猪APOBEC3F基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定

目的 克隆猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide 3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载体实现其在体外表达与鉴定。方法分离4头21周龄,体质量25～30kg的雌性健康五指山猪的外周血单个核...     

RPS14基因重组慢病毒载体的构建及其在MUTZ-8细胞中的表达

目的 构建携带人RPS14基因重组慢病毒载体获得稳定产毒的细胞,并观察其在人MDS细胞株MUTZ-8细胞中的表达.方法 通过反转录方法,获得目的基因RPS14;将目的基因克隆入慢病毒表达质粒pGC-FU Vector,构建含有RPS14基因的重组慢病毒载体pGC-FU RPS14,经PCR、酶切及测序鉴定其正确性;在...     

癌胚抗原相关细胞黏附分子6-shRNA及双自杀基因yCDglyTK的联合基因载体构建

目的 构建新型靶向联合双自杀基因载体pCDNA3.1-yCDglyTK-CEACAM6-shRNA.方法 根据已知的癌胚抗原相关细胞黏附分子6(Carcinoembryonic antigen associated cell adhesion molecule 6,CEA CAM6)序列构建含有hU6启动子和CEACAM6-shRNA表达框的重组质粒,并将CEACAM6-shRNA表达框(含hU6启动子)通过双酶切方式亚克隆至双自杀基因栽体pCDNA3.1-yCDglyTK,构建新型靶向联合双自杀基因载体pCDNA3.1-yCDglyTK-CEACAM6-shRNA.通过酶切、测序等鉴定重组质粒.结果 实验所构建的最终裁体酶切产物所得的片段大小为7.5 kb,与预期片段一致.测序证实最终载体与pCDNA3.1-ycDglyTK-CEACAM6-shRNA序列一致.结论 成功构建新型靶向联合双自杀基因载体pCDNA3.1-yCDglyTK-CEACAM6-shRNA.     

应用AdMax载体系统构建SCL基因重组腺病毒表达载体

目的 用AdMax载体系统构建人SCL基因重组腺病毒载体,为研究SCL基因对ICC样细胞功能恢复奠定基础.方法 采用PCR方法从含人SCL基因质粒中扩增SCL基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-EGFP/SCL,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1、3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC315-SCL经HEK293细胞扩增,纯化后测定病毒滴度.结果 PCR结果和Western blotting检测证实pDC315-SCL重组腺病毒载体构建成功,滴度达到1×1010 PFU/mL.结论 AdMax载体系统可成功构建pDC315-SCL重组腺病毒载体.     

针对小鼠VEGFA基因的siRNA干扰载体的构建和慢病毒包装

目的 针对NM_001025250.3,NM_001025257.3,NM_009505.4,构建4个针对靶基因小鼠VEGFA(血管内皮生长因子A)的小干扰RNA(siRNA)干扰载体,并将其重组转成慢病毒载体.方法 根据靶基因设计并合成4对siRNA干抚序列,将siRNA干扰序列克隆到pcDNA6.2-GW/EmGF...     

临沂口岸医学媒介生物本底调查名录

目的 为全面了解临沂口岸医学媒介生物的种群组成及分类地位,为本口岸媒介生物防治及卫生口岸创建提供科学依据.方法 1998年以来,坚持对所辖区域媒介生物的监测和调查.结果 鉴定出媒介昆虫2纲9目21科51属83种.结论 通过调查与鉴定,建立了临沂口岸医学媒介生物本底名录,为今后实施口岸媒介生物监测和控制提供了便利.     

Prevention of influenza virus shedding and protection from lethal H1N1 challenge using a consensus 2009 H1N1 HA and NA adenovirus vector vaccine

Vaccines against emerging pathogens such as the 2009 H1N1 pandemic virus can benefit from current technologies such as rapid genomic sequencing to construct the most biologically relevant vaccine. A novel platform (Ad5 [E1-, E2b-]) has been utilized to induce immune responses to various antigenic targets. We employed this vector platform to express hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) genes from 2009 H1N1 pandemic viruses. Inserts were consensuses sequences designed from viral isolate sequences and the vaccine was rapidly constructed and produced. Vaccination induced H1N1 immune responses in mice, which afforded protection from lethal virus challenge. In ferrets, vaccination protected from disease development and significantly reduced viral titers in nasal washes. H1N1 cell mediated immunity as well as antibody induction correlated with the prevention of disease symptoms and reduction of virus replication. The Ad5 [E1-, E2b-] should be evaluated for the rapid development of effective vaccines against infectious diseases.     

支持向量机在建立冠心病早期诊断模型中的应用

目的 探索支持向量机方法在建立冠心病早期诊断模型中的应用,为冠心病危险因素在早期诊断中的合理应用提供理论依据.方法 首先应用logistic回归分析方法筛选冠心病危险因素,将有统计学意义的危险因素与24 h动态心电图检查结果共同构建支持向量机模型,并应用测试数据集对各模型的诊断能力进行评价.结果 24 h动态心电图检查结果与危险因素共同构建的支持向量机模型较单独应用24 h动态心电图诊断有更好的诊断准确率和灵敏度,特异度较低.对应用不同变量构建的模型进行比较,应用24 h动态心电图,结合年龄、性别、糖尿病、高血压构建的模型诊断效果较好,准确率为70.35%,灵敏度为90.27%,特异度为34.76%.结论 应用支持向量机可以建立合适的冠心病早期诊断模型;结合主要危险因素进行冠心病的早期诊断可以提高诊断准确率.     

人源S100A1蛋白的表达纯化与鉴定

目的 构建pBV220-S100A1表达栽体,表达并纯化人源S100A1蛋白,为进一步研究人源S100A1蛋白相关的生物学功能及应用于临床诊断奠定基础.方法 采用全基因合成法合成人源S100A1基因;通过GeneBank查询人源S100A1蛋白的氨基酸序列,进行序列优化设计,同时引入Ecor Ⅰ 和BamH Ⅰ 酶切位...