Rb蛋白在多发性骨髓瘤细胞中的表达及临床意义

目的：探讨多发性骨髓瘤（MM）细胞Rb蛋白的表达与临床化疗的关系,方法：采用免疫细胞化学S－P法,借助抗Rb蛋白单抗,对47例多发性骨髓瘤患者进行了检测,结果：47例中有11例（11／47）呈阴性表达,阴性表达率30．6％,免疫人型各亚型之间差异显著无显著性（P＞0．05）,所有患者采用常规化疗方案化疗个疗程,Rb蛋白阴性组化疗有效率为36．4％,而Rb蛋白阳性组总有效率为77．9％,两组比较差异显著（P＜0．05）,多变量分析显示,除去血清β2－微球蛋白,乳酸脱氨酶,肌酐三因素对化疗结果的影响,Rb蛋白阴性可作为影响化疗疗效的独立负性因素,结论：Rb蛋白阴性表达在多发性骨髓瘤细胞中较易见,且Rb蛋白不表达者对化疗疗效差。     

83例大肠癌多药耐药基因的检测

目的：研究复发及多源发大肠癌多药耐药基因的表达。方法：采用逆转录－多聚酶链式反应（RT－PCR）技术对83例大肠癌多药耐药（mdr-1)基因进行了检测。结果：原发大肠癌mdr-1基因表达率30．9％（12／42）,复发大肠癌mdr-1基因表达率61．3％（19／31）,两者有显著差异（P＜0．05）。多源发大肠癌mdr-1基因阳性表达率60％（6／10）。mdr-1基因表达的阳性和阴性与耐药与否的总符合率达10＋16／31（P＜0．05）。结论：大肠癌组织mdr-1基因的表达水平,这对正确判断病人耐药能力的高低,合理术后化疗,判断预后都具有重要意义。     

使用人粘附分子—2启动子的衰变加速因子重组基因表达载体的构建及意义

目的：构建含人粘附分子-2（ICAM-2）启动子的人衰变因子（DAF）重组基因的真核细胞表达载体,运用于转基因动物克服异种器官排斥的研究。方法：双酶切本室巳构建质粒pGEM-7Zf-DAF,得到含人ICAM-2启动子及DAFcDNA序列的插入片段（3.7Kb）;双酶切pcDNA3真核表达载体,得到不含病毒启动子、含筛选基因Neo的一段DNA作为载体序列（4.4Kb）;两段DNA进行连接反应后转化细菌;阳性转化菌落质粒抽提及酶切鉴定。根据人的ICAM-2启动子、DAFcDNA序列,设计引物行PCR特异扩增检验。结果：特异性3组酶切重组表达载体,产生符合设计的相应条带;PCR扩增出特异的318bp及1.7Kb的DNA片段,符合设计要求。结论：含人ICAM-2启动子的DAF重组基因表达载体获得成功。     

小鼠对HBV DNA疫苗的免疫应答及细胞因子的免疫佐剂效应

目的 :观察编码小鼠 IL- 2及 IL- 12的真核表达载体 ,对 HBV DNA疫苗诱导 Balb/ c小鼠 (H- 2 d )免疫应答的调节作用及其对稳定表达 HBs Ag的小鼠肥大细胞瘤 P815细胞 (P 815 - HBV- S)成瘤性的影响。　方法 :肌内注射HBV DNA疫苗及细胞因子真核表达载体 ;背部皮下接种 P 815 - HBV - S细胞 ,观察成瘤情况 ;EL ISA法测定血清抗HBs;4h5 1 Cr释放法检测小鼠脾细胞 CTL 活性。　结果 :免疫 8周后 ,以 p CR3.1- S、p CR3.1- S+IL- 2及 p CR3.1-S+IL- 12免疫的小鼠血清 ,45 0 nm A值分别为 0 .87± 0 .1、1.98± 0 .17及 1.6 7± 0 .15 ,均较 p CR3.1组显著提高(P<0 .0 5 )。CTL 细胞杀伤活性分别为 (5 0 .5± 6 .4) %、(6 1.9± 7.1) %及 (73.3± 8.8) % ,后两组与 p CR3.1- S组比较差异均显著 (P<0 .0 5 )。脾细胞悬液经抗 CD4+ 单克隆抗体处理后 ,CTL细胞杀伤活性分别为 (48.3± 5 .9) %、(5 6 .2± 7.5 ) %和 (75 .6± 9.1) % ,抗 CD8+ 单克隆抗体处理后分别为 (10 .6± 1.4) %、(13.6± 1.9) %和 (16 .9±2 .3) %。对照组成瘤率为 10 0 % ,p CR3.1- S组小鼠成瘤率为 12 .5 % ,p CR3.1- S+IL- 12真核表达载体组成瘤率为0 ,对照组平均存活期和 6周后存活率分别为 2 8.4天和 0天。后两组分别 >38.2天及 45     

莱姆病螺旋体重组质粒pBX1的DNA序列分析及其在大肠杆菌中的诱导表达

目的　为莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制提供靶抗原。方法　采用 377型 DNA自动测序仪对莱姆病螺旋体重组质粒 p BX1的插入片段进行 DNA序列测定 ,并通过计算机软件对其进行限制性内切酶酶谱分析。然后将重组质粒 p BX1在大肠杆菌中进行诱导表达 ,并对其表达产物进行免疫印迹分析。结果　1重组质粒 p BX1插入片段大小为 477bp,其核苷酸序列与文献报道的 p83基因全序列相应区段相比较仅有一个碱基的变异 ,2成功绘制了该插入片段的限制性内切酶酶谱 ;3重组质粒在大肠杆菌中诱导表达后获得了 2 9kd的融合蛋白 ;4Western- blotting分析表明该融合蛋白能与莱姆病多价抗血清呈强阳性印迹反应。结论　该研究成功地对莱姆病螺旋体 83kd抗原蛋白特异性区段进行了基因重组和表达 ,为进一步研究其在莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制中的应用奠定了基础。     

New vaccine production platforms used in developing SARS-CoV-2 vaccine candidates

The threat of the current coronavirus disease pandemic, caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2), is accelerating the development of potential vaccines. Candidate vaccines have been generated using existing technologies that have been applied for developing vaccines against other infectious diseases. Two new types of platforms, mRNA- and viral vector-based vaccines, have been gaining attention owing to the rapid advancement in their methodologies. In clinical trials, setting appropriate immunological endpoints plays a key role in evaluating the efficacy and safety of candidate vaccines. Updated information about immunological features from individuals who have or have not been exposed to SARS-CoV-2 continues to guide effective vaccine development strategies. This review highlights key strategies for generating candidate SARS-CoV-2 vaccines and considerations for vaccine development and clinical trials.     

神经钙黏蛋白在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的探讨神经钙黏蛋白在宫颈癌中的表达及其临床意义。方法随机选取2017年8月-2019年8月浙江省肿瘤医院全子宫切除术宫颈标本存档蜡块150例,分为宫颈鳞癌组76例、宫颈上皮内瘤变组50例和正常宫颈组织组24例,统计分析3组患者的N-cad、N-cadherin、HIF-1α、p53、p63表达情况,并分析宫颈鳞癌组患者的临床病理特征与N-cad表达的差异。结果宫颈鳞癌组患者的N-cad、N-cadherin、HIF-1α、p53表达阳性率均显著高于宫颈上皮内瘤变组、正常宫颈组织组,p63表达阳性率显著低于宫颈上皮内瘤变组、正常宫颈组织组,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈上皮内瘤变组患者的N-cad、N-cadherin、HIF-1α、p53表达阳性率均显著高于正常宫颈组织组,p63表达阳性率显著低于正常宫颈组织组,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈鳞癌组临床分期Ⅱ期患者的N-cad表达阳性率显著高于Ⅰ期患者,组织学分级G2-G3级患者的N-cad表达阳性率显著高于G1级患者,差异均有统计学意义(P<0.05);但不同年龄、淋巴结转移患者的N-cad表达阳性率之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论神经钙黏蛋白在宫颈癌中的表达升高,能够将一种新的潜在靶分子提供给宫颈癌的治疗。     

Reactivity of human sera in a sensitive, high-throughput pseudovirus-based papillomavirus neutralization assay for HPV16 and HPV18

Sensitive high-throughput neutralization assays, based upon pseudoviruses carrying a secreted alkaline phosphatase (SEAP) reporter gene, were developed and validated for human papillomavirus (HPV)16, HPV18, and bovine papillomavirus 1 (BPV1). SEAP pseudoviruses were produced by transient transfection of codon-modified papillomavirus structural genes into an SV40 T antigen expressing line derived from 293 cells, yielding sufficient pseudovirus from one flask for thousands of titrations. In a 96-well plate format, in this initial characterization, the assay was reproducible and appears to be as sensitive as, but more specific than, a standard papillomavirus-like particle (VLP)-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The neutralization assay detected type-specific HPV16 or HPV18 neutralizing antibodies (titers of 160-10240) in sera of the majority of a group of women infected with the corresponding HPV type, but not in virgin women. Sera from HPV16 VLP vaccinees had high anti-HPV16 neutralizing titers (mean: 45000; range: 5120-163840), but no anti-HPV18 neutralizing activity. The SEAP pseudovirus-based neutralization assay should be a practical method for quantifying potentially protective antibody responses in HPV natural history and prophylactic vaccine studies.     

人白细胞介素2基因在酵母菌中的表达及发酵研究

将一带有人白细胞的介素2cDNA 的大肠杆菌——酵母菌穿酸质粒转化啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae 8534-8c,再将转化子与另一啤酒酵母 Saccharomyces cervisiae CSH83—L 进行杂交,得到二倍体菌株.同时,还研究了单倍体转化子和二倍体菌株在表达重组白细胞介素2上的差异以及不同培养条件下二倍体菌株的表达情况,确定了合适的发酵条件,并进行了五立升自动发酵罐的发酵研究.     

诱发口腔鳞癌细胞凋亡嵌合基因表达载体的构建

目的：获取含凋亡基因fas表达调控元 件cdc25A片段和fas开放阅读框架的cdc25A -fas嵌合基因，构建和鉴定真核表达载体pAdTrack-CMV-cdc25A -fas和pAdTrack-cdc25A-fas，为将口腔鳞癌细胞固有的 促细胞增殖信号转变为促细胞凋亡信号的研究奠定基础。方法:根据fa s基因、cdc25A已知序列设计合成引物，采用PCR技术从pBLF58-1质 粒中扩增得到嵌合基因cdc25A-fas；然后定向克隆至真核表达载 体pAdTrack-CMV和pAdTrack，分别转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞；卡那霉素筛 选阳性克隆；进行PCR、酶切鉴定和序列分析。结果：PCR扩增得到特异 的 1 603 bp的cdc25A-fas片段；筛选并鉴定得到含pAdTrac k-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25A- fas的大肠杆菌E.coli DH5α阳性克隆。结论:成功构建了真核表 达载体pAdTrack-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25 A-fas,为下一步研究其在肿瘤基因治疗中的作用奠定基础。