CAR-T制备工艺中PD-1表达的动力学研究

目的 研究嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)制备工艺中抗CD3/CD28磁珠和慢病毒对T细胞中程序性死亡因子1(PD-1)蛋白表达的影响,为改善其体内抗肿瘤活性研究提供理论依据.方法 筛选高表达PD-1细胞系,添加CAR-T制备工艺中抗CD3/CD28磁珠和慢病毒(CAR-GFP、CAR-CD19、CAR-CD30),流式细胞术检测T细胞系PD-1蛋白的变化.利用PD-1刺激剂研究CAR-T制备中PD-1的表达.结果 流式细胞分析显示,抗CD3/CD28磁珠和CAR-CD30慢病毒能显著刺激Jurkat中PD-1蛋白表达[(63.5±4.9)％和(63.0±5.3)％,P?0.01].Jurkat添加0.5:1抗CD3/CD28磁珠刺激后,PD-1表达量在48 h为最大值,之后随时间增加PD-1蛋白表达下降,144 h时下降到(4.5±0.3)％以内.CAR-CD30慢病毒以MOI=3感染复数刺激Jurkat后PD-1蛋白表达比较稳定.T淋巴细胞中添加抗CD3/CD28磁珠能提高约3倍PD-1的表达.结论 低浓度抗CD3/CD28磁珠能短暂性刺激T细胞中PD-1蛋白表达且不影响其活率.     

游离修薄股前外侧血流桥接穿支皮瓣修复四肢 GustiloⅢC型损伤 34例

目的探讨游离修薄股前外侧血流桥接穿支皮瓣( Flow?through+肌肉嵌合穿支皮瓣)修复四肢 GustiloⅢC型损伤的效果。方法选取来宾市人民医院四肢 GustiloⅢC型损伤病人 34例( 2015年 1月至 2018年 6月),采取游离修薄股前外侧 Flow? through+肌肉嵌合穿支皮瓣修复治疗。统计术后恢复情况(切口愈合时间、住院时间、骨折愈合时间)、术前及术后 6个月肢体功能评分、治疗优良率、治疗满意度、并发症发生率。结果 34例切口愈合时间( 11.22±1.69)d、住院时间( 10.09±1.26)d、骨折愈合时间( 3.08±0.35)月;治疗优良率为 94.12%(32/34);治疗满意度为 94.12%(32/34);并发症发生率为 8.82%(3/34)。结论游离修薄股前外侧 Flow?through+肌肉嵌合穿支皮瓣修复四肢 GustiloⅢC型损伤,切口及骨折愈合时间较短,可有效改善病人肢体功能,治疗优良率及满意度较高,且具有安全性。     

基于嵌合抗原受体的肿瘤免疫治疗的研究进展

近来关于嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰T细胞在治疗包括淋巴瘤、白血病、脑胶质瘤、黑色素瘤、肺癌、前列腺癌、胰腺癌及卵巢癌等肿瘤所取得成绩令人振奋。CAR是利用基因工程将能够与肿瘤抗原结合的受体与跨细胞膜的部分和细胞内信号转导的部分结合起来形成的一种新型受体,它可脱离主要组织相容性复合体的限制单独执行杀伤细胞的功能。CAR修饰T细胞因其独特的设计和强效的抗肿瘤作用受到人们的追捧。作者就CAR修饰T细胞在临床治疗中的应用、遇到的问题和对应策略作一综述。     

肿瘤过继性细胞免疫治疗研究进展

肿瘤的过继性细胞免疫治疗作为生物治疗手段的一种,已成为国内外研究的热点。与传统疗法相比,过继性细胞免疫治疗不仅可以直接杀灭肿瘤,而且能调动机体自身的免疫功能来发挥抑制肿瘤的作用。作者就肿瘤的过继性细胞免疫治疗作一综述。     

嵌合抗原受体T细胞在恶性血液肿瘤的临床应用中的研究进展

随着肿瘤免疫学理论和技术的发展,恶性血液肿瘤的治疗迎来新的纪元,过继性细胞免疫治疗(ACI)已成为研究热点.其中,利用嵌合抗原受体(CAR)修饰的T细胞治疗恶性血液肿瘤,在各项试验中均获得显著疗效.笔者拟就CAR-T细胞的构建及靶点选择,近年来与CAR-T细胞治疗相关的体内、外试验和临床研究,以及CAR-T细胞治疗目前尚待解决的问题进行综述.     

靶向BCMA的CAR-T细胞治疗衰弱老年复发难治性骨髓瘤病人的临床观察

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是血液系统常见的恶性肿瘤之一,目前仍不可治愈[1-2]。因此,探索复发难治(refractory/relapsed,R/R)MM病人的治疗方法一直是研究的热点。近几年来,大量的临床研究显示,靶向B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T细胞免疫治疗对R/R MM显示出卓越的治疗效果[3-5]。     

产前诊断中羊水细胞染色体嵌合体的发现与处理

目的探讨如何处理羊水细胞培养中出现的嵌合现象。方法收集2007年1月至2011年6月因各种产前诊断指征行羊膜腔穿刺及染色体检查检出为嵌合体病例共27例。统计嵌合体检出率、类型、相应脐带血分析结果,并对所有病例进行出生后随访。结果嵌合体发生率为0．69％。其中,性染色体XX／XY嵌合体11例（占40．74％）;数目异常嵌合体13例（占48．15％）;结构异常3例（占11．11％）。其中14例行脐血染色体检查,确诊为真性嵌合体1例,终止妊娠;未行脐血染色体检查13个病例中,除2例失访外,余均正常分娩,出生随访未见异常。结论产前诊断羊水细胞嵌合体多为假性嵌合体,各种类型的假性嵌合体一般预后均良好。正确处理和判断羊水细胞培养中出现的嵌合现象,对产前诊断和遗传咨询具有重要的意义。     

HEV保护性基因工程抗体的制备及功能研究

目的：制备抗戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）的人鼠嵌合基因工程抗体并研究其中和保护作用及特性。方法：将已获得的抗HEV鼠源单克隆抗体基因序列进行优化,设计人鼠嵌合的工程化抗体基因序列,将其克隆入真核表达载体;表达载体共转染293F细胞进行表达优化,高效制备基因工程化抗体;通过酶联免疫反应（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、免疫荧光及HEV细胞感染模型,研究工程化抗体的结合能力及中和活性。结果：成功构建基因工程化人鼠嵌合HEV保护性抗体表达载体,在293F表达系统中实现高效表达。抗体表达产率达30 mg/L,亲和力为1.202×10-8 mol/L。免疫荧光检测结果显示抗体能够灵敏、特异地与已感染HEV的 Kernow细胞结合,实时荧光定量PCR检测结果显示抗体可保护易感的C3A细胞不被HEV感染。结论：基因工程化抗体抗体具有高效的HEV结合能力及中和作用,能有效阻断HEV感染,并实现低成本高效表达。