在体或离体大鼠肝细胞经消炎痛处理后对半乳糖胺损伤的反应

我们曾观察到消炎痛预处理能使大鼠对半乳糖胺肝损伤产生明显的保护作用,本研究利用大鼠肝细胞原代培养的方法进一步观察了达一现象。结果提示,消炎痛整体处理可使肝细胞本身获得抗损伤的能力,而这种抗损伤能力的形成可能有赖于肝细胞外其它因素的参与。     

对构建特色医院文化的思考

21世纪的医院是文化的医院,21世纪医院的竞争是文化的竞争,谁能构建出具有特色的医院文化,谁就能赢得竞争主动权。构建特色医院文化,核心是形成共同的理想和精神支柱;关键是打造“学习型”医院组织;根本是树立以人为本、诚信求实的服务理念;目标是树立良好的医院形象;基础是加快医院信息化建设。     

骨髓间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究

目的：通过体外细胞的培养方法将骨髓间充质干细胞由骨髓血中分离出来并加以纯化，进一步在体外培养条件下研究其增殖及生长特征，从而为探讨后续利用组织工程学方法修复肌肉骨骼系统组织缺损的可能性提供实验基础。方法：从骨髓血中提取间充质干细胞，体外培养扩增，再以相差显微镜、电镜观察并绘制生长曲线。结果：（1）通过离体培养，可以使体内环境下低丰度的骨髓间充质干细胞实现数目扩增。（2）体外培养条件下骨髓间充质干细胞具有成纤维细胞的生长特性。（3）体外单层培养条件下贴壁生长的骨髓间充质干细胞会出现“返祖现象”。（4）骨髓间充质干细胞内细胞器与其生物活性变化相一致。结论：骨髓间充质干细胞体外培养成功为今后利用自体间充质干细胞通过组织工程学方法修复肌肉骨骼系统的组织缺损提供功能细胞奠定了基础。     

Neuroprotection by both NMDA and non-NMDA receptor antagonists in in vitro ischemia

We have investigated the relative contributions of oxygen and glucose deprivation to ischaemic neurodegeneration in organotypic hippocampal slice cultures. Cultures prepared from 10-day-old rats were maintained in vitro for 14 days and then deprived of either oxygen (hypoxia), glucose (hypoglycaemia), or both oxygen and glucose (ischaemia). Hypoxia alone induced degeneration selectively in CA1 pyramidal cells and this was greatly potentiated if glucose was removed from the medium. We have also characterised the effects of both pre-and post-treatment using glutamate receptor antagonists and the sodium channel blocker tetrodotoxin (TTX). Neuronal death following either hypoxia or ischaemia was prevented by pre-incubation with CNQX, MK-801 or tetrodotoxin. MK-801 or CNQX also prevented death induced by either hypoxia or ischaemia if added immediately post-insult, however, post-insult addition of TTX prevented hypoxic but not ischaemic damage. Organotypic hippocampal slice cultures are sensitive to both NMDA and non-NMDA glutamate receptor blockade and thus represent a useful in vitro system for the study of ischaemic neurodegeneration paralleling results reported using in vivo models of ischaemia.     

人脐血中血管内皮祖细胞体外扩增和鉴定的实验研究

目的：探讨从人脐血中分离、培养、体外扩增血管内皮祖细胞(EPC)的方法及体外进行EPC的鉴定。方法：采用密度梯度离心法从脐血中分离EPC，体外分别培养在包被有FN和不包被FN的培养皿中，采用免疫组织化学技术(SABC法)鉴定培养贴壁细胞表面标志CD31、CD34及KDR的表达；流式细胞仪检测细胞表面标志CD133及表达CD133细胞比例。结果：包被FN的培养皿中细胞贴壁及增殖均比未包被的多，免疫组化染色CD31、CD34及KDR均呈阳性，培养第4天流式细胞仪检测CD133^ 占21．3％。结论：密度梯度离心法可用于体外分离脐血中EPC进行实验研究，FN对于体外培养EPC有非常重要的作用。     

哌嗪雌酚酮对新生大鼠头盖骨成骨细胞的影响

目的 了解新合成化合物——哌嗪雌酚酮对体外培养成骨细胞的影响。方法 应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、von Kossa染色法、流式细胞术及RT-PCR观察哌嗪雌酚酮对体外培养成骨细胞的增殖、分化、矿化结节形成、细胞周期及I型胶原蛋白表达的影响。结果 哌嗪雌酚酮可刺激成骨细胞增殖,刺激骨结节形成(10-7mol/L组,P<0.05)。结论 哌嗪雌酚酮具有刺激体外培养成骨细胞增殖和晚期分化成熟的功能。     

小鼠牙髓干细胞培养及诱导分化

目的 :分离、培养小鼠牙髓干细胞并诱导分化 .方法 :采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液 ,细胞密度调整为 1× 10 4/孔细胞 ,用 2 0 0mL·L -1胎牛血清的α MEM培养液培养 14d ,挑出细胞克隆消化传代 ,TGF β、BMP2 、bFGF细胞因子诱导 ,PCR检测DSPP的mRNA的表达 .结果 :小鼠牙髓细胞呈集落状生长 ,克隆形成率为 1.6 -2 .5个 / 10 4细胞 ,所形成的集落细胞结合紧密 ,细胞体积小、胞核大 ,经细胞因子刺激后的细胞表达DSPP的mRNA .结论 :培养的小鼠牙髓集落状生长的细胞具有干细胞增殖快等特性 ,细胞因子可诱导小鼠牙髓干细胞定向分化     

脐血单个核细胞在半固体培养基中向神经元样细胞的分化

为观察脐血单个核细胞在甲基纤维素半固体培养基中的生长情况 ,常规方法分离脐血单个核细胞 ,接种于含 SCF、GM-CSF、G-CSF、IL-3、IL-6、EPO的甲基纤维素半固体培养基中培养。第 5 d发现有 6～ 10个细胞组成的小集簇 ,散在分布 ,细胞形态无变化。第 11d有神经元样细胞生长 ,与集簇并存。以后神经元样细胞逐渐生长 ,但集簇生长停滞 ,第 16d仍未发现集落形成。收集细胞 ,进行神经元特异烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)免疫细胞化学测定 ,显示少量神经元样细胞 NSE、NF阳性。该结果提示在半固体培养基中 ,脐血单个核细胞可向神经元样细胞分化 ,传统的用于集落培养的半固体培养基可能也适合脐血中其它细胞成分的生长     

Isolation and differentiation of embryonic stem cells from BALB/c mouse

Objective To invest the efficient method which can culture and induce embryonic stem cells to neurocyte in vitro. Methods Isolate the blastula of 3.5 d from BALB/c species mouse. Culture the cells from inner cell mass (inner cell mass, ICM) which were isolated by mechanical method on the mouse embryonic fibroblaste cell (MEF) feeder layer or 0.1% gelatin coated dishes. The stem cells were identified by characterized morphology, alkaline phosphatase stain, differential potency in vivo and immunochemistry stain. The isolated cells were differentiated by serial induction method that mimicking the intrinsic developmental process of the neural system. Results The isolated cells were positive for alkaline phosphatatse and SSEA-1 (stage specific embryonic antigen 1). Moreover they were identified pluripotent by differentiation in vivo. Therefore the isolated cells presented the characters of ESCs. Then the isolated cells were able to differentiate into neurocytes in vitro. Conclusion Mouse embryonic stem cells isolation, culture and differentiation system has been established.     

脂肪干细胞免疫学性状的初步实验观察

目的初步研究脂肪干细胞(Adiposederivedstemcells,ADSC)表面免疫分子的表达以及体外免疫调节功能,以期为组织工程提供同种异体种子细胞来源。方法体外培养人脂肪抽吸术中获取的脂肪干细胞,体外培养至第二代,流式细胞仪检测免疫分子HLA、HLA、B7-1、B7-2、CD40的表达。1×105个/孔ADSC细胞分别刺激单一异体淋巴细胞或混合双向淋巴细胞反应,观察淋巴细胞增殖情况。同时观察ADSC经IFN-γ作用后,免疫分子表达与淋巴细胞增殖的调节情况。结果ADSC表达HLA类分子,但未检测到HLA类分子阳性表达。B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD28、CD40未见明显阳性表达。人IFN-γ刺激48h后,HLA类分子表达明显增高,HLAI表达未见明显增高。异体或经IFN-γ作用的ADSC均未能刺激异体淋巴细胞增殖。同样数量的ADSC可明显抑制双相混合淋巴细胞增殖,经IFN-γ作用后抑制作用未见明显减弱。结论ADSC具有一定的体外调节淋巴细胞反应的能力,有可能成为组织工程同种异体细胞来源。