慢病毒转染调控FoxM1表达对人肝内胆管细胞癌增殖、侵袭及MMPs表达的影响

目的 通过实验探讨慢病毒转染调控FoxM1表达对人肝内胆管细胞癌（ICC）增殖、侵袭能力及基质金属蛋白酶（MMP）-9和MMP-2表达的影响。方法 Western blot检测ICC细胞株HCCC-9810、RBE及SSP-25的FoxM1蛋白表达水平,选取表达量较低者作为上调 FoxM1 细胞株,较高者作为下调细胞株...     

肝癌缺失基因家族与肿瘤关系的研究进展

肝癌缺失基因(deleted in liver cancer genes,DLCs)家族存在于人体多种组织中,其表达产物为RhoGTP酶活化蛋白.该基因家族在多种肿瘤中低表达或不表达,主要通过负性调控Rho蛋白(RhoA,Cdc42)和黏着斑蛋白及两者下游效应因子的活性,抑制细胞骨架形成、黏着斑重组,在肿瘤细胞生长、增殖、侵袭和转移过程中发挥重要作用.雌、孕激素和胰岛素可通过转录后修饰途径调控DLCs蛋白活性.在此类激素相关肿瘤的发生发展中发挥作用.     

siRNA下调AEG-1表达对神经母细胞瘤细胞MMP-9的表达及侵袭能力的影响

目的 观察下调Astrocyte elevated gene-1(AEG-1)基因对神经母细胞瘤细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达以及细胞侵袭能力的影响.方法 根据RNA干扰原理,设计合成AEG-1 siRNA.通过荧光定量RT-PCR和Western blotting观察神经母细胞瘤细胞中AEG-1基因mRNA和蛋白下调情况;采用Western blotting观察下调AEG-1表达对神经母细胞瘤细胞中MMP-9蛋白表达的影响;通过侵袭实验(Transwell法)观察下调AEG-1表达对神经母细胞瘤细胞侵袭能力的影响.结论 采用AEG-1 siRNA转染神经母细胞瘤细胞,下调细胞内AEG-1的mRNA和蛋白表达(P＜0.05)后MMP-9蛋白表达抑制率分别为63.1%和58.9%.此外下调AEG-1表达使细胞侵袭能力明显减弱(P＜0.05).结论 AEG-1基因下调使神经母细胞瘤细胞中MMP-9的蛋白表达明显减少、活性明显减弱,同时使细胞的侵袭能力降低.由此可见AEG-1在肿瘤细胞的侵袭转移中可能扮演重要角色,将会成为神经母细胞瘤基因治疗的新靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of astrocyte elevated gene-1 (AEG-1)siRNA induced inhibition of invasion in neuroblastoma cells.Methods A small interference RNA(siRNA) targeting to AEG-1 mRNA(AEG-1 siRNA) was constructed and transfected into neuroblastoma cells with Lipofectamine 2000.A non-specific siRNA(control siRNA) and non-treatment were used as negative control group and blank group.The expression of AEG-1 mRNA was detected by RT-PCR.The proteins of AEG-1 and MMP-9 were detected by Western blotting.Cell invasion after AEG-1 knockdown was observed by Transwell assay.Results Compared with the control group,the expression of AEG-1 mRNA and protein were significantly decreased in the cells transfected with AEG-1 siRNAs(P＜0.05).AEG-1 knockdown by siRNA markedly decreased the expression of MMP-9 protein by 63.1% in neuroblastoma cells and the ability of cell invasion (P＜0.05).Conclusions The expression of AEG-1 mRNA is down-regulated by AEG-1 siRNA in neuroblastoma cells.Moreover,knockdown of AEG-1 expression in human neuroblastoma cells significantly inhibits the expression of MMP-9 protein and cell invasion.Therefore,AEG-1 may play a key role for MMP-9 activity and cell invasion,making it a potential target gene for gene-therapy in neuroblastoma.     

The significance of proline-rich tyrosine kinase2 (Pyk2) on hepatocellular carcinoma progression and recurrence

Understanding the precise molecular mechanisms that trigger liver cancer cell migration and invasion could develop novel therapeutic strategies targeting cancer cell invasion to increase the sensitivity to current treatment modalities. In the current study, 49 patients with hepatocellular carcinoma (HCC) were included prospectively. Liver tumour and adjacent non-tumour tissues were detected for the expression of Proline-rich tyrosine kinase 2 (Pyk2), focal adhesion kinase (FAK), ezrin and fibronectin at protein and/or gene levels. Correlation between the expressions of Pyk2/FAK with the clinical pathological data was analysed. Protein expression of Pyk2 was also examined in a nude mice orthotopic liver tumour model with higher metastatic potential. There were 59% (29 out of 49) and 57% (28 out of 49) of HCC patients with higher levels of Pyk2 and FAK protein/gene expression, respectively. We observed a positive correlation between the protein and gene expression levels of Pyk2 and FAK (P=0.000, r=0.875). Overexpression of Pyk2 and FAK was significantly correlated with shorter disease-free survival. Patients with higher levels of Pyk2/FAK had larger tumour size and advanced Edmonson grading. In the animal studies, Pyk2 overexpression was found in infiltrative tumour cells and lung metastatic nodules. In conclusion, overexpression of Pyk2 and FAK was found in nearly 60% of HCC patients and was significantly correlated with poor prognosis. The significance of Pyk2 in HCC invasiveness was confirmed by animal studies.     

RhoC表达与体外乳腺癌细胞系侵袭行为的相关性

目的研究RhoC在不同转移能力乳腺癌细胞系中的表达及其与乳腺癌侵袭行为的相关性。方法利用逆转录-聚合酶链反应、Western blot、细胞爬片免疫组织化学和免疫荧光组织化学染色检测乳腺癌低转移细胞系MCF-7和高转移细胞系MDA-MB-231中RhoC mRNA和蛋白表达水平。构建RhoC真核表达载体,并转染乳腺癌低转移细胞系MCF-7;利用Matrigel穿膜侵袭实验检测转染后细胞的体外侵袭能力,划痕修复实验检测运动迁移能力,组织化学染色检测微丝骨架结构的变化,并利用Western blot检测Akt磷酸化水平变化。结果RhoC在不同转移能力的乳腺癌细胞系中呈不同程度表达,在高转移细胞系MDA-MB-231中高表达,在低转移细胞系MCF-7中低表达,差异有统计学意义(P<0.01)。基因转染过表达RhoC后,乳腺癌细胞的体外侵袭能力明显增强,正义转染组穿膜细胞数(56.88±4.18)与其相应空载体组(23.77±3.64)、反义组(23.12±3.22)和未转染对照组(28.44±2.48)比较,明显增多(P<0.01);运动迁移能力明显增强,正义转染组24 h划痕修复率(58.28%±2.14%)明显高于转染空载体组(28.23%±2.62%)、反义组(22.36%±2.73%)和未转染对照组(30.18%±2.86%),差异有统计学意义(P<0.01);组织化学染色显示,正义转染组细胞内肌动蛋白多聚体减少,微丝骨架重构;此外,RhoC正义转染组细胞p-Akt水平升高。结论RhoC过表达促进乳腺癌细胞的体外侵袭能力,并与乳腺癌细胞系转移潜能正相关,有望成为阻断乳腺癌转移的新靶点。     

神经母细胞瘤细胞Boyden小室体外侵袭模型的建立及意义探讨

目的 建立神经母细胞瘤细胞Boyden小室体外侵袭模型.对其实验条件、方法 及模型的意义进行探讨.方法 将不同浓度(1.5×105、2.0×105、2.5×105、3.0×105/ml)的100μl 4组神经母细胞瘤细胞系置入Boyden小室侵袭模型上室,分别培养24、36、48、60h,观察不同浓度的细胞在不同时间穿透基质胶聚碳酸酯膜的细胞数,用Boyden小室测定4组神经母细胞瘤细胞系侵袭的能力.结果 Boyden小室侵袭模型显示4组不同细胞系的侵袭能力不完全相同,在第24 h透过ECM胶聚碳酸酯膜的细胞较少,随时间的延长而增多,在48h前后增幅最明显;同时,随细胞浓度的增高,透过细胞数也增加,但细胞浓度大于2.5×105/ml时,透过ECM胶聚碳酸酯膜的细胞数变化不显著;在同一条件下,有骨髓转移能力的细胞系其侵袭能力大于无骨髓转移能力的细胞系.结论 本实验成功建立了神经母细胞瘤细胞Boyden小室体外侵袭模型,该模型对体外神经母细胞瘤细胞侵袭能力的测定和研究及对探明神经母细胞瘤的转移机制和影响因素具有重要意义.     

Snail，CK18和Fn在胃癌中的表达及其与上皮间质转化的关系

目的观察上皮间质转化的标记分子Snail、细胞角蛋白18（cytokeratin 18，CK18）和纤维连接蛋白（fibronection，Fn）在胃癌中的表达及其与胃癌恶性生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学sP法检测87例胃癌组织中Snail、CK18和Fn3种蛋白的表达情况。结果87例胃癌组织中Snail的表达高于其在正常胃黏膜组织中的表达，CK18的表达低于在正常胃黏膜组织中的表达，间质Fn表达在胃癌组织中明显增高，Snail、CK18和Fn三者的表达存在相关性。结论Snail在胃癌组织中高表达，诱导胃癌组织上皮向间质表型转化，促进胃癌的侵袭转移。     

海绵窦内侧壁的显微解剖与扩大经蝶窦入路治疗侵袭海绵窦的垂体腺瘤（附103例分析）

目的研究海绵窦内侧壁结构的解剖特点，并探讨采用扩大经蝶窦入路治疗侵袭海绵窦垂体腺瘤的方法。方法在10具成人新鲜尸头上模拟扩大经蝶窦手术入路，观察海绵窦内侧壁结构的解剖特点。根据解剖学研究结果，指导临床采用扩大经蝶窦手术入路治疗侵袭海绵窦的垂体腺瘤103例。结果垂体侧方的海绵窦内侧壁薄弱，仅有一层疏松的纤维组织结构。颈内动脉是扩大经蝶窦入路海绵窦内所见的主要结构，可分为5段，有3个主要分支。颈内动脉海绵窦段主要的分支有脑膜垂体干、海绵窦下动脉和被囊动脉。向内侧走行的脑膜垂体干和被囊动脉是经蝶窦入路中较易损伤的血管。手术显微镜下全切除肿瘤62例（60．2％），次全切除38例（36．9％），大部切除3例（2．9％）；无手术死亡；手术并发症包括短暂性脑脊液鼻漏5例，暂时性脑神经功能损伤4例，垂体功能低下3例，颈内动脉损伤2例，永久性尿崩症1例。术后行放射治疗17例，γ刀治疗15例，药物治疗13例。随访3个月～8年，2例出现肿瘤复发而予以γ刀治疗。无再手术病例。结论扩大经蝶窦入路是切除侵袭海绵窦垂体腺瘤理想的入路；了解颈内动脉海绵窦段及其分支在解剖形态上的变化，对于减少术中出血，确保术中安全，具有重要意义。