中枢神经再生策略：增强神经因子介导的再生环境“允许”作用

1再生环境“允许”作用的基本机制 神经再生环境是神经生长的基础环境，是由细胞基质、神经元、轴／树突、胶质细胞、髓磷脂等结构与维持神经生长和功能的神经介质,以及提供神经功能活动的微循环和代谢环境等构成的物质环境。神经再生环境受自身分泌的各种神经生长相关的营养因子、调节因子等的调控。     

无细胞基质组织工程膀胱生物支架材料的生物力学特征

背景：前期研究表明，无细胞基质的组织工程膀胱支架材料有良好的生物相容性，无毒可吸收，符合组织工程生物支架材料的部分应用要求。目的：实验拟进一步观察无细胞基质组织工程膀胱生物支架材料的生物力学特性。设计、时间及地点：对比观察实验，于2006—07／2007—05在中国医学科学院北京协和医院中心实验室和北京大学高分子科学与工程系完成。材料：新鲜猪膀胱。方法：采用低渗．去污剂洗涤．核酸酶消化法对新鲜猪膀胱组织进行脱细胞处理，制备无细胞基质膀胱。对新鲜猪膀胱组织及制备的膀胱无细胞基质行苏木精-伊红染色和Masson染色。主要观察指标：测定膀胱组织在脱细胞前后组织的厚度、组织含水量、可溶性蛋白含量、最大位移、最大应力和断裂应力。结果：与新鲜膀胱组织相比，脱细胞后的膀胱组织中未见有细胞成分，保留了完整的细胞外基质。膀胱组织含水量在脱细胞后明显增加（P〈0．001），组织厚度和可溶性蛋白含量明显降低，而经校正后的应力-应变参数及破坏强度则改变不明显。结论：无细胞基质膀胱与天然组织的生物力学特性一致或接近。     

Vero细胞传代过程中致瘤性的检测

目的 为生物制品生产及研究用Vero细胞体系传代过程中的遗传安全性评价提供实验数据.方法 对Vero细胞进行传代与冻存,并对不同代次Vero细胞进行体外与体内致瘤性检测,同时对不同代次Vero细胞的蛋白质表达进行差异性分析.结果 Vero细胞传代至270代并建立了14个细胞冻存库;不同代次Vero细胞体外与体内致瘤性检测结果均为阴性;200代以上的Vero细胞蛋白质表达水平有所变化.结论 Vero细胞传代过程中虽然体外与体内致瘤性检测结果为阴性,但蛋白质组学分析有差异性蛋白表达,这为Vero细胞传代过程中的遗传安全性评价提供了实验参考.

Abstract：

Objective To produce an experimental information for the safety assessment of Vero cells during subculture. Methods Passage and freeze on Vero cells, and Vero cells in different passages in vitro and in vivo tumorigenicity were tested. The protein expression of different Vero cell passages was analyzed. Results Vero cells passaged to p270 and 14 cell banks were developed and stored for future evaluation. In vitro and in vivo tumorigenicity Lest results of Vero cells in different passages were negative. Conclusion Although the tumorigenicity test results in vitro and in vivo process were negative, the protein expression of more than p200 Vero cells were changed, which produced the experimental reference for the safety evaluation of the process during the Vero cell passage.     

软骨脱细胞基质复合脂肪源性干细胞构建软骨组织的实验研究

[目的] 探讨软骨脱细胞基质支架材料的制备,及其体外复合脂肪源性干细胞构建软骨组织的技术方法.[方法] 成年新西兰大白兔脂肪源性干细胞获得,培养,扩增.成年新西兰大白兔新鲜软骨,低温冻干12 h,后经曲拉通、DNA、RNA酶等处理制备成为软骨脱细胞基质支架材料,终浓度为2×107/L的脂肪干细胞种植于软骨脱细胞基质中于软骨细胞方向诱导培养基中培养2周,构建软骨组织.新鲜制备的软骨脱细胞基质及构建的软骨组织分别行组织学、免疫组织化学及透射电镜检测.[结果] 实验制备的软骨脱细胞基质支架材料内无细胞结构存在,仅残留空白软骨陷窝.具有合适的孔隙率和孔径大小;复合脂肪源性干细胞后细胞向材料内部迁移,粘附,生长良好.部分载体内细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性.[结论] 软骨脱细胞基质可作为支架材料应用于软骨组织工程,复合脂肪源性干细胞培养可成功构建软骨组织.     

脱细胞角膜基质的制备及其超微结构

目的 探讨异种角膜脱细胞基质的制备方法,观察异种脱细胞角膜基质的超微结构.方法 取新鲜狗角膜进行脱细胞处理,用光学显微镜和扫描电镜观察植片的形态学改变.从一脱细胞狗角膜基质取1mm厚组织片,植入兔角膜囊袋中,分另于术后不同时间点对其进行临床观察及组织切片看形态学改变,及其与受体组织融合情况.结果 脱细胞后的狗角膜组织呈现无细胞的三维网状,肉眼观察为灰白色半透明组织,经脱水处理后呈透明状,组织切片中未见蓝染的细胞核结构,扫描电镜示基质纤维完好,呈有序的平行结构排列的透明结构.植入囊袋中可见局部水肿不明显,呈半透明状,术后1个月可见有新生血管长入.结论 脱细胞处理方法可以有效的脱净细胞,并保持角膜三维结构和透明性,宿主细胞可以长入异种脱细胞角膜基质植片中并在植片中增殖,与其他方法处理的脱细胞基质相比,组织的生物相容性更好.     

c/000冷冻真空抽干BAMG的生物学特性

目的：评价冷冻后真空抽干的膀胱脱细胞基质（（bladder acellular matrix graft,BAMG））的生物学特性。方法：将传统处理的BAMG（对照组）及冷冻后真空抽干的BAMG（实验组）分别通过HE、Masson染色、扫描电镜及力学测定研究其理化性质;采用兔膀胱平滑肌细胞作为种子细胞,通过细胞黏附实验、细胞活力测定（MTT法）、皮下埋植实验对两种BAMG的生物学特性进行评价比较。结果：经HE及Mason染色证实两种BAMG无细胞成分残留,保持较完整的胶原成分;电镜扫描表面均呈裂隙状结构,以胶原为主,适合细胞黏附;力学检测实验组BAMG保持了原来BAMG的力学特征,且具有更好的拉伸率;MTT法测定细胞毒性均为零级;与膀胱平滑肌细胞均有良好的黏附性;兔皮下埋植1个月,均与皮下组织黏附良好,有肌肉黏附及血管增生。结论：经冻干后真空抽干的BAMG具有良好可操作性及拉伸率,且保持了原有的生物相容性,制作简单,是理想的组织工程生物支架。     

组织和器官脱细胞处理研究进展

<正>组织和器官脱细胞后形成的生物支架已经在动物实验和临床应用取得了成功。由于细胞外基质可以来源于不同的组织器官,其脱细胞处理和终末消毒方法也不相同,     

姜黄素激活过氧化物酶体增殖因子活化受体γ信号对大鼠肝星状细胞基质金属蛋白酶2、9活性和胞核核因子-κBp65表达的影响

目的 研究姜黄素激活过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（PPARγ）信号对大鼠肝星状细胞（HSC）活化、基质金属蛋白酶（MMPs）活性和胞核核因子-κBp65（RelA）表达的影响。方法 采用肝脏原位灌流酶消化、Nycodenz密度梯度离心法分离大鼠HSC。药物处理后收集裂解细胞,Western blot检测PPARγ、α平滑肌肌动蛋白（αSMA）、Ⅰ型胶原、RelA。收集细胞培养上清,明胶酶谱法检测MMP2、9的活性。结果 随着HSC活化程度增加PPAR7表达水平不断下降,姜黄素上调其表达水平（P〈0．01）,拮抗剂GW9662显著阻断这种作用（P〈0．01）。姜黄素抑制αSMA的表达、Ⅰ型胶原的生成以及胞核内活化RelA的表达（P〈0．01）,显著升高MMP2、9的活性（P〈0．01）。结论 姜黄素激活PPARγ信号途径抑制HSC活化,升高MMP2、9活性,抑制／干扰NFκB的核转位。     

血小板源性生长因子与创伤愈合

创伤愈合是个复杂的过程，从细胞和分子水平而言，创伤愈合与细胞、细胞基质和细胞因子三者问的互相作用有关^[1]。血小板源性生长因子（Platelet derived growth factor，PDGF）调节细胞生长与分化并诱导分泌其它细胞因子，促进细胞基质成分的合成，在组织修复、胚胎发育、免疫以及多种常见疾病中起着重要作用，目前已成为人们普遍关注的研究热点之一。本文复习国内外文献，就PDGF与创伤愈合的关系作一综述。     

脱细胞基质同种异体半月板移植的实验研究

目的 :探索同种异体半月板移植中移植半月板的处理方法 ,提高同种异体半月板移植效果。方法 :大耳白兔分为半月板供体组和受体组。供体组右内侧半月板低温冻存 ( -80℃ ) ,左内侧半月板进行脱细胞处理 (不用曲拉通X -10 0 )。将供体半月板移植到异体关节内 ,分批做大体、组织学、影像学观察。结果 :左侧半月板较右侧萎缩轻 ,关节面破坏程度轻 ,组织学和影像学检查均有统计学意义。结论 :经脱细胞处理 (不用曲拉通X -10 0 )的半月板同种异体移植较普通低温冻存半月板移植较果好