全文获取类型
收费全文 | 574篇 |
免费 | 21篇 |
国内免费 | 30篇 |
专业分类
儿科学 | 5篇 |
妇产科学 | 1篇 |
基础医学 | 75篇 |
口腔科学 | 12篇 |
临床医学 | 59篇 |
内科学 | 128篇 |
皮肤病学 | 14篇 |
神经病学 | 7篇 |
特种医学 | 11篇 |
外国民族医学 | 2篇 |
外科学 | 9篇 |
综合类 | 147篇 |
预防医学 | 85篇 |
眼科学 | 6篇 |
药学 | 46篇 |
中国医学 | 10篇 |
肿瘤学 | 8篇 |
出版年
2024年 | 2篇 |
2023年 | 4篇 |
2022年 | 8篇 |
2021年 | 5篇 |
2020年 | 4篇 |
2019年 | 4篇 |
2018年 | 3篇 |
2017年 | 6篇 |
2016年 | 9篇 |
2015年 | 10篇 |
2014年 | 15篇 |
2013年 | 14篇 |
2012年 | 19篇 |
2011年 | 24篇 |
2010年 | 20篇 |
2009年 | 23篇 |
2008年 | 53篇 |
2007年 | 24篇 |
2006年 | 41篇 |
2005年 | 80篇 |
2004年 | 78篇 |
2003年 | 57篇 |
2002年 | 28篇 |
2001年 | 33篇 |
2000年 | 18篇 |
1999年 | 11篇 |
1998年 | 7篇 |
1997年 | 9篇 |
1996年 | 5篇 |
1995年 | 8篇 |
1994年 | 1篇 |
1993年 | 1篇 |
1991年 | 1篇 |
排序方式: 共有625条查询结果,搜索用时 0 毫秒
61.
甲基丙烯酸环氧丙酯诱导基因突变的序列分析 总被引:1,自引:1,他引:0
本文采用双链DNA直接测序法对GMA诱导的质粒PBR322突变体(AP~RTc~s)的部分基因片段进行序列测定,结果表明:①GMA诱导的基因突变类型为缺失型和插入型,缺失的频率(28%)远大于插入频率(18%),C和G的缺失远大A和T的缺失。碱基缺失和插入导致移码突变。②GMA诱导的基因序列的改变,其作用方式并非随机。5′- CNCCN-3′为高度敏感的作用序列(专一性序列)。③GMA在三个富含C和G区域诱导很强的突变作用,尤其在397-418区段,突变频率高达36.3%,可认为该区域为热点区。 相似文献
62.
基于丙型肝炎病毒NS5B基因序列分析的基因分型 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:建立基于丙型肝炎病毒(HCV)NS5B基因序列分析的基因分型方法,对上海地区慢性丙型肝炎进行基因分型。方法:用HCVRNA实时荧光定量检测试剂盒对慢性丙型肝炎患血清标本的HCV RNA水平进行定量分析。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和套式-PCR扩增HCV RNA阳性的41份标本的部分HCV NSSB区基因,PCR产物经回收、纯化后直接进行测序分析。从GenBank中下载25份不同基因型的HCV原型序列,用NSSB区222bp的基因片段构建系统进化树,对临床标本相应的HCVNS5B区序列进行分析。结果:基于HCVNS5B基因序列的系统进化树分析,可成功地对本组41份标本进行基因分型。分型结果显示,1b型占85.4%(35/41),2a型占12.20%(5/41),3a型占2.44%(1/41)。结论:基于HCVNSSB区基因序列的系统进化树分析是一种可靠和方便的HCV基因分型方法。上海地区的HCV基因型以1b型为主。 相似文献
63.
目的 建立灵敏、特异的套式逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)快速检测黄热病毒方法。方法 参照黄热病毒标准株D17序列设计套式引物,并检索国际基因序列数据库初步验证其特异性,随后对镁离子、dNTP及引物浓度,PCR反应条件进行优化,建立稳定、特异的套式RT-PCR快速检测黄热病毒方法,并以同属于黄病毒科的登革病毒1~4型、流行性乙型脑炎病毒为对照,验证其特异性。结果 外引物扩增可获得404 bp左右的特异性扩增片断,阴性对照毒株未见设计大小的扩增片断,但可见非特异性片断;内引物扩增可获得349 bp左右片断,阴性对照无扩增条带。结论 套式RT-PCR可快速、灵敏、特异的检测黄热病毒。 相似文献
64.
目的:探讨A_(el)01亚型血清学和分子机制。方法:采用微柱凝胶法和试管法检测先证者ABO表型,多功能非放射性磷酸盐偶联法检测N-乙酰半乳糖胺基转移酶的反应活性,荧光PCR法进行ABO血型基因分型,Sanger一代测序法对第1~7外显子进行测序。结果:先证者血清学试验检测为A_(el),血清和红细胞上均无N-乙酰半乳糖胺基转移酶活性,ABO血型基因分型结果为AO2,基因测序结果确认为A_(el)01/O02,第1~7外显子测序结果为该样本在A101/O02的基础上发生了239G>A的突变,该突变为首次发现。结论:根据血型血清学结果推测,该突变导致了A抗原弱表达。基因分型预测ABO血型表型,基因测序是直接获得ABO亚型的证据,最终须结合ABO血清学方法来确定其ABO血型。 相似文献
65.
多重耐药产PER-1型超广谱β内酰胺酶阴沟肠杆菌的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
目的研究多重耐药阴沟肠杆菌017对β内酰胺类抗菌药物耐药的机制。方法使用双纸片扩散法和改良三相试验对阴沟肠杆菌017进行β内酰胺酶的表型检测,并用聚合酶链反应(PCR)扩增β内酰胺酶基因,对PCR产物进行测序确定基因型别。结果阴沟肠杆菌017经双纸片扩散法证实产超广谱β内酰胺酶(ESBLs),经三相试验证实该菌除了产ESBLs外,还同时产AmpC酶。PCR产物经测序长度为579bp,与GENEBANK的PAPER1A基因序列100%符合,确定为PER-1基因。结论阴沟肠杆菌017耐β内酰胺类抗菌药物的主要原因是PER-1型ESBLs和AmpC酶所致。 相似文献
66.
肺炎链球菌不同菌株自溶酶基因的克隆、序列分析及重组表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的克隆肺炎链球菌自溶酶(LytA)的基因序列,并进行重组表达。方法分别提取不同临床分离株的基因组DNA,根据已知肺炎链球菌野生R6株LytA基因序列设计引物,进行PCR扩增,将获得的目的基因片段克隆人原核表达质粒,然后测序;利用生物信息学方法,对不同临床分离株LytA基因序列进行比较分析,同时进行LytA基因的重组表达。结果从不同临床分离株的基因组中均扩增出完整的LytA基因片段,成功构建了重组质粒pGEX-4T-1-LytA。比较不同临床分离株LytA基因的DNA序列及推测的氨基酸序列,发现各株LytA基因序列及氨基酸序列间存在差异。通过异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导,LytA基因在大肠埃希菌JM109中得到高效表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示pGEX-4T-1-LytA融合蛋白相对分子质量约62000,与理论预测一致。结论序列分析发现各分离株的LytA基因序列及氨基酸序列间存在差异,但同源性极高,推测LytA基因序列保守,可用于疫苗研发。 相似文献
67.
68.
69.
目的探讨体外建立健康人外周血B淋巴母细胞样细胞系(B-LCLs)的优化方法及其影响因素。方法用EB病毒感染健康人外周血中分离的单个核细胞(PBMC),加入CD40激发型抗体(5C11)、CpGDNA免疫调节基因序列以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A(CysA)抑制T淋巴细胞的活性。光学显微镜下观察B-LCLs的形态特征,利用流式细胞术分析B-LCLs膜表面分子CD19的表达水平。结果PBMC经EBV感染3周后转化成永生化B-LCLs。转化后的B淋巴母细胞体积增大积聚成团,可进一步分裂增殖并长期传代培养。CD40激发型抗体(5C11)及CpG免疫调节基因序列联合EBV感染人PBMC,明显地提高了转化效率,转化后的LCLs保持了成熟B淋巴细胞的生物学特征。结论CD40信号激发和CpG免疫调节基因序列联合运用能有效地促进EBV对人B淋巴细胞的转化及体外建系。 相似文献
70.
目的对门诊分离出一株α溶血的革兰阳性球菌(命名为NC588)进行鉴定。方法对NC588进行基本形态观察、生化反应分析和部分16S rDNA测定。结果该菌多数呈双排列,少见单个或链状,无动力,无荚膜,直径为1.2~2.0μm;发酵葡萄糖产酸不产气,触酶和氧化酶阴性,不还原硝酸盐;可生长pH为3.5~7.5,最适pH为6.0~6.5;15℃和45℃不生长,20~40℃生长良好;35℃普通气体条件下培养24h见菌落呈针尖样,48℃后出现α溶血。高度耐糖肽类抗生素,对万古霉素和替考拉宁MIC值分别为256、128μg/mL。部分16S rDNA序列测定和同源性分析显示,NC588与马脲片球菌的同源性为100%。结论NC588鉴定为马脲片球菌。 相似文献