EGFR和PD-L1双靶向嵌合抗原受体构建及表达

目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力,抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv);人EGFR单克隆抗体杂交瘤系,经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体,使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染293V细胞,FACS测定CAR膜表达,ELISA检测CAR感染293V细胞培养上清中PD-L1-scFv表达情况,转染激活人外周血T细胞,验证CAR膜表达。结果:获得PD-L1抗体11E3,具备高度配受体封阻性能,经人源化改造后,亲和力稳定(2.67×10 -10 mol/L),EGFR-scFv获得有效表达。进一步构建了EGFR-CAR和PD-L1双修饰慢病毒分泌型CAR(CTC0537-1)及膜表达型CAR(CTC0537-2),其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后,细胞膜表面表达EGFR-scFv,检测培养上清存在PD-L1-ScFv;CTZ0431-2感染293V细胞后,细胞膜表面EGFR-scFv和PD-L1-scFv有效表达,双表达病毒感染活化T细胞的CAR表达率为39.3%。 结论:成功构建了EGFR-CAR和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体,EGFR-CAR中度结合亲和力,此为EGFR靶向和PD-L1抗体双修饰CAR-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。     

噬菌体生物扩增法快速鉴定结核分枝杆菌的临床价值

目的:探讨噬菌体生物扩增法(Phab)快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法:应用Phab、罗氏法及涂片法共同检测236例痰标本。结果:痰标本3种方法检测结果比较:236份临床确诊的活动性肺结核患者痰标本,涂片、罗氏培养和Phab法检查结果分别有64份(27.1%)、78份(33.1%)和114份(48.3%)阳性;比较Phab与涂片和培养的阳性检测率,Phab检出率远高于涂片法,差异有统计学意义(χ2=77.706,P<0.01),Phab检出率高于罗氏法检出率,差异有统计学意义(χ2=95.678,P<0.01)。结论:FASTPlaque TB方法能快速、简便地检测结核分枝杆菌,且检出率较高,可作为结核病诊断的重要方法。     

肺结核患者化疗中类赫氏反应68例分析并文献复习

目的：加强对类赫氏反应的认识。方法：对肺结核患者化疗中出现类赫氏反应68例进行分析并对此反应作文献复习。结果：明确了肺结核患者化疗中可出现类赫氏反应，提高了对类赫氏反应的认识。结论：重视类赫氏反应对结核病临床诊断治疗具有指导意义。     

不明原因发热与结核病的关系探讨(附136例分析报告)

目的　探讨不明原因发热与结核病的关系。方法 收集1980年1月至2000年7月因不明原因发热住院的258例患者进行回顾性分析。结果 不明原因发热病人中52.7%诊为结核病。结核病与非结核病之间临床表现有显著性差异(P<0.005)。结论 1结核病仍是不明原因发热的主要原因之一。2试验性抗结核治疗不应少于2～2.5个月。     

聚合酶链反应-单链构象多态性检测利福平结核分子杆菌rpoB基因突变

结核病耐药趋势严峻 ,传统的检测结核分子杆菌耐药方法均操作繁杂、费时。聚合酶链反应单链构象多态性(PCR SSCP)方法是一种快速检测基因突变与缺失的方法〔1〕。我们采用该方法分析 80株结核分支杆菌 rpo B基因突变情况 ,研究 rpo B基因与耐利福平(RFP)之间的关系 ,报告如下。     

16 例结核病化疗期类赫氏反应临床治疗分析

目的通过对抗结核治疗中16例类赫氏反应的发病机制、临床表现和治疗转归进行探讨,提高对类赫氏反应的认识。方法观察2004年1月至2005年1月共收治肺结核和结核性胸膜炎58例,其中有16例发生类赫氏反应患者。结果类赫氏反应发生在结核患者大量排菌的化疗初期,随着痰菌阴转,X线有明显变化但出现新发病变。结论确诊为类赫氏反应,应继续原方案治疗。     

聚合酶链反应与分离培养技术检测结核分支杆菌诊断关节结核的对照研究

目的：研究聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术在关节结核标本结核分支杆菌检测方面的作用,探讨PCR技术对关节结核诊断的临床价值。方法：自1993年6月至2001年8月,对95例（男55例,女40例;年龄2～75岁）关节结核标本分别应用PCR技术和分离培养法盲法检测结核分支杆菌,计算两者检测阳性率,通过统计学处理进行比较。结果：95例关节结核标本结核分支杆菌检测中,PCR技术检测阳性78例,阴性17例,阳性率82％;分离培养法检测阳性15例,阴性80例,P13性率16％。PCR技术与分离培养法比较,Х^2=67,P〈0．001,两种方法对于关节结核标本结核分支杆菌的检出率比较差异有统计学意义。PCR扩增整个过程自动化控制,可在数小时内完成。结论：PCR技术检测关节结核标本具有快速、简便、敏感与特异等优点,明显优于分离培养,对关节结核的早期快速诊断与鉴别诊断具有较重要的临床价值。     

醛化鞣酸化羊红细胞电泳对肺结核诊断的价值

本文采用醛化鞣酸化羊红细胞电泳对肺结核、肺癌、肺炎及健康人进行了对照观察,结果表明,结核组静脉血淋巴细胞接触结核菌抗原OT后,较之其它组有明显延缓醛化鞣酸化羊红细胞电泳速度,且菌阳组高于菌阴组,成人组高于18岁以下的少年儿童组。而肺癌、肺炎及健康组间无显著差异。提示本法在肺部疾病鉴别诊断方面具有临床意义。     

化疗加免疫长疗程方案治疗耐多药结核病的随机对照研究

肺结核病是以细胞免疫水平低下为特征的疾病,患者的保护性免疫往往处于劣势,重病患者和耐药及耐多药患者表现更为突出,对这些病人即便采用有效的抗结核化疗有时也难以控制结核病的进展,为此采用含     

噬菌体生物扩增法快速鉴定结核分枝杆菌的临床价值

目的探讨噬菌体生物扩增法(Phab)快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值.方法应用Phab、罗氏法及涂片法共同检测236例痰标本.结果痰标本3种方法检测结果比较236份临床确诊的活动性肺结核患者痰标本,涂片、罗氏培养和Phab法检查结果分别有64份(27.1%)、78份(33.1%)和114份(48.3%)阳性;比较Phab与涂片和培养的阳性检测率,Phab检出率远高于涂片法,差异有统计学意义(X2=77.706,P＜0.01),Phab检出率高于罗氏法检出率,差异有统计学意义(X2=95.678,P＜0.01).结论FASTPlaque TB方法能快速、简便地检测结核分枝杆菌,且检出率较高,可作为结核病诊断的重要方法.