雷帕霉素靶向阻断作用对鼻咽癌细胞生长的实验研究

目的 研究雷帕霉素对鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2的生长抑制作用及对细胞周期的影响.方法 采用活细胞计数试剂盒法(cellcounting kit-8,CCK-8法)观察不同浓度雷帕霉素在不同时间点对鼻咽癌细胞的生长抑制作用,光学显微镜下观察其形态学变化,流式细胞仪检测其细胞周期变化及细胞凋亡情况,反转录聚合酶链反应分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白基因的表达情况.结果 雷帕霉索在一定浓度范围内对鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2的生长抑制作用随药物浓度的升高而逐渐增强.光镜下可观察到细胞变圆、密度降低等形态学的改变.流式细胞仪显示,150 nmol/L雷帕霉素作用48 h,CNE-1和CNE-2细胞生长周期均出现G0/G1期阻滞,且变化亦随药物浓度升高而增强;但诱导细胞凋亡作用不明显.反转录聚合酶链反应显示雷帕霉素使CNE-2细胞株哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mRNA的表达下降(t=10.625,P＜0.01).结论 雷帕霉素对鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2具有生长抑制作用,可阻滞细胞周期进展,并可能通过下调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的表达而抑制细胞生长和细胞周期.     

基于TOR—I的CNI撤除方案在肾移植术后免疫抑制治疗中疗效和安全性的Meta分析

目的评价肾移植术后钙调蛋白阻滞剂（CNI）撤除后雷帕霉素受体阻滞剂（TOR—I）免疫抑制替代治疗的疗效和安全性。方法检索MEDLINE、EMbase、SCI、CBM、Cochrane图书馆及其他肾移植相关杂志,纳入肾移植术后基于TOR—I的CNI撤除干预方案疗效和安全性的随机对照试验。检索时间为建库至2009年9月。评价纳入研究的方法学质量,采用RevMan5．0软件进行Meta分析。结果纳入来自10个RCT的14篇报道,A、B级研究各5个。分析结果显示：急性排斥反应发生率1、2、4年的RR（95％CI〉值分别为1．64（1．19,2．27）、1．53（1．06,2．22）及1．21（o．73,1．98）;受者生存率1、2、4年的RD（95％CI）值分别为一0．01（-0．02,O．01）、-0．00（-0．03,0．02）及O．03（一0．01,0．08）;移植物生存率1、2、4年的RD（95％CI）值分别为0．00（-0．02,0．02）、0．00（-0．03,O．04）及O．07（0．01,0．12）;肾小球滤过率WMD（95％CI）值为9．50（2．96,16．03）。结论基于当前证据,肾移植术后CNI撤除后西罗莫司替代治疗与CNI持续治疗相比能更好保护肾脏功能和提高移植物生存率,但对1年急性排斥反应发生率增加、受者生存率无影响及4年急性排斥反应发生率无影响。长期随访结果有待进一步研究证实。     

Sirolimus, bevacizumab, 5-Fluorouracil and irinotecan for advanced colorectal cancer： A pilot study

AIM： To evaluate the efficacy and the safety of combined 5-Fluorouracil, irinotecan, bevacizumab and sirolimus in refractory advanced colorectal carcinoma. METHODS： We initiated a regimen with at day 1 an injection （iv） of bevacizumab at 5 mg/kg, followed by 180 mg/m^2 irinotecan, followed by Leucovorin 400 mg/m^2, followed by a 5-Fluorouracil bolus 400 mg/m^2 and a 46-h infusion 2400 mg/m^2. Sirolimus was given orally as continuous administration of 2 mg twice a day every days. This treatment was repeated every 14 d. RESULTS： A total of 12 patients were enrolled. All patients presented with metastatic disease that had failed at least three lines of chemotherapy that contained oxaliplatin, irinotecan and bevacizumab. Cetuximab failure was also observed in all K-Ras wildtype patients. The median number of cycles was 8.5 （range 2-20） and clinical benefit was observed in eight patients. The median time to progression was 5 mo and the median survival was 8 too. Grade 3 neutropenia developed in four patients, and grade 3 diarrhea and stomatitis in two.CONCLUSION： The combination regimen of 5-Fluorouracil,irinotecan, bevacizumab and sirolimus in advanced colorectal carcinoma after failure of dassical be.absent is feasible and promising. Further evaluation of this combination is required.     

西罗莫司抗肿瘤作用机制研究

西罗莫司(SRL)是一种大环内酯类抗生素免疫抑制剂,近年来国外多项动物实验研究表明,SRL对多种肿瘤具有预防和治疗作用,可能的机制为直接抑制肿瘤细胞生长、增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,抗肿瘤血管生成等.由于其安全性和有效性,有望成为肿瘤化疗的新途径.     

婴儿血管瘤发病过程中的关键信号通路

婴儿血管瘤是婴幼儿期最常见的良性肿瘤,其发病机制尚未阐明.研究证实,异常的血管发生与血管生成是导致婴儿血管瘤增殖的病理学基础.多条关键的信号通路参与婴儿血管瘤的血管发生与血管生成的调控,包括血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体信号通路、Notch信号通路、血管紧张素/Tie信号通路、哺乳动物西罗莫司靶蛋白信号通路、肾素-血管紧张素系统信号通路以及β受体信号通路.这些信号通路相互作用,共同促进婴儿血管瘤的异常增殖.     

雷帕霉素通过促进细胞自噬抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖活性效应

目的探讨雷帕霉素（RAP）抑制表现异常增殖活性的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖活性的作用及其分子机制。 方法使用不同质量浓度的血小板衍生生长因子（PDGF）作为诱导剂处理大鼠主动脉VSMC，构建模拟脉管畸形的体外模型。实验分为对照组、PDGF组、PDGF+RAP组和PDGF+VEC（血管内皮细胞）组，观察对VSMC增殖活性的改变，检测不同处理方式对VSMC自噬水平的影响。两组间比较应用独立样本t检验，多组间比较应用重复测量方差分析，多组mRNA表达量、蛋白表达量比较应用单因素方差分析。 结果细胞增殖检测（CCK-8）和EdU实验结果显示：PDGF处理的VSMC活性呈时间依赖性上升。与PDGF组相比，在48和72 h，PDGF+RAP组细胞增殖活性分别降低了24.8%（0.129 ± 0.010比0.172 ± 0.012，t = 4.787，P = 0.009）和45.1%（0.170 ± 0.012比0.292 ± 0.046，t = 4.431，P = 0.011）；PDGF+VEC组细胞增殖活性分别降低了10.0%（0.155 ± 0.013比0.172 ± 0.012，t = 2.357，P = 0.076）和8.9%（0.266 ± 0.022比0.292 ± 0.046，t = 1.718，P = 0.161）。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹（Western blot）结果显示，与对照组比较，PDGF可抑制平滑肌蛋白抗体-B（Smoothelin-B）表达（0.486 ± 0.057比1.005 ± 0.067，t = 10.192，P = 0.001），促进细胞视黄醇结合蛋白-1（CRBP-1）表达（3.185 ± 0.091比0.991 ± 0.056，t = 35.461，P<0.001）；而在PDGF+RAP组和PDGF+VEC组，Smoothelin-B表达增加（0.857 ± 0.091比0.486 ± 0.057，t = 5.943，P = 0.004；0.563 ± 0.067比0.486 ± 0.057，t = 1.501，P = 0.208），CRBP-1表达减少（1.579 ± 0.042比3.185 ± 0.091，t = 27.707，P<0.001；2.951 ± 0.144比3.185 ± 0.091，t = 2.382，P = 0.076）。与对照组比较，PDGF组LC3B（LC3-Ⅱ/Ⅰ比值）明显下降（0.175 ± 0.003比1.020 ± 0.020，t = 72.263，P<0.001），p62表达显著上升（2.632 ± 0.098比1.005 ± 0.007，t = 28.562，P = 0.001）。与PDGF组比较，PDGF+RAP组的LC3B明显升高（0.316 ± 0.037比0.175 ± 0.003，t = 6.529，P = 0.022），p62蛋白显著降低（1.396 ± 0.070比2.632 ± 0.098，t = 17.771，P<0.001）；PDGF+VEC组LC3B稍有上升（0.206 ± 0.014比0.175 ± 0.003，t = 3.687，P = 0.021），而p62蛋白表达降低（2.400 ± 0.076比2.632 ± 0.098，t = 3.220，P = 0.032）。透射电镜观察发现，PDGF+RAP组、PDGF+VEC组自噬小体较PDGF组上升。 结论高质量浓度PDGF可使VSMC增殖活性上升；雷帕霉素或VEC可通过激活自噬，抑制PI3K/AKT信号通路使细胞活性降低，并促使VSMC向收缩型转变，逆转PDGF的效应。     

西罗莫司治疗静脉畸形研究现状

静脉畸形是临床上最常见的血管畸形,大多数是由于编码TIE2或PI3K基因中的功能获得性体细胞突变引起的。复杂或顽固性静脉畸形的治疗,仍然是临床上面临的难题和挑战。西罗莫司为mTOR抑制剂,是第一个用于静脉畸形的靶向药物,其疗效和安全性近年来颇受关注。本文就西罗莫司用于治疗静脉畸形的相关问题进行综述。     

西罗莫司在肝移植后并发他克莫司所致肾功能损害患者中的应用

目的探讨肝移植后并发他克莫司(FK506)所致肾功能损害时使用西罗莫司的有效性和安全性。方法13例患者肝移植术后均采用以FK506为主的免疫抑制方案预防排斥反应,发生肾功能损害后,停用FK506,或FK506用量减半,同时加用西罗莫司。治疗期间监测患者的血肌酐和尿素氮水平、血西罗莫司和,FK506浓度、肝脏功能及排斥反应的发生情况。结果所有患者在使用西罗莫司后肾脏功能迅速改善,血肌酐水平由(147.6±92.8)μmol/L降到(106.1±71.6)μmol/L(P <0.05);除1例发生急性排斥反应外,其余患者在治疗期间均未发生排斥反应;用药期间的不良反应有高脂血症(4例)及白细胞减少(2例),经对症处理好转。迄今随访4～15个月,肾功能未再出现异常。结论肝移植术后发生药物性肾功能损害时,使用西罗莫司治疗是安全和有效的。