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91.
目的:联合应用RNAdraw和Sfold软件设计并筛选低毒且高效抑制Hela细胞Ku70 mRNA表达的反义寡核苷酸。方法:从GenBank获得人Ku70 mRNA全序列,联合应用RNAdraw与Sfold软件,根据最小自由能原理设计多条20 nt的反义寡核苷酸,脂质体转染后MTT法检测其非序列特异性细胞毒性,选择毒性最小者并转染Hela细胞,RT-PCR检测转染前后Ku70 mRNA的表达水平并进行比较。结果:靶向Ku70 mRNA设计6条20 nt的反义寡核苷酸,其中NO.1 序列非特异性毒性最低,对Hela细胞的生长抑制率(50、100和200 nmol•L-1浓度组分别为4.8%、9.5%和10.2%)与脂质体组比较差异无显著性(P>0.05),用毒性最低序列转染Hela细胞后使Ku70 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),条带强度和面积与未转染组比较分别下降81.6%和77.6%。结论:联合应用计算机软件RNAdraw和Sfold对设计反义核酸有较大的指导意义,能实现较高的命中率,设计的反义寡核苷酸能有效抑制Hela 细胞Ku70mRNA的表达。 相似文献
92.
偏头痛大鼠脑内5-羟色胺1F和诱导型一氧化氮合酶基因的表达变化及针刺的干预效应 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:前期实验已证实针刺治疗偏头痛疗效优越。观察针刺对偏头痛大鼠脑内5-羟色胺1F和诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的调控作用。方法:实验于2005-11/2006-05在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室完成。①选用SD大鼠40只,按随机数字表法分为4组(n=10),除正常对照组外,其余3组均复制大鼠偏头痛模型。模型对照组只造模,不作其他处理;针刺治疗组造模后进行针刺;针刺预防组针刺后造模电刺激20min。针刺方法:针刺大鼠双侧太冲、阳陵泉穴20min。采用疏密波,电流强度0.3~0.6mA,留针20min,1次/d,共5次。②实验完毕后取脑干及三叉神经节匀浆,采用反转录-聚合酶链反应法测定5-羟色胺1F和诱导型一氧化氮合酶mRNA表达。结果:进入结果分析正常对照组10只,模型对照组、针刺治疗组、针刺预防组各9只,共脱失3只。①与正常对照组比较,模型对照组大鼠诱导型一氧化氮合酶mRNA表达显著增强(P<0.01),5-羟色胺1FmRNA表达显著减弱(P<0.01)。②与模型对照组比较,针刺预防组和针刺治疗组诱导型一氧化氮合酶mRNA表达明显减弱(P<0.01),5-羟色胺1FmRNA表达显著增强(P<0.01)。结论:针刺调控5-羟色胺1F和诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达可能是针刺防治偏头痛的分子机制。 相似文献
93.
幽门螺杆菌cagA基因和胃上皮核因子-κB表达与慢性胃痛证型的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨cagA阳性幽门螺杆菌和胃上皮细胞核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)表达以及慢性胃痛中医证型之间的关系。方法:收集57例脾胃湿热证、24例肝气犯胃证和19例脾胃虚寒证慢性胃痛患者胃窦粘膜标本,采用特异引物PCR法检测cagA基因,免疫组化方法分析胃上皮细胞NF-κB P65蛋白的表达。结果:1.cagA+菌株检出率为44.4%(36/81),其中脾胃湿热证51.2%(22/43),肝气犯胃证36.4%(8/22)和脾胃虚寒证37.5(6/16)。2.与阴性组比较,H.pylori阳性组胃上皮NF-κB P65蛋白表达有统计学意义(P<0.05)。3.与cagA-菌株比较,CagA能提高NF-κB P65表达(P<0.05)。4.在3种中医证型之间,cagA+菌株感染率和NF-κB P65蛋白的表达无统计学意义(P>0.05)。结论:H.pylori感染、CagA提高了NF-κB P65蛋白的表达,但是CagA和NF-κB P65表达不能作为预测中医证型的指标。 相似文献
94.
血管紧张素对增生性瘢痕成纤维细胞纤维连接蛋白合成的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其Ⅰ型、Ⅱ型受体阻断剂和钙调神经磷酸激酶(CaN)的阻滞利环胞素A(CsA)对增生性瘢痕来源的成纤维细胞纤维连接蛋白mRNA和蛋白表达的作用。方法:体外分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,分别将一定浓度的AngⅡ(10^-9~10^-5mmol/L),和AngⅡ10^-6mmol/L加上不同阻滞剂losartan、PD123319、环胞素A(浓度均为10^-5mmol/L)加入细胞培养液中刺激48h,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)及Westernblot印迹方法检测增生性瘢痕成纤维细胞纤维连接蛋白(FN)的mRNA及蛋白表达。结果:体外成功地培养增生性瘢痕成纤维细胞。经AngⅡ刺激48h后,FN mRNA和蛋白表达量明显增高,增高程度与AngⅡ浓度呈正比;加入losaartan和环胞素A后,FN原mRNA和蛋白表达量较单用AngⅡ组下降,而加入PD123319后,FNmRNA和蛋白表达量较单用AngⅡ组无明显改变。结论:AngⅡ可促增生性瘢痕成纤维细胞的FN合成,可能在增生性瘢痕的发展过程中起重要作用,该作用主要通过AngⅡ的Ⅰ型受体介导完成,该作用可能与CaN信号通路有关。 相似文献
95.
微小病毒B19感染可能是过敏性紫癜的病因 总被引:7,自引:2,他引:5
目的:探讨人类微小病毒(human parvovirus)B19感染与过敏性紫癜的关系.方法:对26例过敏性紫癜患儿(病例组)分别利用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)和PCR进行抗人类微小病毒B19-IgM和人类微小病毒B19-脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)测定,另设28名健康儿童作为对照组.结果:病例组人类微小病毒B19-IgM或人类微小病毒B19-DNA阳性6例(23%),而对照组只有1例(4%)人类微小病毒B19-DNA阳性,两组差异有统计学意义(P<0.05).结论:人类微小病毒B19感染与过敏性紫癜有一定关系,可能是其发病原因之一. 相似文献
96.
妊娠高血压综合征相关基因检测的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
刘国成 《中华围产医学杂志》2004,7(4):236-237
妊娠高血压综合征(简称妊高征),是导致孕产妇死亡的主要原因之一,目前其病因研究已达到分子水平,且发现妊高征发生和发展与人类白细胞抗原(HLA)密切相关,本研究应用顺序特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence specific primers,PCR-SSP)技术,建立妊高征相关基因的检测方法,探讨其临床价值。 相似文献
97.
原发性肝癌(HCC)易发生肝内转移及血行转移.早期判断血行转移对于估计预后及评估手术价值具有较大意义.正常成人血清碱性磷酸酶(ALP)主要来自肝脏,来自骨组织的ALP一般少于总活性的一半.现已知人体含肠型(IALP)、胎盘型(PALP)、生殖细胞型(GALP)和非特异组织型(TUALP)ALP.其中TUALP在基因表达后经过不同的修饰形成肝、肾、骨等次级同工酶;外周血清中IALP含量很少.2005年1月~2006年1月,我们用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测了42例HCC患者外周血中IALP mRNA的表达情况,旨在探讨其与血行转移的关系. 相似文献
98.
99.
结核分支杆菌镜检、培养和PCR技术诊断结核病的临床评估 总被引:6,自引:1,他引:5
目的:评估结核分支杆菌PCR、培养、镜检对结核病诊断的临床效果。方法:对1217例临床可疑结核病人用PCR、培养和镜检三种方法的阳性检出率进行比较,结果:不同临床标本用PCR技术诊断结核病,其敏感性高于培养和涂片镜检,阳性检出率分别为:88.7%,43.4%,26.5%。结论:通过三种方法比较分析,说明PCR技术是一种速度快,检出率高的检测结核分支杆菌的重要方法,对结核病的诊断有重要的参考价值。 相似文献
100.
细胞黏附分子(ICAM-1)在大鼠弥漫性脑损伤中的表达意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨ICAM—1在大鼠弥漫性脑损伤中的表达及意义。方法采用Marmarou方法获得大鼠弥漫性脑损伤模型.实时定量RT—PCR、S—P免疫组化法分别测定ICAM—1蛋白和mRNA在外伤后不同时间点的表达变化.干湿重法测脑组织含水量.组织切片苏木精一伊红染色观测炎性细胞浸润情况。结果外伤组与假手术对照组比较,ICAM—1蛋白表达分别于伤后6h明显升高.72h达到高峰(P〈0.05),ICAM—ImRNA表达3h即明显升高,72h达最高峰,其后下降。7d时仍高于假手术对照组(P〈0.01)。伤后脑组织含水量较假手术对照组高,同时炎性细胞大量聚集。结论大鼠脑外伤诱导了ICAM—1的表达.ICAM—1通过介导炎性细胞的浸润可能参与了伤后脑水肿的形成过程. 相似文献