非洲传统草药Hypoxis Hemerocallidea提取物对糖尿病骨骼肌AMPK信号通路作用机制研究＊

目的：探讨Hypoxis Hemerocallidea（AP）对糖尿病大鼠骨骼肌AMPK信号通路的影响。方法：①40只雄性SD大鼠,10只作为正常组,30只高脂喂养1月,加一次性腹腔注射STZ造模,造模成功后分为模型组、盐酸吡格列酮组、AP组,分组灌胃5周。取骨骼肌组织包埋切片进行免疫组化;利用Western Blot检测骨骼肌p-AMPKα、p-AS160、GLUT4蛋白表达情况;②使用100 mmol·L-1葡萄糖诱导建立C2C12骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型,设为模型组;另加AP含药血清设置处理组;对照组为正常细胞。检测各组葡萄糖消耗量,细胞增殖情况,检测SOD、MDA含量,采用Western Blot、RT-PCR检测各组p-AMPKα、p-AS160、GLUT4蛋白表达情况。结果：①与正常组比较,AP能上调DM大鼠骨骼肌组织p-AMPKα蛋白量（P<0.01）,增加骨骼肌AS160的磷酸化水平（P<0.01）,上调GLUT4表达（P<0.01）;②与正常组比较,高糖造成了C2C12骨骼肌细胞活性下降,葡萄糖消耗量减低（P<0.05）,SOD降低（P<0.01）,MDA增加（P<0.01）,p-AMPKα、p-AS160、GLUT4蛋白表达降低（P<0.01）。干预48 h后,AP含药血清组C2C12骨骼肌细胞SOD均显著增高（P<0.01）,MDA含量降低（P<0.05）,提高了AMPKα、AS160的磷酸化水平（P<0.01）,增加GLUT4蛋白表达（P<0.01）。结论：诱导AMPKα、AS160磷酸化促进GLUT4表达可能是AP改善糖尿病骨骼肌胰岛素抵抗的作用机制之一。     

南非传统草药Sutherlandia 抗糖尿病作用的研究

目的：观察南非传统草药Sutherlandia水提物对糖脂代谢的影响。方法：腹腔注射链脲佐菌素（STZ）并高脂饲料喂养诱导2型糖尿病大鼠模型。随机分为正常组、模型组、吡格列酮组、Sutherlandia组。观察体质量、口服糖耐量试验（OGTT）、血甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）指标的改变,Western Blot法检测各组大鼠骨骼肌胰岛素受体底物（IRS-1）表达情况。结果：与正常组比较,模型组大鼠体质量降低,OGTT、TG、TC、LDL-C指标明显升高（P<0.05）,多饮、多食、多尿症状明显,IRS-1 蛋白表达明显降低（P<0.05）;治疗后,与模型组比较,Sutherlandia组及吡格列酮组的体质量未见明显增长,Sutherlandia组及吡格列酮组血糖、TG、TC均明显降低（P<0.05或P<0.01）,二者之间无统计学差异,Sutherlandia组及吡格列酮组骨骼肌中IRS-1蛋白表达明显升高（P<0.05）,二者之间无统计学差异。结论：腹腔注射STZ并高糖高脂饲料喂养诱导2 型糖尿病大鼠模型存在糖脂代谢紊乱;南非传统草药Sutherlandia可明显降低其血糖水平,改善血脂代谢,提高胰岛素水平;Sutherlandia可提高IRS-1骨骼肌中的表达水平,进而改善胰岛素抵抗,降低血糖,其确切的作用途径有待进一步深入研究。     

甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠T-bet/GATA3的影响＊

目的 观察甲炎康泰（JYKT）复方颗粒对自身免疫性甲状腺炎（autoimmune thyroiditis，AIT）大鼠Th1/Th2细胞转录因子T-bet/GATA3的影响。方法 50只Lewis大鼠，雌性，每组10只随机分为正常对照组、模型组、JYKT低、中、高剂量组。模型组与给药组大鼠皮下多点注射猪甲状腺球蛋白和弗化剂的方法建立自身免疫性甲状腺炎大鼠（AIT大鼠），大鼠造模6周后，正常、模型组大鼠每日予以0.9 mL/100 g双蒸水，中药组大鼠予以同体积药物混悬液连续8周。给药结束后RT-PCR检测各组大鼠脾脏中T-bet、GATA3 mRNA的表达情况；Western Blot检测各组大鼠脾脏中T-bet、GATA3的蛋白表达情况；免疫组化法测定大鼠甲状腺组织T-bet、GATA3蛋白的表达情况。结果 与正常组比较，模型组T-bet、GATA3 mRNA及蛋白表达均显著上升（P < 0.01）；与模型组比较，甲炎康泰低、中、高剂量组T-bet、GATA3 mRNA及蛋白均下降（P < 0.05，P < 0.01）。结论 T-bet/GATA3是影响Th1/Th2平衡的关键转录因子，甲炎康泰可调控T-bet/GATA3表达，从而影响了自身免疫性甲状腺炎的发生与发展。     

芪卫颗粒干预糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用研究＊

目的：探讨芪卫颗粒干预糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用机制。方法：28只8周龄KK-Ay小鼠成模后分为模型组和芪卫低剂量组、芪卫中剂量组及芪卫高剂量组,另8只C57BL/6J小鼠设为正常对照组。实验中纪录小鼠一般状况、血糖、24 h尿蛋白定量。治疗10周后检测小鼠肾功能指标血清肌酐及尿素氮,并称取小鼠肾脏,固定后行小鼠肾组织苏木精-伊红（HE）、Masson、过碘酸希夫（PAS）染色,并制作肾母细胞瘤基因（WT-1）免疫组化,结合软件分析计算小鼠肾小球足细胞数。蛋白质印迹法（Western Blot）检测小鼠肾脏中nephrin蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测nephrin mRNA的表达。结果：与模型组相比,芪卫颗粒治疗10周后小鼠体质量、血糖、24 h尿蛋白定量及血肌酐明显降低,并有效改善肾小球系膜增生等病理损害,保护足细胞数目。芪卫颗粒治疗后的nephrin蛋白表达量及mRNA表达量均显高于模型组。结论：芪卫颗粒可能通过调节nephrin表达而改善糖尿病肾病小鼠足细胞损伤。     

穿山龙颗粒制剂对自身免疫性甲状腺炎大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的 通过观察穿山龙颗粒制剂对Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响，探讨其治疗自身免疫性甲状腺炎（AIT）大鼠的作用机制。方法 40只Lewis大鼠采用高碘饮水诱导和猪甲状腺球蛋白佐剂注射的方法制备AIT模型。6周后随机分为模型组、穿山龙低、中、高剂量组（0.52、1.03、2.06 g·kg^-1·d^-1），每组10只，分别予以0.01 mL·g^-1·d^-1相应体积混悬液，正常组及模型组大鼠予以同体积去离子水，灌胃8周后取材。取大鼠血清用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测甲状腺球蛋白抗体（TGAb）、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）；检测游离三碘甲状腺原氨酸（FT₃）、游离甲状腺素（FT₄）、促甲状腺激素（TSH）的浓度；取大鼠甲状腺组织行苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察甲状腺组织的病理变化，并用免疫组化法及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及mRNA的相对表达量。结果 与正常组比较，模型组大鼠血清中TPOAb、TGAb浓度均显著升高（P<0.01），FT3、FT4显著升高（P<0.01），TSH显著降低（P<0.01）；与模型组比较，3个穿山龙剂量组的TPOAb、TGAb浓度均显著下降（P<0.01），穿山龙高剂量组FT3、FT4浓度显著下降（P<0.01），TSH显著升高（P<0.01）。HE染色示模型组甲状腺滤泡间隙存在淋巴细胞浸润，大量滤泡腔被破坏或变小，腔内胶质含量减少，滤泡壁变薄或被破坏，而穿山龙治疗组大鼠甲状腺组织内淋巴细胞浸润较模型组明显减少，甲状腺滤泡结构更为完整。与正常组比较，模型组的TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达显著上调（P<0.01），TLR4、MyD88 mRNA相对表达量显著上调（P<0.01），NF-κB mRNA相对表达量显著上调（P<0.01）；与模型组比较，穿山龙高剂量组的TLR4蛋白及mRNA相对表达量显著下调（P<0.05），MyD88蛋白表达显著下调（P<0.01）、mRNA相对表达量显著下调（P<0.05），NF-κB蛋白及mRNA相对表达量均显著下调（P<0.01）。结论 穿山龙颗粒制剂可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路的激活，对自身免疫性甲状腺炎起到治疗作用。     

中药复方糖耐康对KKAy 小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的：探讨中药复方糖耐康对KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制。方法：12周龄雄性KKAy小鼠50只,按血糖随机分为模型组、缬沙坦组、糖耐康高、中、低剂量组,每组10只,另设10只C57BL/6J小鼠为正常组,正常组和模型组给予0.9%氯化钠溶液,其余组给予对应浓度的药液灌胃,用药8周后处死,取肾脏组织,进行Mosson、PAS染色,免疫组化染色观察平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达分布;Western Blot检测转化生长因子-β1（TGF-β1）表达。结果：与正常组相比较,模型组小鼠肾纤维化面积显著增大（P<0.01）,α-SMA 蛋白表达呈现较强阳性,E-cadherin 蛋白表达弱阳性。与模型组比较,缬沙坦组、糖耐康各剂量组肾纤维化面积显著减小（P<0.01）,α-SMA 蛋白表达显著减少（P<0.01）,而E-cadherin 蛋白表达明显增加（P<0.05）。KKAy小鼠肾脏组织TGF-β1蛋白表达较正常小鼠显著升高（P<0.01）;与模型组比较,缬沙坦组、糖耐康低、中和高剂量组TGF-β1蛋白表达含量都显著降低（P<0.01）,其中糖耐康高剂量组与缬沙坦组相比较TGF-β1显著降低。结论：中药复方糖耐康可抑制肾小管上皮细胞EMT的发生,减轻肾小管间质纤维化而发挥肾脏保护作用。     

从中医“气”的角度谈辟谷与胰岛素抵抗的关系

辟谷是中国古代的一种修炼养生术。通过辟谷疗法充养人体元气、健运脾肾之气、调整气机升降运动以达到轻身健体、延年益寿的效果。这正好与现代医学防治胰岛素抵抗要求限制饮食、减轻体重、改变饮食结构有异曲同工之妙。从调节肠道菌群这一研究热点出发,发掘辟谷疗法对胃肠微环境的影响在改善胰岛素抵抗方面具有广阔的研究前景和潜力。     

番石榴叶总黄酮对胰岛β细胞胰岛素抵抗影响的实验研究

目的：观察番石榴叶总黄酮对HIT-T15胰岛β细胞胰岛素抵抗影响。方法：制备番石榴叶总黄酮（FSL）有效部位,通过HIT-T15胰岛β细胞生长曲线以及不同浓度葡萄糖（GLU）、FSL对HIT-T15胰岛β细胞增殖的影响确定FSL的加药时间、浓度和高糖浓度。然后测定在高糖环境下,FSL对HIT-T15胰岛β细胞胰岛素分泌、胰岛素受体mRNA和胰岛素受体底物1蛋白表达的影响。结果：50 mmol·L^-1葡萄糖能够显著抑制HIT-T15胰岛β细胞增殖（P<0.01）,50 μg·mL^-1 FSL能够促进高糖环境下HIT-T15胰岛β细增殖（P<0.01）、促进胰岛素分泌（P<0.05）、胰岛素受体mRNA表达（P<0.05）和胰岛素受体底物1蛋白表达（P<0.01）。结论：番石榴叶总黄酮能够促进高糖环境下HIT-T15胰岛β细胞胰岛素分泌,可能与其增加胰岛素受体mRNA的表达、胰岛素受体底物（IRS-1）蛋白表达有关。     

甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎模型大鼠Th1/Th2细胞平衡偏移的影响

目的：探讨甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎（AIT）大鼠Th1/Th2细胞平衡偏移作用机制。方法：采用Lewis大鼠建立AIT大鼠40只,6周后随机分为模型组、甲炎康泰低、中、高剂量组,每组10只,每天分别按去离子水、0.708、1.417、2.834 g ? kg -1 剂量连续灌胃8周。检测血清TgAb、TPOAb;Th1、Th2细胞分布比例及Th1/Th2比率;检测血浆中IL-4、IL-5、IFN-γ、TNF-α和IL-1α含量;HE染色观察甲状腺组织的病理;免疫组织化学检测甲状腺IFN-γ、IL-4蛋白表达。结果：甲炎康泰高剂量组能够下降AIT大鼠TPOAb、TGAb水平,降低甲状腺炎发生率、Th1与Th2细胞分布比例以及Th1/Th2比率;降低血浆IFN-γ、TNF-α、IL-1α、IL-4、IL-5含量;降低甲状腺IFN-γ、IL-4蛋白表达。结论：甲炎康泰具有降低AIT大鼠甲状腺自身抗体的作用,可能与通过调节细胞因子水平和Th1/Th2细胞平衡偏移有关。