磷脂酶A2阻断剂对缺血-再灌注损伤诱 导细胞凋亡和坏死的影响

Objective To investigate the effect of phospholipase A₂(PLA₂) activity on apoptosis and necrosis of neutrophils,thymocytes and splenic cells during ischemiareperfusion (I－R) injury.MethodsThe apoptosis and necrosis of above cells after I－R injury were examined by DNA agarose electrophoresis,fluorescence activated cell sorting,electronic and light microscope.ResultsIt showed that apoptosis or necrosis occurred in all above cells as manifested by a DNA ladder or diffused DNA tail in agarose electrophoresis,after 60 minutes of superior mesenteric artery occlusion followed by 270 minutes reperfusion.The apoptosis or necrosis of neutrophils could be significantly inhibited by the treatment of bromophanacyl bromide (pBPB) and chloroquine,two different PLA₂ inhibitors,or platelet activating factor receptor antagonist SR27417 (5 mg/kg),but these agents did no show obvious effect on thymocytes and splenic cells after I－R injury.ConclusionsThese results indicate that intestinal I－R injury could induce apoptosis or necrosis of thymocytes,splenic cells and neutrophils.Inhibition of PLA₂ in vivo could notably decrease the necrosis of neutrophils.     

cPLA2抑制剂对EGF和FBS诱导的Hela细胞增殖及cPLA2活性和蛋白表达的影响

目的：研究抑制胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）对表皮生长因子（EGF）和胎牛血清（FBS）诱导Hela细胞增殖及cPLA2活性和蛋白表达的影响。方法：采用cPLA2特异性抑制剂AACOCF3、反义寡核苷酸（SK7111）及其上游酶ERK1/2抑制剂U0126,分别作用于Hela细胞,观察在EGF及FBS作用下Hela细胞增殖以及细胞周期的变化;采用cPLA2活性检测盒及Western blot检测cPLA2活性及表达。结果：AACOCF3、SK7111及U0126均能明显抑制cPLA2活性,且呈剂量依赖性地抑制EGF和FBS诱导的Hela细胞增殖,尤以SK7111作用最为明显;流式细胞仪检测细胞周期表明,AACOCF3和U0126可将Hela细胞阻滞在S期。结论：cPLA2选择性抑制剂及其反义寡核苷酸可通过抑制cPLA2活性显著抑制EGF和FBS诱导Hela细胞增殖,同时,ERK1/2在此过程中可能具有调节作用。     

重组人瘦素表达及其免疫活性鉴定

为探讨人瘦素(leptin)在大肠杆菌中重组表达的途径,本研究用PCR方法扩增人leptin的编码区(CDS),使产物与pGEM-T easy载体相连,转染DH5α。测序后,选出阳性克隆质粒扩增。将酶切后的leptin片段与pET-28a( )载体连接,获得leptin的表达质粒。将重组表达质粒转入BL21(DE3),测序结果显示leptinCDS没有突变产生,用IPTG诱导人重组(rh)leptin蛋白表达。表达产物进行SDS-PAGE电泳及免疫学分析。结果显示,包涵体在22 kDa蛋白处有明显的新增蛋白带,其含量超过总蛋白的50%;经Western-blot证实为重组的人(rh)leptin。本实验表明:rh-leptin在BL 21(DE3)/pET-28a( )体系中能高效表达,表达产物具有免疫活性。     

转移生长因子和动脉粥样硬化

人和动物实验的很多证据发现动脉粥样硬化的发生和各种损伤诱导的血管内皮增生 ,均起因于内源性阻抑系统的功能丧失 ,从而限制了损伤的正常修复。其中最为关键的是转移生长因子 (ｔｒａｎｓｆｏｒｍ ｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ ,ＴＧＦ) β的作用。正常人的平滑肌细胞 (ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌ,ＳＭＣ)表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＴＧＦ β受体 ,而损伤斑块中的血管内皮细胞Ⅱ型受体表达显著降低 ,而Ⅰ和Ⅲ型基本不变。同时Ⅱ型ＴＧＦ β受体ｍＲＮＡ在损伤的血管内皮细胞表达也显著下降。如果导入Ⅱ型ＴＧＦ β受体则可以明显恢复Ｔ…     

大鼠窒息心脏骤停期间心脏和肺脏β肾上腺素能受体的变化

目的 :研究心脏停搏期间机体 β肾上腺素能受体的变化。 方法 :采用放射性配基结合分析方法 ,检测大鼠在窒息心脏停搏期间心、肺 β肾上腺素能受体 (β受体 )的变化。动物随机分为正常对照 (A)、手术对照 (B)、窒息 10min (C)、2 0min (D)和 30min (E) 5组。结果 :心、肺C组 β受体分别为 (34 5 1± 3 2 5 )fmol/mgpr和(2 89 4 6± 19 96 )fmol/mgpr。心、肺D、E组 β受体分别为 (4 0 96± 2 91)和 (6 4 4 4± 3 2 0 )fmol/mgpr及 (4 2 6 33± 12 0 8)和 (4 5 5 6 7± 2 8 77)fmol/mgpr,与C组比较 ,差异极其显著 (P <0 0 1)。心、肺各窒息组间受体亲和力无明显变化。结论 :在窒息心停早期 ,心、肺β受体数量无明显变化 ,随着心脏停搏时间延长 ,其数量明显增加。     

家兔全氟异丁烯吸入急性肺损伤机制的实验研究

全氟异丁烯(PFIB)是含氟高分子化合物(氟塑料)生产过程中毒性最强的裂解产物,毒性约为光气的10倍,可导致严重肺损伤进而致死[1].本研究以家兔为研究对象,建立大动物PFIB吸入急性肺损伤实验模型,旨在进一步探讨PFIB吸入急性肺损伤致病机制,为PFIB中毒的防治提供更多试验依据.     

白介素8酶联免疫分析方法及其初步应用

建立高灵敏度和特异性的白介素8(IL-8)ELISA法.用人工重组的IL-8多次免疫兔,获取高效价抗体.纯化抗体经生物素标记,同辣根过氧化酶(HRP)标记的亲和素可特异结合.采用纯化的抗体包被96孔板,形成固相抗体.加入不同浓度标准品后,反应1.5h,洗净后再加入生物素标记抗体,以酶标记亲和素作为探针,经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线.该方法测定范围为0.2-10.8ng/mL,最低测出值为0.02ng/mL,批内和批间CV小于8%和10%.用该法测得18名正常人血浆中IL-8水平为0.15±0.06ng/mL.18份高低不同浓度IL-8水平的血清样品经本法和RIA测定其均值为0.54±0.35ng/mL和0.63±0.59ng/mL,相关性强(r=0.819,t=5.89).在U937细胞系体外培养液中,LPS刺激24h和48h可测出IL-8水平明显上升;而经TNF-α刺激24h和48h后同对照没有明显变化.该方法操作简便,具有较强灵敏度和特异性,可满足人血清和细胞培养液中IL-8水平的检测.     

瘦素及其抗体对小鼠皮肤创伤的修复作用

为探讨Leptin对小鼠皮肤创伤的保护作用机制,本文采用昆明小鼠40只,在背部各制备4个全层皮肤缺 损创面(0.8 cm×0.8 cm),将创面分成4组,分别用mLeptin、mLeptin-Ab、mLeptin mLeptin-Ab、生理盐水局部涂抹,测定伤口愈合时间和愈合率,并通过RT-PCR对伤口组织Leptin、Leptin受体(OB-Rb)和EGF-R的表达 进行了检测.结果表明:与生理盐水对照组比较,mLeptin组和/或mLeptin-Ab组小鼠皮肤伤VI愈合时间明显缩 短(P<0.01),EGF-R的表达明显升高(P<0.01);单用mLeptin-Ab组小鼠皮肤伤口愈合率,EGF-R、OB-Rb和 Leptin的表达均显著提高(P<0.01).结论为Leptin和/或mLeptin-Ab均可促进小鼠皮肤伤口愈合;未发现 mLeptin-Ab对Leptin的中和作用,单用mLeptin-Ab反而能够促进伤口修复.     

老年糖尿病骨折与血清钙、25-羟维生素D3及骨钙素的变化

老年糖尿病患者容易发生骨折，与自身各种生理生化因素改变有关。我们对临床46例本病患者血清钙、25-羟维生素D3及骨钙素含量进行了测定，探讨其变化在本病发生中的意义。