铁皮石斛多糖对高糖诱导的血管内皮细胞Bax、Bcl-2表达的影响

目的优化铁皮石斛多糖提取工艺,研究其对高糖诱导的静脉血管内皮细胞(HUVEC)的保护作用机制。方法在单因素实验基础上,利用响应面法优化多糖的提取工艺;体外培养HUVEC细胞,将对数生长期的细胞分为空白对照组、正常血糖组、高糖刺激组和不同铁皮石斛多糖浓度+高糖刺激组,分别作用24和48 h后,采用MTT法检测的HUVEC凋亡的影响,用RT-PCR法检测内皮细胞Bax、Bcl-2的表达情况。结果铁皮石斛多糖提取的最优条件为:提取次数为2.8次,液(m L)料比(g)15.75∶1,提取时间2 h,在此条件下,理论计算提取率达到25.1%,实测提取率为24.9%,与模型高度拟合。与正常组相比,高糖组抑制细胞的生长,增强Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,在高糖诱导下,铁皮石斛多糖促进细胞生长,抑制Bax的表达,增强Bcl-2的表达。结论通过响应面法优化的工艺,得率高,提取效果好。铁皮石斛多糖可通过抑制高糖诱导的血管内皮细胞Bax的表达,增强Bcl-2的表达,从而抑制血管内皮细胞凋亡,在一定程度上可防治糖尿病血管病变。     

阿魏酸对大气细颗粒物PM2.5诱导的小鼠主动脉炎症的干预作用

目的 探讨大气细颗粒物PM2.5对小鼠主动脉Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）信号通路的影响及阿魏酸的干预作用。方法 采用气管滴注方法以10,20 mg·kg^-1的PM2.5处理小鼠,并用40,80 mg·kg^-1的阿魏酸对部分20 mg·kg^-1 PM2.5处理后的小鼠进行治疗。2周后处死小鼠,血液细胞分析仪检测小鼠血液中炎症细胞水平,ELISA检测血清中IL-1β和IL-6的含量,并用荧光定量PCR检测主动脉中IL-1β和IL-6的mRNA水平,Western blot检测各组小鼠主动脉组织中TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白的表达,免疫组化技术观察TLR2和TLR4在小鼠主动脉中的水平。结果 PM2.5能提高血液中NEUT、EOS的数量及其在总细胞中的比率,增加血液和主动脉组织中炎症因子IL-1β、IL-6的含量,上调主动脉组织中的TLRs通路相关分子TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB p65的表达;而用阿魏酸干预后,血液中白细胞数量、EOS数量、NEUT与EOS的比率明显降低,IL-1β、IL-6水平下降。同时主动脉组织中的TLRs通路相关分子的表达下调。结论 PM2.5可能通过TLRs通路诱导小鼠主动脉炎症的产生,而阿魏酸可能通过抑制TLRs通路相关因子的表达而发挥抑制PM2.5诱导的小鼠主动脉炎症的作用。     

60Co-γ辐射对元胡品质及根际菌群的作用

[目的] 研究60Co-γ辐射对元胡品质的直接影响及对根际微生态的间接影响。 [方法] 利用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法和高通量测序检测不同剂量射线辐射对元胡品质的影响和辐射后根际细菌群落结构和多样性的变化。[结果] 随着60Co-γ辐射剂量的增加,元胡的鲜重、干重、粒径及膨大率均明显增加,但其主要药效成分的含量并未显著提升。研究元胡根际土壤的菌群发现,与无辐射组比较,辐射组的生物多样性指数更高,表明辐射会改变元胡根际菌群多样性,其中80 Gy辐射组的细菌多样性最高。从菌群组成来看,各组在细菌的门以及优势属的分类水平上差异无统计学意义(P＞0.05),而一些含量低于4%的非优势菌变化明显,其数量随辐射剂量增加而增加,表明元胡经过射线辐射后,根部菌群可能会发生变化,在根部富集一些新的细菌,从而提高细菌多样性。 [结论] 60Co-γ照射会显著影响元胡的产量和大小,但对药效成分的改变不显著。辐射可能会通过提高根际土壤的非优势菌水平,甚至富集一些新的细菌来提高根际土壤细菌多样性。综合来看,60～80 Gy是元胡的最佳诱变剂量。     

f_2相似因子法评价银杏酮酯缓释微丸大类成分总黄酮和各类成分的体外释放相关性研究

目的引入f_2相似因子法对银杏酮酯(GBE)缓释微丸的大类成分总黄酮和各类成分(包括黄酮类和萜内酯类)的释放曲线进行分析,以能较全面地评价其体外释放。方法运用紫外分光光度法、高效液相-质谱联用(HPLC-MS)测定GBE缓释微丸中大类成分(总黄酮)和各类成分(槲皮苷、异鼠李素、芦丁、槲皮素、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯)的体外释放率,并进行f_2相似因子计算;采用扫描电镜法观察微丸释药前后的微观结构,结合方程拟合分别对微丸中总黄酮和各类成分的释药机制解析,以验证f_2相似因子法的可靠性。结果优化工艺的GBE微丸黄酮类和内酯类的各成分与大类成分总黄酮的f_2均大于50,说明大类成分总黄酮与各类成分体外释放曲线具有较好的相关性。释药机制解析进一步验证了该结果的可靠性。结论 f_2相似因子法可运用于多组分中药缓释制剂大类成分和各类成分的体外释放评价。     

麦冬须根主要活性成分研究

目的:研究麦冬须根的主要活性成分.方法:以块根为对照,测定所含主要活性成分.结果:麦冬须根中主要活性成分与块根基本一致,其中总多糖的含量(15.24%)低于块根(60.99%);须根总黄酮含量(0.110%)与块根(0.157%)相近;须根总皂苷的含量(8.43%)高于块根(2.54%).结论:麦冬须根含有皂苷、多糖、黄酮等主要活性成分,可加以开发利用.     

红曲菌株鉴别中SCAR分子标记的应用

目的:建立一套基于DNA遗传标记技术的红曲菌株快速鉴定方法。方法:采用RAPD方法对分离收集的10个红曲菌株进行多态性分析,从菌株F中获得1个421 bp的特异RAPD标记片段F421。Blast分析未发现F421序列(GenBank登录号EF063107)与GenBank中相关序列有较高同源性。根据该序列设计特意引物,对10个红曲菌株进行PCR检测。结果:利用所获得的特征性片段扩增区域(SCAR)标记能能在1 d内准确地鉴别出红曲F菌株。结论:利用SCAR分子标记技术对红曲菌株进行分类鉴别是红曲研究领域的新尝试,为推广应用SCAR分子标记技术对药用真菌进行菌株快速准确鉴定提供技术依据。     

姜黄素酯化物抗平滑肌细胞增殖和调血脂作用研究

[目的]研究姜黄素酯化物对不同条件促牛主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖作用和对小鼠食饵性高脂血症的影响,初步探讨其构效关系。[方法]用丁二酸酐酯化姜黄素获得姜黄素酯化物;用oX-LDL或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)培养牛VSMC建立VSMC增殖模型,再在模型中加姜黄素和姜黄素酯化物培养,用MTT法检测观察二者对平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响;用高脂膳食喂饲小鼠建立食饵性高脂血症模型,用姜黄素和姜黄素酯化物进行实验性治疗,给药2周后处死小鼠,测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDL-C)含量,计算低密度脂蛋白(LDL-C)含量,观察其调血脂作用。结果姜黄素酯化物浓度在66μmol/L、33μmol/L、16.5μmol/L时,对10 mg/L oX-LDL培养的VSMC增殖有明显的抑制作用,P<0.05;剂量在0.3mmol/(kg·d)时,可降低食饵性高脂血症小鼠血清TG含量P<0.05,但降TC、LDL-C和上调HDL作用不明显。[结论]姜黄素酯化物高剂量时能明显抑制oX-LDL和AngⅡ促牛VSMC增殖作用;能明显降低血清TG降低食饵性高脂血症小鼠血清TG含量。     

胶体金-荧光素双标配体法研究细胞低密度脂蛋白受体的功能

 目的建立一种利用胶体金-荧光素双标记配体研究细胞低密度脂蛋白受体(LDLR)功能的方法。方法①先用荧光素DiI标记LDL,再在一定pH值下将DiI-LDL吸附在胶体金颗粒表面上,获得稳定的双标记配体Au-DiI-LDL。②利用双标配体Au-DiI-LDL结合荧光显微镜、流式细胞仪和透射电镜等技术分别对经LDLR表达诱导剂、抑制剂或姜黄素作用后的ANA-1细胞LDLR进行定性定量分析以及内吞作用的直观检测。结果荧光显微镜、流式细胞仪和透射电镜的检测结果均表明,能够利用双标配体Au-DiI-LDL检测ANA-1细胞LDLR的活性(P<0.05)。结论胶体金-荧光素双标记配体法是一种可用于细胞LDLR功能检测的新型高效的方法。     

温补肾阳药对丙基硫氧嘧啶引起肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术研究温补肾阳药对药物性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响。方法：正常大鼠、通过喂饲丙基硫氧嘧啶造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy2、Cy3、Cy5标记，等量混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。经DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出16个差异蛋白质。经质谱测定及数据库比对，其中10个蛋白质得到鉴定。结果：肾阳虚时氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白I、异戊酰辅酶A脱氢酶、热休克蛋白60、琥珀酰CoA合成酶、羟氨基辅酶A脱氢酶／酮脂酰辅酶乙酰辅酶A脱氢酶α亚基、鸟氨酸转氨甲酰酶、谷胱甘肽过氧化物酶表达量均增加，而鸟氨酸氨基转移酶表达量降低。应用温补肾阳药治疗后，上述蛋白质的表达量均有不同程度的纠正。结论：喂饲温补肾阳药的肾阳虚模型大鼠糖、脂类和蛋白质代谢均得以改善，可能与温补肾阳药维护线粒体膜稳定性有关。     

中医不同证型乳腺增生患者血清蛋白质组的研究

目的：应用凝胶内差异显示电泳和质谱技术研究不同证型乳腺增生病患者血清蛋白质组。方法：收集正常人及不同证型乳腺增生病患者血清,去除高丰度蛋白质后分别用Cy3或Cy5标记,每一对Cy3和Cy5标记样品都与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经DeCyder6.5软件进行分析,筛选表达量有显著差异的蛋白质进行质谱鉴定。结果：与正常人相比,在乳腺增生患者血清中抗凝血酶lii、富含亮氨酸的α-2糖蛋白、HCCR结合蛋白2、结合珠蛋白2和转甲状腺蛋白及其变异体表达量增加。而SP40,40、Ras association and pleckstrin homology domains 1 iso-form3表达量下降。在不同证型乳腺增生患者血清中,抗凝血酶lii和SP40,40在肝郁气滞型表达量最高,痰瘀互结型次之,而冲任失调型表达量少;HCCRBP2在痰瘀互结型中表达量最高,在肝郁气滞型中表达量最低;转甲状腺素蛋白变异体在肝郁气滞型、冲任失调型和痰瘀互结型中表达依次降低。结论：这些蛋白质可能与乳腺增生病不同证型相关,可以作为乳腺增生病临床中医辨证论治的候选客观指标。