目的 研究miR-199b-5p在新肾病1号方抗肾纤维化中的作用。方法 36只大鼠随机分为假手术组、模型组及新肾病1号方低、中、高剂量（9.69、19.38、38.76 g/kg）组和氯沙坦（50 mg/kg）组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用左侧单侧输尿管梗阻方法建立大鼠肾纤维化模型,给予药物干预14 d后,检测各组大鼠肾功能;苏木素-伊红（HE）和Masson染色观察肾脏组织病理变化;对假手术组、模型组和新肾病1号方高剂量组大鼠肾脏组织进行miRNA测序,筛选差异表达miRNAs,qRT-PCR验证,并进行靶基因的基因本体（gene ontology,GO）功能及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析,生物信息学分析miRNAs与上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）、肾纤维化的关联性。免疫荧光法和Western blotting检测肾组织EMT相关蛋白表达情况。结果 与模型组比较,新肾病1号方组大鼠血清肌酐（serum creatin...     

玉屏风软胶囊提取工艺研究

目的研究玉屏风软胶囊的最佳提取工艺。方法以玉屏风组方的药材干浸膏得率和黄芪甲苷为测定指标,采用正交试验方法确定最佳提取工艺。结果最佳提取工艺确定为12倍量水提取二次,每次提取时间分别为1.5、1.0 h。结论本方法确定的技术参数能够满足处方工艺要求,可以有效地保证药品质量和疗效。     

黄芪皂苷的提取及含量测定

目的:研究黄芪药材中黄芪皂苷的提取工艺及含量测定。方法:采用70%乙醇回流提取,水饱和正丁醇萃取,D101大孔吸附树脂富集纯化黄芪总皂苷,硅胶柱层析分离不同的皂苷组分;采用薄层色谱法(TLC)、高效液相-示差检测器法(HPLC-RID)进行皂苷类成分的鉴定和含量测定。结果:从黄芪总皂苷中分离出六种黄芪皂苷化合物(AS-Ⅰ～AS-Ⅵ),其中AS-Ⅰ部分经鉴定主要含皂苷Ⅱ,质量分数为29.4%,AS-Ⅲ部分经鉴定主要含皂苷Ⅳ,质量分数为22.82%。其余4个部分有待于进一步鉴定。结论:此法能较好的分离和纯化黄芪皂苷,TLC和HPLC-RID法操作简便,可作为黄芪皂苷的鉴定和含量测定方法。