逆转录—聚合酶链反应在丁型肝炎病毒感染的应用及意义

本项技术选取丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）ＲＮＡ的非抗原编码区的相对保守区为靶序列,设计两对引物,进行巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＨＤＶＲＮＡ。血清及肝组织采用蛋白酶消化法提取ＲＮＡ。结果发现９８例各型病毒性肝炎血清中,ＨＤＶ—Ｍ阳性组ＨＤＶＲＮＡ检出率为５６６％（３０／５３）,ＨＤＶ—Ｍ阴性组为８９％（４／４５）（Ｐ＜００１）;ＨＤＡｇ或／及抗ＨＤＩｇＭ阳性血清测定ＨＤＶＲＮＡ的阳性率为５７１％（２８／４９）,抗ＨＤ阳性血清的阳性率为５００％（２／４）;９例ＨＤＶ—Ｍ阳性肝组织测定ＨＤＶＲＮＡ阳性者６例,２例ＨＤＶ—Ｍ阴性肝组织均阴性。本项技术是在分子水平上检测病毒核酸、操作简便、稳定、可靠、特异性高、重复性好,可以作为ＨＤＶ血清学指标的佐证和补充,肝组织ＨＤＶＲＮＡ的测定可应用于回顾性研究,在临床病原诊断、抗病毒疗效判定、病毒复制、重叠感染等研究方面提供重要实验依据。     

RT-PCR检测慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞集落bcr/abl mRNA的表达

采用ＲＴＰＣＲ 技术对ＣＭＬ 患者骨髓细胞１４ ｄ 的细胞集落群和部分１４ ｄ 或２８ ｄ 的单个细胞集落ｂｃｒ／ａｂｌ ｍ ＲＮＡ 表达进行分析。结果显示：所检测的骨髓细胞集落ｂｃｒ／ａｂｌ 基因的表达均呈阳性,即为ＣＭＬ 集落,与细胞遗传学分析结果一致。该方法为研究ＣＭＬ 造血前体细胞基因表达及其诊断、治疗监测提供了灵敏、有效的分析手段;并可作为研究ＣＭＬ 发病、治疗及筛选抗ＣＭＬ 药物较为理想的方法。     

Satellite-cell-derived nerve growth factor and neurotrophin-3 are involved in noradrenergic sprouting in the dorsal root ganglia following peripheral nerve injury in the rat

Injury to a peripheral nerve induces in the dorsal root ganglia (DRG) sprouting of sympathetic and peptidergic terminals around large-diameter sensory neurons that project in the damaged nerve. This pathological change may be implicated in the chronic pain syndromes seen in some patients with peripheral nerve injury. The mechanisms underlying the sprouting are not known. Using in situ hybridization and immunohistochemical techniques, we have now found that nerve growth factor (NGF) and neurotrophin-3 (NT3) synthesis is upregulated in satellite cells surrounding neurons in lesioned DRG as early as 48 h after nerve injury. This response lasts for at least 2 months. Quantitative analysis showed that the levels of mRNAs for NT3 and NGF increased in ipsilateral but not contralateral DRG after nerve injury. Noradrenergic sprouting around the axotomized neurons was associated with p75-immunoreactive satellite cells. Further, antibodies specific to NGF or NT3, delivered by an osmotic mini-pump to the DRG via the lesioned L5 spinal nerve, significantly reduced noradrenergic sprouting. These results implicate satellite cell-derived neurotrophins in the induction of sympathetic sprouting following peripheral nerve injury.     

丙型肝炎诊断试剂的研究

本文用分子生物学方法根据中国人HCV基因特点进行多肽合成,研究丙型肝炎C区、E区酶标试剂的临床应用以及与抗C 100-3试剂的比较,并以 RT双 PCR的方法建立了HCV RNA的检测试剂及临床应用。结果发现抗-CP试剂敏感性、特异性均优于抗C100-3,从临床检测结果看,在自然人群中感染率抗-CP为2.8％,抗C100-3为2.1％,特别在输血后肝炎中,抗 CP阳性率高达 71.7％～75.9％。因此提出对HCV的诊断确立与愈后判断各类试剂有各自的作用,不能只根据某一试剂的某一次结果而简单地否定 HCV感染。HCV RNA测定,建立了5’末端非编码区及非结构区(NS 1),采用双PCR观察结果抗-CP阳性者绝大多数为RNA阳性,并提示将有助于抗病毒药物疗效的观察指标。     

RT-PCR法检测SARS的临床诊断意义

目的 探讨早期、快速诊断严重急性呼吸综合症(SARS)的实验室诊断方法。方法 在己经确诊为SARS的100例患者中随机抽取40例作为实验组;随机抽取40例正常人作为对照组:从标本中提取RNA,经反转录和巢式PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析,并将序列与SARS冠状病毒和其他己知冠状病毒进行同源性分析。结果 对照组的阳性率为1%,病人组的阳性率为80%,经卡方检验X2=5.1,P<0.05有显著性差异。结论 该方法对临床早期诊断有一定的意义。     

γ-氨基丁酸受体γ1亚基在大鼠前庭终器的表达

目的：研究γ-氨基丁酸受体γ1亚基在大鼠前庭终器的表达。方法；运用RT-PCR技术检测大鼠前庭终器编码GABAA受体亚基因表达。以大鼠脑组织RNA为阳性对照。结果：扩增出标志GABAA受体基因表达的PCR产物。结论:GABA受体γ1亚基在大鼠前庭终器有表达，为证明GABA是前庭系统重要神经递质之一提供了支持。     

hMAM RNA 和CEA RNA T-PCR检测乳腺癌外周血微转移

目的应用RT-PCR法检测乳腺癌患者外周血中的human ammaglobin(MAM)mRNA和CEA RNA表达情况.方法用RT-PCR法,检测52例乳腺癌患者外周血中hMAM RNA和CEA RNA的表达情况,另抽取28例乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血标本作为对照.结果 52例乳腺癌患者外周血中hMAM RNA和CEA RNA的阳性率分别为30.8％、34.6％.28例乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血中hMAM RNA、CEA RNA表达均为阴性.两者的阳性表达均与患者的腋淋巴结状况、TNM分期差异有显著性意义(P<0.05).而与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型以及激素受体状况等均无显著性差异(P＞0.05).结论 hMAM RNA、CEA RNA均可作为标志物来检测乳腺患者外周血中微转移,联合检测可增加外周血中循环肿瘤细胞的检测率.     

肝组织多药耐药基因高表达与结肠癌肝转移的相关性研究

目的　探索早期检测肝组织多药性耐药基因对结肠癌肝转移的预测价值。方法　取裸鼠 4 0只 ,用人结肠癌SW4 80细胞系制作裸鼠原位结肠癌肝转移模型。模型建立的第 10天肝活检取左右肝叶各2mm3 组织 ,用实时荧光定量PCR方法检测多药耐药基因 (multidrugresistancegene,mdr- 1mRNA)的表达 ;模型建立的第 5周观察裸鼠肝脏是否形成肉眼转移灶。结果　经实时荧光定量RT -PCR检测肝活检组织mdr- 1基因 ,在存活的 36只裸鼠中 2 2例高表达 ,平均CT值 (Cyclethreshold ,即反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数 )为 2 5 90 1,平均拷贝数为 4 2 7× 10 7/ugRNA ,并高表达的 2 2只裸鼠均有肉眼肝转移灶形成 (10 0 % ) ;mdr - 1基因低表达 (平均CT值 33 36 8,平均拷贝数 2 11× 10 5)及无表达的 14只裸鼠中 ,仅 1例形成肉眼肝转移灶 (7 1% ) ,其余 13例均无肉眼肝转移灶形成 (P <0 0 1)。结论　结肠癌肝活检肿瘤细胞mdr- 1mRNA基因高表达与异时的肝转移灶形成有明显的相关性 ,提示检测结肠癌肝组织多药性耐药基因的高表达可以预测异时的肝转移灶形成。     

应用RT-PCR检测CK19表达提高乳腺癌前哨淋巴结微转移检出的研究

目的:评价乳腺癌前哨淋巴结活检的临床意义,应用细胞角蛋白cytokeratin19(CK19)RT-PCR检测法提高其的敏感性及准确率.方法:随机选取1999年10月至2003年3月住院的乳腺癌患者73例,其中2001年1月至2003年3月的29例,对前哨淋巴结(SLN)进行了CK19 RT-PCR检测.采用专利兰进行SLN识别.RT-PCR法检测CK19 mRNA表达.结果:SLN识别成功67例,成功率为91.8%(67/73).对上述67例的SLN转移的常规病理诊断的敏感度68.8%(22/32),准确率85.1%(57/67).在行CK19 RT-PCR的29例中,检测出常规病理未检出的微小转移病例8例.敏感度90.0%(18/20),准确率93.1%(27/29).结论:前哨淋巴结活检可有效判断乳腺癌腋淋巴结转移状态,应用CK19 RT-PCR检测SLN的微转移,可提高敏感度及准确率.