Single-molecule protein arrays enabled by scanning probe block copolymer lithography

The ability to control the placement of individual protein molecules on surfaces could enable advances in a wide range of areas, from the development of nanoscale biomolecular devices to fundamental studies in cell biology. Such control, however, remains a challenge in nanobiotechnology due to the limitations of current lithographic techniques. Herein we report an approach that combines scanning probe block copolymer lithography with site-selective immobilization strategies to create arrays of proteins down to the single-molecule level with arbitrary pattern control. Scanning probe block copolymer lithography was used to synthesize individual sub-10-nm single crystal gold nanoparticles that can act as scaffolds for the adsorption of functionalized alkylthiol monolayers, which facilitate the immobilization of specific proteins. The number of protein molecules that adsorb onto the nanoparticles is dependent upon particle size; when the particle size approaches the dimensions of a protein molecule, each particle can support a single protein. This was demonstrated with both gold nanoparticle and quantum dot labeling coupled with transmission electron microscopy imaging experiments. The immobilized proteins remain bioactive, as evidenced by enzymatic assays and antigen-antibody binding experiments. Importantly, this approach to generate single-biomolecule arrays is, in principle, applicable to many parallelized cantilever and cantilever-free scanning probe molecular printing methods.     

肿瘤基因治疗的应用及挑战

基因治疗是一种新的肿瘤治疗手段.适当基因靶点的选择,安全和高效的基因运载系统,以核酸为基础被开发基因治疗途径的研究逐步深人,使肿瘤的基因治疗研究进展迅猛,部分基因治疗方案已进入临床试验阶段.然而,肿瘤基因治疗仍然存在风险.本文对肿瘤基因治疗的应用及所面临的挑战进行综述.     

脉冲场凝胶电泳用于军团菌分型能力的评价

目的 评价脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术用于军团菌属不同种(Legionella species)以及不同血清型菌株的分型能力.方法 选用117株10个嗜肺军闭菌血清型,30种非嗜肺军团菌的参考菌株和我国环境分离菌株,采用Asc Ⅰ内切酶酶切,进行PFGE.从电泳条带的数量和分布、PFGE的分型力、分辨率和与流行病学资...     

CD150在成人乙型肝炎疫苗无应答者体外外周血单个核细胞中的表达

目的 了解信号转导淋巴细胞激活分子(SLAM)CD150在乙型肝炎(乙肝)疫苗无应答者体外外周血单个核细胞(PBMC)中的表达.方法 对2007年9月至2009年12月曾行乙肝疫苗接种、HBV标志物检测均阴性的202例患者进行标准程序再免疫,再接种后第7～12个月检测抗-HBs效价.根据抗-HBs效价判定无应答者18例(男11例,女7例);选取应答者18例(男9例,女9例)作为对照.采集无应答者与应答者静脉血18 mL,淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离PBMC,流式细胞仪测定细胞膜表面分子CD150.采用SAS统计软件包进行t检验以及Spearman 秩相关检验.结果 乙肝疫苗免疫后,在特异性刺激剂rHBsAg作用下,PBMC中CD150的表达无应答者为(39.20±10.66)%,高于应答者的(23.73±12.41)%,差异有统计学意义(t=2.1947,P<0.05);CD3+CD4+细胞中CD150的表达无应答者为(49.64±11.94)%.亦高于应答者的(37.73±11.02)%,差异无统计学意义(t=1.7175,P>0.05).在非特异性刺激剂植物血凝素(PHA)作用下,PBMC中CD150的表达在无应答者为(39.21±7.37)%,高于应答者的(23.18±12.68)%,差异有统计学意义(t=2.2835,P<0.05).在特异性刺激剂rHBsAg作用下,CD150在PBMC及CD3+CD4+细胞中与抗体效价呈负相关(r=-0.726,P<0.05).结论 CD150可能在机体接种乙肝疫苗后的无应答者中发挥一定作用.

Abstract：

Objective To study the expression of signaling lymphocytic activation molecule (SLAM)CD150 in peripheral blood mononuclear cells(PBMCs)isolated from adult non-responders to recombined yeast gene hepatitis B vaccine.Methods A total of 202 cases were recruited.All these subjects had been immunized with recombined yeast gene hepatitis B vaccine for more than one standard scheme in two years(from Sep 2007 to Dec 2009)and remained negative for hepatitis B markers(HBsAg,anti-HBs,HBeAg,anti-HBe and anti-HBc).After recruitment,all 202 subjects received another standard scheme(0,1 and 6 month)revaccination.The blood samples were collected 7 months later after the first injection of revaccination to detect anti-HBs titer.The PBMCs were isolated from 18 adult non-responders(anti-HBs titer<10 mIU/mL)and 18 adult responders(antiHBs titer≥100 mIU/mL).CD150 expression on cell surface was analyzed by flow cytometry.SAS package was used for t test and spearman rank correlation analysis.Results After rHBsAg stimulation,the percentage of PBMCs expressed CD150 was significantly higher in non-responders (39.20%±10.66%)than responders(23.73%±12.41%)(t=2.1947,P<0.05).The same trend was also observed in rHBsAg stimulated C133+CD4+T cells,but the difference was not statistically significant(49.64%±11.94%vs 37.73%±11.02%)(t=1. 7175,P>0.05).After phytohaemagglutinin (PHA)stimulation,the percentage of CD150-positive PBMCs was also significantly higher in non-responders (39.21%±7.37%)than responders(23.18%±12.68%)(t=2.2835,P<0.05).CD150 expressions in both PBMCs and CD3+CD4+T cells were negatively correlated with anti-HBs titer after rHBsAg stimulation (r=-0.726,P<0.05).Conclusion Activation of CD150 may contribute to the non-response to hepatitis B vaccine.     

伯氏疟原虫再感染过程中树突状细胞表面分子表达水平的实验观察

目的探讨疟疾感染早期根治性治疗对再感染过程中树突状细胞（dendritic cells,DCs）成熟和功能的影响。方法用伯氏疟原虫（Plasmodium bergheiANKA,PbA）感染DBA/2小鼠,感染后3d进行根治性治疗,并于初次感染后90d进行再感染。通过吉姆萨薄血膜染色法计数红细胞感染率,流式细胞术检测再感染前（0d）和再感染后（1d、3d、5d）不同时间点脾细胞中表达CD80、CD86、CD40和MHC-II分子的DCs以及活化性T细胞的百分含量。结果同种疟原虫再感染后,根治性治疗小鼠仅出现短暂的低水平虫体血症;表达CD80、CD86、CD40和MHC-II分子的DCs百分率均于再感染后第3d出现了有意义的升高;再感染后第1-5d活化性T细胞百分率持续升高。结论初次感染早期根治性治疗后,同种疟原虫再攻击可诱导DCs的成熟和功能的发挥。     

1800MHz电磁波出生前暴露对大鼠海马NCAM表达的影响

目的了解1 800 MHz电磁波出生前暴露对大鼠海马NCAM表达的影响.方法 7周龄SD雌性大鼠32只,雄性16只,适应环境1周后以雌：雄=2：1交配,受孕后雌鼠随机分为四组（两个实验组和两个对照组）;实验组采用1 800 MHz射频电磁波对大鼠于孕0～20 d进行21 d连续全身暴露,每天12 h,功率密度为0.5 mW/cm2和1.0 mW/cm2,各实验组分别设置虚拟暴露作为对照组.暴露期间的温度、湿度、背景噪声等环境条件稳定.暴露完成后在F1代子鼠长至3周龄和7周龄,每组随机抽取8只子鼠采用免疫组织化学方法分别对海马NCAM进行染色,然后采用图像分析系统分析海马CA1、CA3和DG区（齿状回）NCAM的表达.结果 1.0 mW/cm2暴露组未发现对3周龄、7周龄F1代大鼠海马各区NCAM表达有影响,其表达与对照组无统计学意义;0.5 mW/cm2暴露组3周龄F1代大鼠海马各区NCAM表达和对照组差异无统计学意义（P〉0.05）,0.5mW/cm2暴露组7周龄F1代大鼠海马各区NCAM表达出现了下调,其表达与对照组相比有统计学意义（P〈0.05）.结论 1 800 MHz功率密度0.5 mW/cm2电磁波出生前暴露使7周龄大鼠NCAM在海马各区表达下调.     

综合ICU医院感染目标性监测分析

目的了解综合ICU住院患者医院感染的特点及其相关危险因素,探讨有效预防与控制医院感染的方法。方法采取前瞻性目标性监测方法,对2010年9月～2011年2月入住ICU的患者进行调查,用ASA法调整医院感染发病率,并对侵入性操作相关感染进行分析。结果调查期间监测对象共907例,发生医院感染204例（21.03%）,223例次（22.99%）。其日医院感染发病率为24.40‰,日医院感染例次发病率为26.70‰;经ASIS调整后的日医院感染发病率为7.20‰,日医院感染例次发病率为7.80‰。呼吸机相关肺炎感染率27.76‰,中心静脉相关血流感染率8.40‰,导尿管相关泌尿道感染率2.00‰。结论 ICU医院感染率高,尤其是呼吸机相关性肺部感染率高,应加强引起感染相关因素控制,以降低ICU医院感染的发生。     

仙花活骨丹颗粒含药血清对血管内皮细胞增殖及黏附分子表达的影响

目的以血清药理学方法观察仙花活骨丹颗粒对血管内皮细胞增殖及黏附分子表达的影响,探讨仙花活骨丹颗粒治疗股骨头缺血性坏死的药理学机制。方法建立人脐静脉内皮细胞体外培养模型,将ECV304细胞与仙花活骨丹颗粒不同剂量含药血清一起培养,MTT法观察细胞增殖情况,同时对细胞黏附分子表达进行测定。结景仙花活骨丹颗粒舍药血清处理24h后能不同程度促进血管内皮细胞ECV304的增殖（P〈0．05）,中剂量12h、48h、72h增值最明显（P〈0．01）;但72h较48h增值情况又有所下降。含药血清组CD54（ICAM-1）表达明显较空白对照组增多（P〈0．05）。中剂量组CD54（ICAM-1）表达呈高峰,而大剂量组CD54（ICAM-1）表达又有所降低。中剂量仙花活骨丹颗粒是促进的最佳浓度。结论仙花活骨丹颗粒能够促进内皮细胞的增殖以及细胞粘附分子的表达。     

胶质细胞源性神经营养因子及其受体与疼痛

胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)是转化生长因子β(transforminggrowth fartor-β,TGF-β)超家族成员,具有多种重要的生物学活性,不仅特异性地促进多巴胺能神经元的存活,还对外周神经系统及非神经系统具有广泛的作用。文中就近年来对GDNF及其受体在神经系统中的作用,特别是痛觉调制中作用的国内外研究进展作一综述。     

靶控输注依托咪酯全麻复合硬膜外阻滞用于老年患者上腹部手术的研究

目的:观察依托咪酯靶控输注全麻复合硬膜外阻滞用于老年患者上腹部手术的可行性。方法:60例老年上腹部手术患者,随机分为P组(丙泊酚组)和E组(依托咪酯组),每组30例。行硬膜外穿刺麻醉效果满意后应用靶控输注系统,E组输注依托咪酯,P组输注丙泊酚,记录诱导前(T0)、诱导后(T1)、插管后即刻(T2)、插管后5分钟(T3)、术中探查时(T4)、拔管后5分钟(T5)时2组平均动脉压(MAP)、心率(HR)、心排血量(CO)、心排指数(CI)、外周阻力(SVR),睫毛反射消失时间、停药至唤醒时间、术后6小时内惠者恶心呕吐发生率。结果:T0时P组MAP、HR、CO、CI、SVR与T1时及E组T,时比较差异有统计学意义(P<0.05),T2、T3、T4、T5时2组MAP、HR、CO、CI、SVR比较差异无统计学意义(P>0.05);2组睫毛反射消失时间、停药至唤醒时间、术后6小时内患者恶心呕吐发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:靶控输注依托咪酯和丙泊酚全身麻醉复合硬膜外阻滞都可以用于老年患者上腹部手术,依托咪酯更易于维持老年患者全麻诱导期血流动力学的平稳。