高效液相色谱法同时测定果蔬中五种类胡萝卜素

目的建了高效液相色谱法同时测定果蔬中的叶黄素(Lut)、玉米黄素(Zea)、β-隐黄素(Cryp)、α-胡萝卜素(α-C)和β-胡萝卜素(β-C)的水平。方法均质后的样品经皂化、石油醚提取、水洗和浓缩后,以含2%水的甲醇-乙腈混合液(25:75)和叔丁基甲基醚为流动相,在Waters C30柱中分离,二极管阵列检测器检测,外标法定量。结果与结论上述5种胡萝卜素在0.05～10 g/ml范围内有良好的线性,相关系数r均大于0.997,三水平加标回收率均大于80%(α-C除外),每个加标水平的6次重复试验RSD<12.7%。该方法同时测定了蔬菜中的Lut、Zea、Cryp、α-C、β-C等5种类胡萝卜组分的含量,方法简便、快速、准确。用本法对市场春季常见蔬菜和水果进行了测定,测定结果与文献报道结果基本相符。     

Staphylococcal endocarditis as the first manifestation of heritable protein S deficiency in childhood

A 12-year-old Japanese girl developed infective endocarditis and central nervous system disease. The previously healthy girl showed altered consciousness and abnormal behaviors along with the classical signs of septic emboli. Staphylococcus aureus was isolated from peripheral blood, but not, the pleocytotic cerebrospinal fluid. Diagnostic imaging studies revealed a vegetative structure in the morphologically normal heart, and multiple thromboembolisms in the brain and spleen. Low plasma activity of protein S (12%) and thrombophilic family history allowed the genetic study, demonstrating that she carried a heterozygous mutation of PROS1 (exon 13; 1689C > T, p.R474C). Surgical intervention of the thrombotic fibrous organization and subsequent anticoagulant therapy successfully managed the disease. There are no reports of infective endocarditis in childhood occurring as the first presentation of heritable thrombophilia. Protein S deficiency might be a risk factor for the development or exacerbation of infective endocarditis in children having no pre-existing heart disease.     

巴尔通体体外药敏试验方法研究

目的优化巴尔通体体外药敏试验方法,检测多种抗生素对巴尔通体的最低抑菌浓度(MICs),并分析耐药性。方法优化Etest法试验条件;将该方法与琼脂稀释法进行比较,评价该方法的可靠性。采用Etest法,检测了7株ATCC参考株对22种抗生素的MICs,数据分析使用SPSS 13.0软件。结果确定含5%羊血的胰酶大豆琼脂培养基为最佳培养基、2.0 MCF(麦氏浊度)度为最佳细菌接种浓度,7天为最佳孵育时间。测试的7株巴尔通体在体外对强力霉素等13种抗生素敏感(MIC0.016),对克林霉素等4种抗生素MIC偏高。结论 Etest法简便易行、定值准确、重复性好、结果可靠,可以用于巴尔通体体外药敏试验,并获得了巴尔通体的一些体外药敏数据,为将来制订巴尔通体药敏标准提供一定的依据。     

库克沙门菌引起的食物中毒病原学检测

目的:检测从食物中毒事件中分离到的致病菌的生物学特性,确定食物中毒的病原。方法:参照GB4789.4-2010的方法,对检出的菌株进行表型的鉴定;采用WHO推荐的改良K-B纸片法对检出的菌株进行抗生素敏感试验;运用PFGE方法对检出的菌株进行分子分型及流行病学特征分析。结果:从5份粪便样品中检出5株库克沙门菌,从3份剩余食物中检出1株库克沙门菌,共计6株菌。血清抗原式均符合[1,3,19:g,m:-];生物学性状和药敏试验结果一致;PFGE带型完全一致。结论:本次食物中毒是由库克沙门菌污染引起;PFGE技术适用于菌株的同源性分析和传染源的追踪。     

一起两种血清型副溶血性弧菌食物中毒的毒力基因及分子分型研究

目的:对一起两种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行毒力基因及分子分型研究。方法:参照WS271-2007等标准对10名病人的肛拭进行致病菌的检测,对分离的副溶血性弧菌进行血清学试验;运用荧光定量PCR检测分离菌株的毒力基因,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果:10份样本均检出O4:K8血清型副溶血性弧菌,其中5份样本同时检出O3:K6血清型副溶血性弧菌。两种血清型的副溶血性弧菌毒力基因检测均为tdh阳性、trh阴性。PFGE分型显示,同一血清型的菌株为高度相似克隆,相似度在92.9%～100%之间,同一样本不同血清型的菌株为不同克隆。结论:这是一起由O4:K8和O3:K6两种血清型副溶血性弧菌混合感染引起的食物中毒。     

熔解曲线分析方法甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的:采用熔解曲线分析技术,建立一种快速、简便、准确地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7方法。方法:选取肠出血性大肠杆菌O157:H7编码脂多糖基因(rfbE)和编码鞭毛抗原基因(fliC)作为检测靶基因,建立荧光PCR反应体系。结果:通过多种标准菌株试验,结果显示所建立的熔解曲线分析法可特异性地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7;纯培养的灵敏度达到2.8×101cfu/ml;检测108例临床样本,其中18例肠出血性大肠杆菌O157:H7阳性,3例为肠出血性大肠杆菌O157:非H7阳性,与常规培养方法的符合率达到100%。结论:本方法可简便、准确地甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7,结果可靠,通过进一步增加反应体系中引物的数量可同时对肠出血性大肠杆菌其他血清型进行鉴定。     

高效液相色谱法同时测定婴幼儿食品和乳品中的叶黄素、α-胡萝卜素和β-胡萝卜素

目的:建立高效液相色谱法同时测定奶粉中的叶黄素(Lut)、α-胡萝卜素(α-C)和β-胡萝卜素(β-C)的测定方法。方法:样品经皂化、石油醚-乙醚(1∶1)提取、水洗和浓缩后,以含2%水的甲醇-乙腈混合液(25∶75)和叔丁基甲基醚为流动相,在Waters C30柱中分离,二极管阵列检测器检测,外标法定量。结果:上述3种胡萝卜素在0.05μg/ml～4μg/ml范围内有良好的线性,相关系数R2均大于0.998,三水平加标平均回收率在80%～104%之间,每个加标水平的6次重复试验RSD<7.7%。结论:该方法可同时测定奶粉中的叶黄素、α-胡萝卜素和β-胡萝卜素含量,方法简便、快速、准确。     

液相色谱法和超高压液相色谱-串联质谱法测定太湖水中微囊藻毒素的比较

目的:比较高效液相色谱法和超高压液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)两种方法,分别考察其监测太湖水中MC-LR、RR、YR三种微囊藻毒素的优缺点。方法:分别以HPLC法和UPLC-MS/MS法进行测定,用回归法考察两种方法测定结果的相关性,比较测定结果。结果:两种方法的定量结果在统计学上无显著性差异,具有良好的相关性(P>0.05);对HPLC法方法定量限水平(RR、LR、YR方法定量限分别为0.011μg/L、0.015μg/L、0.017μg/L)以上的样品,两种方法的检出率基本相符;方法定量限水平以下的样品,由于UPLC-MS/MS具有更高的灵敏度,检出率高于HPLC法。结论:两种方法均能够应用于太湖水中微囊藻毒素的测定。HPLC法因其准确、实用和配置成本相对低的优点,更适合推广,可用于太湖水中微囊藻毒素的常规监测。UPLC-MS/MS方法灵敏度高,但配置成本高,更适用确认验证。     

荧光定量PCR技术用于快速检测水痘-带状疱疹病毒的研究

目的:建立特异、灵敏、高效的TaqMan荧光定量PCR方法用于水痘-带状疱疹病毒(VZV)的快速检测。方法:从GenBank下载几十株VZV基因序列进行同源性比对,选取高度保守区ORF62(编码即刻早期蛋白IE62)设计荧光定量PCR引物和TaqMan探针,并对反应体系与反应条件进行优化,同时验证方法的特异性、敏感性和重复性。结果:本方法对VZV的检测具有高度特异性,与肠道病毒EV71型,柯萨奇A、B组,麻疹病毒,风疹病毒,流感病毒以及相关腺病毒B、C组等均无交叉反应;检测灵敏度达36 copies/μl;反应体系具有很高的稳定性;整个操作过程仅需3 h～4 h。采用该方法对9份疑似VZV患者标本进行检测均为阳性,检测灵敏度明显高于病毒分离法、普通PCR法。结论:本研究建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异、灵敏、高效,适用于VZV早期感染病例的快速确认以及暴发疫情的应急诊断中。