SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立

.学者论坛·在动物实验中解决临床难题···························，·······································································……顾玉东(3)基因〕:程     

实时超声引导下显微手术切除脑深部病灶

目的探讨术中超声引导在脑深部病灶显微手术中的应用价值。方法自2004年开始我们在脑深部病灶显微手术中采用实时超声引导病灶定位,指引手术中皮层入路及路径的选择,并使用术中超声影像动态了解病变位置的变化情况、手术切除的范围,利用实时影像辅助判断病变切除程度。结果28例脑深部病灶,病灶直径为1.0～5.9cm,病理诊断包括蛛网膜囊肿5例,海绵状血管瘤2例,动静脉畸形2例,肿瘤7例,脑内血肿12例。所有病例均显微镜下全切,术后28例患者均恢复良好,神经功能保存良好,无新的神经功能损害,无手术并发症。结论术中超声引导是一种简便有效的脑深部病灶定位方法,操作简便,定位准确,能够实时指引手术路径和动态了解手术切除病灶的范围,与显微神经外科配合能够有效地避免额外的手术损伤,提高手术精度。     

达安基因股份有限公司荣获第九届中国专利金奖

3月22日在贵阳召开的全国知识产权局局长会议传来捷报：我校达安基因股份有限公司的“一种荧光定量聚合酶链式反应方法及其试剂盒”项目荣获了国家知识产权局和世界知识产权组织联合颁发的第九届中国专利金奖，专利号是：ZL99100669．0，其主要发明人是程钢博士。     

木香定性定量鉴别方法研究近况

木香SEMEN MOMORDICAE为葫芦科植物木鳖Momordica cochinchinensis(Lour．)Spreng．的干燥成熟种子。味苦、微甘，性温；有毒。归肝、脾、胃经。具有散结消肿，攻毒疗疮的功效。可以用于疮疡肿毒，乳痈，瘰疠，痔漏，干癣，秃疮。     

慢性乙型肝炎患者基因型以及其病毒载量前C区突变的研究

乙型肝炎病毒是引起慢性病毒性肝炎的重要病原之一，并可导致肝硬化和肝癌发生，严重危害人类健康。根据HBV基因组DNA序列差异〉8％为判断标准，HBV被分为A-G八个基因型，而且其分布有地域性差异。基因型是影响病毒复制，抗病毒治疗疗效以及病毒变异的重要因素，基因型且与疾病的预后、治疗药物的选择等均有一定关系。作通过实时荧光定量PCT、多引物对巢式PCR技术和DNA序列分析，分别测定142例慢性乙肝患血清中HBV DNA的病毒载量、乙肝病毒的基因型以及其前C区（G1896A）突变，旨在探讨浙江部分地区的HBV基因型的分布情况以及各基因型之间的病毒及前C区的突变的差异。为以后选择抗病毒药物治疗打下理论基础；现报告如下。     

骨髓干细胞参与小鼠急性肾小管坏死修复的实验研究

【摘要】 目的 观察在生理和病理情况下,骨髓来源的干细胞(BMSC)能否分化成肾小管上皮细胞。 方法 绿色荧光蛋白(GFP)标记的C57BL/6转基因小鼠提供骨髓细胞。同种无荧光标记的C57BL/6小鼠100只分为正常对照组、全身照射组、缺血再灌注组、骨髓移植组、骨髓移植+缺血再灌注组。受体鼠的骨髓重建经血液常规检查和流式细胞仪检测确认,并采用荧光组织化学、免疫组织化学等方法观察绿色荧光标记的BMSC在受体鼠肾脏的分布及数量。 结果 全身致死剂量γ射线照射未造成小鼠肾脏组织结构和生理功能的明显改变。骨髓移植后第56、84天的受体鼠肾小管中有少量GFP阳性细胞的存在[(78.75±5.99)%、(79.58±4.60)%],激光共聚焦显微镜进一步证实这些细胞位于肾小管,并表达肾小管上皮细胞特异性的功能蛋白megalin。 结论 在生理和病理情况下,骨髓干细胞均可以向肾小管上皮细胞转分化,参与肾小管上皮细胞的更新,并且在急性肾小管坏死的病理条件下,骨髓干细胞的肾向转化率与肾脏受损程度有关。     

间期细胞原位PCR检测B细胞系恶性淋巴瘤

目的：应用原位PCR技术检测B细胞系恶性淋巴瘤。方法：采用免疫球蛋白重链（IgH)基因第三互补决定区（CDR－Ⅲ）的引物，dig-11-dUTP标记物，应用直接原位PCR技术检测Ⅲ-Ⅳ级恶性淋巴瘤的间期淋巴细胞，结果：在初诊的15例恶性淋巴瘤患中，12例检测到IgH基因重排；4例临床表现呈现淋巴瘤性白血病患，治疗后骨髓完全缓解，2例间期细胞原位PCR仍显示有IgH基因重排，6个月复发，结论：间期细胞原位PCR技术能敏感、准确地检测Ⅲ级以上的恶性淋巴瘤，并帮助预测复发，为一有效的基因诊断方法。     

应用荧光定量PCR技术检测淋球菌等性传播疾病病原微生物

在性传播疾病中 ,淋球菌 (ＮＧ) ,沙眼衣原体 (ＣＴ) ,解脲支原体 (ＵＵ)的感染较为常见。我们采用的ＰＣＲ方法结合了荧光探针的体外扩增和检测技术[1,2 ] ,不仅把假阳性率降低到最低限度 ,同时还保留了常规ＰＣＲ的高灵敏性和特异性。通过对人生殖道分泌物样本中以上 3种病原体ＤＮＡ的测定 ,检测了112 2例临床送检可疑标本 ,为上述 3种病原体感染的早期诊断以及性病高危人群的初筛等 ,提供了核酸水平上的参考依据。现报告如下。1　材料和方法1 1　材料1.1 1　标本来源及取材方法　　标本均由本院门诊妇科、皮肤性病科以及泌尿科等科室从…     

双色FISH检测21号染色体及DSCR Cosmid克隆制备

应用Ｂｉｏｔｉｎ－１６－ｄＵＴＰ和Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ分别标记人２１／１３号染色体着丝粒区ＤＮＡ探针和Ｄｏｗｎ综合征核心区ＣｏｓｍｉｄＤＮＡ的探针，与人类正常二倍体染色体进行原位杂交，并用相应的免疫荧光系统检测杂交信号，在两条１３号和两条２１号染色体着丝粒区显示绿色信号；在两第２１号染色体长臂信号。     

血清中过氧化氢的荧光测定法

目的　介绍一种血清过氧化氢的荧光测定法。方法　仪器为日立 6 5 0 - 6 0型荧光分光光度仪 ,激发波长为 36 0mm ,发射波长为 4 6 0mm。精密度批内n =8,OV =2 .82 % ,回收率平均为97.85 % ,设立空白管消除干扰。曲线线性范围 :0～ 10 .16 8μmol/L。正常参考范围 :2 0～ 4 5岁青壮年 (n=5 0 ) :(3.0 0 9± 0 .2 39) μmol/L ,4 5岁以上老年 (n =5 0 ) :(3.4 33± 0 .2 5 6 ) μnmol/L。 结果　临床初步应用提示尿毒症 ,多发性骨髓瘤H2 O2 下降 ,老慢支老年痴呆H2 O2 升高。