蚤、蜱中巴尔通体的分离培养及检测鉴定

目的了解蚤、蜱在我国作为巴尔通体传播媒介的可能性，获得其自然状态下存在于吸血节肢动物中的证据。方法采集家猫、狗、牛及鼠类动物体表寄生蚤、蜱，采用含5％去纤维兔血脑心浸液（brain heart infusion，BHI）培养基置于35℃含5％ CO2培养箱中从蚤、蜱中分离巴尔通体，疑似菌落应用聚合酶链反应技术（Polymerase Chain Reaction，PCR）扩增巴尔通体特异基因片段，阳性产物测序并用同源性比较及系统发育分析等方法分析确定巴尔通体的亲缘关系。结果分别从猫栉首蚤、微小牛蜱中各分离出1株巴尔通体，用5对巴尔通体属特异性引物进行PCR反应，扩增产物均产生阳性目标带，证实为巴尔通体属微生物。序列同源性比较发现蚤、蜱分离株之间同源性较小，tRNA^Ile-tRNA^Ala地基因间隔区序列为58．2％、ftsZ基因序列为72．8％；这两株菌分别与云南鼠类宿主血液中分离的巴尔通体菌株RT222SM、RT221SM同源性最大，与其它已知巴尔通体同源性均较小。蚤培养物与RT222SM的tRNA^Ile-tRNA^Ala基因间隔区的同源性是77．9％、与ftsZ是96．2％；蜱培养物与RT221SM的tRNA^Ile-tRNA^Ala基因间隔区的同源性是99．4％，与云南鼠血中分离的Rf1561yn的gltA基因338bp核酸序列同源性为99．1％，基于gltA种系发育分析提示与Rfl561yn亲缘关系最近。结论从猫栉首蚤、微小牛蜱中分离培养出巴尔通体，为蚤、蜱作为巴尔通体传播媒介提供了线索，同时为在我国进一步开展媒介生物中巴尔通体感染情况调查提供了实验方法的参考依据。同源性搜索、比较及系统发育分析支持这2株巴尔通体与中国云南分离的巴尔通体基因型相似，而与国外的巴尔通体分离株亲缘关系较远。     

内蒙古小型兽类巴尔通体感染情况调查

目的 了解我国内蒙古部分地区小型兽类的巴尔通体(Bartonella)感染情况,为该地区人群巴尔通体感染的预防控制提供科学依据.方法 2012、2013年用夹夜法在内蒙古不同地区捕获小型兽类,无菌操作取鼠肝和脾,用聚合酶链反应(PCR)检测巴尔通体,对阳性产物测序,将所测核酸序列提交到GenBank,做相似性比较及序列分析.同时分别用肝和脾各30份样品分离培养巴尔通体,疑似菌株提取DNA,对gltA基因测序并根据序列进行系统发育分析,确定巴尔通体属种,并分析不同脏器、不同鼠种的阳性率.结果 2012年在内蒙古锡林郭勒盟二连浩特市共捕鼠8种117只,各鼠种均培养出巴尔通体菌,培养阳性率为56.41％(66/117),肝脏DNA直接PCR阳性率为57.26％(67/117),二者差异无统计学意义(P=0.945).30份肝样品培养阳性21份,30份脾样品培养阳性13份,二者差异亦无统计学意义(P=0.331).2013年捕获并培养分离小型兽类13种86只,有8种检出巴尔通体,培养阳性率为38.37％(33/86),其中达乌尔黄鼠最高(75.00％),其次为五趾跳鼠(71.43％)和布氏田鼠(64.29％).经分析达乌尔黄鼠、五趾跳鼠与布氏田鼠的巴尔通体阳性率差异无统计学意义(P=0.883).序列分析表明内蒙古部分地区小型兽类中共检出4个巴尔通体种群:B.jaculi、B.grahamii、B.washoensis和B.vinsonii,有明显的宿主特异性.结论 巴尔通体在内蒙古部分地区小型兽类中广泛存在,存在对人群致病的风险,序列分析显示出巴尔通体基因型别的多样性,为内蒙古及我国北方其他地区巴尔通体的研究奠定了基础.     

云南香格里拉山地自然风景区蚤类多样性的研究

蚤类是传播多种自然疫源性疾病的重要媒介昆虫,人类在自然风景区户外活动时存在被其叮咬而感染虫媒传染病的风险。为了解云南香格里拉县主要山地自然风景区蚤类的多样性状况,2005年秋,我们选择了虎跳峡、哈巴雪山、白水台、千湖山和红山5个不同海拔高度的自然风景区为调查研究的空间范围,应用夹线法捕小型兽类并收集其体表寄生蚤类进行调查取样,对蚤类多样性、群落相似性和蚤类与宿主关系进行了测度和比较研究。结果显示：（1）共捕获蚤类633只,隶属4科19属34种,其中发现云南省1新纪录属及种（喜马狭蚤Stenoponiahimalayana）,当地新纪录蚤类10种（亚种）,显示当地山地自然风景区内蚤种丰富;（2）红山和千湖山景区蚤种丰富度较高（各18种）和物种多样性也较高（分别为2．50和2．18）,而虎跳峡景区捕获的蚤类丰富度（8种）和物种多样性指数（1．79）最低,蚤类物种丰富度和Shannon—Wienor指数均随着景区海拔的升高呈递增趋势;（3）综合分析Jaccard指数和聚类分析的结果,5个风景区被划为虎跳峡-哈巴雪山-白水台、千湖山-红山两个类型,相对植被和水湿条件而言,人为干扰或是导致这一结果更重要的原因;（4）5个自然风景区蚤类群落与宿主群落丰富度的Spearman秩相关系数为0．24,Shannon—Wiener指数的Spearman秩相关系数为0．60,显示5个景区的蚤类多样性与宿主多样性无相关。     

非ST段抬高心肌梗死的临床分析

急性冠脉综合征(ACS)的病死率占心血管病之首位,近年来将其分为ST段抬高的心肌梗死(STEMI)与非ST段抬高心肌梗死(NSTEMI)和不稳定型心绞痛及心脏缺血性猝死.本研究对NSTEMI的临床及冠脉造影结果进行分析,旨在了解其特点,以便对临床诊治NSTEMI提供帮助.     

云南省德宏州居住区啮齿动物携带巴尔通体的调查研究

目的 调查云南省德宏傣族景颇族自治州（德宏州）居住区啮齿动物的巴尔通体感染和分布特点,为相关疾病防制提供参考依据。方法 采用笼夜法捕鼠,采集鼠类脾脏标本,用胰酶大豆琼脂培养基分离巴尔通体,用聚合酶链式反应法扩增巴尔通体gltA基因片段,并进行核苷酸序列测定和系统发育分析。结果 2011年在德宏州居住区共捕获啮齿动物5属9种340只和食虫动物2种18只,黄胸鼠为优势种（77.09%,276/358）。这些动物的脾脏标本中巴尔通体分离率为24.86%（89/358）,其中黄胸鼠分离率为28.99%（80/276）,其他阳性鼠种为黑缘齿鼠（5株）、社鼠（1株）、大绒鼠（1株）、小泡灰鼠（1株）和臭鼩鼱（1株）。共获得85株巴尔通体gltA基因核苷酸序列,进化分析表明,40株为特利波契巴尔通体（Bartonella tribocorum）,28株为伊丽莎白巴尔通体（B.elizabethae）,11株为昆州巴尔通体（B.queenslandensis）,3株为森林巴尔通体（B.silvatica）,3株未定种。黄胸鼠携带上述所有种类的巴尔通体。结论 德宏州啮齿动物中至少存在4种巴尔通体的流行,巴尔通体具有遗传多样性特点。以特利波契巴尔通体、伊丽莎白巴尔通体和昆州巴尔通体为主要流行菌株,黄胸鼠为当地居住区巴尔通体的主要宿主。今后应加强巴尔通体相关疾病的监测和防制工作。     

巴尔通体对19种抗生素体外敏感性分析

目的 检测巴尔通体菌株对10类19种抗生素最低抑菌浓度（MICs）,分析药物敏感性及耐药性,为指导临床用药和耐药监测提供实验和数据参考。方法 采用E试验法,检测巴尔通体属11种、35株菌株对强力霉素、阿奇霉素、利福平等19种抗生素的MICs。将培养的巴尔通体菌制成McFarland（MCF）2.0浊度的菌悬液,均匀涂布于含5%去纤维羊血的胰酶大豆琼脂培养基上,置5% CO2的37℃培养箱培养。培养5~7 d后判读MICs。结果 35株巴尔通体菌在体外对强力霉素、阿奇霉素、红霉素、克拉仙霉素等13种抗生素敏感,MICs 0.016 mg/L;34株对利福平敏感,MICs 0.002 mg/L;对克林霉素、丁胺卡那霉素、万古霉素、多粘菌素和磺胺类5种抗生素不敏感,MICs较高。结论 绝大多数巴尔通体菌对强力霉素等14种抗生素敏感,但也对克林霉素等5种抗生素不敏感,在对巴尔通体病进行治疗时要注意选择敏感药物。     

巴尔通体体外药敏试验方法研究

目的优化巴尔通体体外药敏试验方法,检测多种抗生素对巴尔通体的最低抑菌浓度(MICs),并分析耐药性。方法优化Etest法试验条件;将该方法与琼脂稀释法进行比较,评价该方法的可靠性。采用Etest法,检测了7株ATCC参考株对22种抗生素的MICs,数据分析使用SPSS 13.0软件。结果确定含5%羊血的胰酶大豆琼脂培养基为最佳培养基、2.0 MCF(麦氏浊度)度为最佳细菌接种浓度,7天为最佳孵育时间。测试的7株巴尔通体在体外对强力霉素等13种抗生素敏感(MIC0.016),对克林霉素等4种抗生素MIC偏高。结论 Etest法简便易行、定值准确、重复性好、结果可靠,可以用于巴尔通体体外药敏试验,并获得了巴尔通体的一些体外药敏数据,为将来制订巴尔通体药敏标准提供一定的依据。     

猴株五日热巴尔通体药敏及生化特性研究

目的 了解猴株五日热巴尔通体的生化特性和药物敏感性, 为进一步研究五日热巴尔通体的耐药机制奠定基础。方法 采用E test法, 检测1株五日热ATCC参考株及10株五日热巴尔通体猴分离株的生化特性及对14种抗生素的最低抑菌浓度(MIC)。结果 H15SC对利福平高度耐药(MIC256), 其余菌株敏感;H98SC对克林霉素耐药, 其余菌株敏感;除S13外, 其余10株菌株对丁胺卡那霉素、多粘菌素MICs值较高;全部菌株对阿奇霉素、头孢他啶、环丙沙星、庆大霉素、红霉素、妥布霉素、氯霉素、强力霉素、苄星青霉素敏感。结论 首次发现巴尔通体菌株对利福平高度耐药, 需要进一步了解其耐药机制, 减少不合理用药, 预防利福平耐药在人分离株中发生。     

滇西地区室内鼠形动物巴尔通体感染情况调查研究

目的 了解滇西地区室内鼠形动物巴尔通体感染状况。方法 在滇西地区8个州(市)抽取10个县(市、区)40个自然村,随机抽取800户家庭(每村20户),进行室内捕鼠,采集鼠脾脏标本并提取基因组DNA,运用聚合酶链反应(PCR)扩增巴尔通体枸橼酸合酶(gltA)基因,阳性者进行测序分析。结果 捕获9种421只鼠形动物,采集脏器样本404份,PCR扩增阳性64份,阳性率为15.84%。9种鼠形动物中仅黄胸鼠和褐家鼠检出阳性,阳性率分别为23.05%(62/269)和8.70%(2/23)。10个县(市、区)中6个检出阳性。基因分析表明携带的巴尔通体至少存在6种基因型:B. tribocorum、B. queenslandensis、B. elizabethae、B. rochalimae及2个可能的新型。结论 滇西地区室内鼠形动物感染巴尔通体,且呈现基因多样性特征,部分县(市)阳性率较高,需加强监测和预防控制。     

用PCR方法检出蚤类携带巴尔通体

目的调查我国巴尔通体宿主动物体表寄生蚤类是否携带巴尔通体。方法2003年6～7月在云南省大理州云龙县居民区采集家猫、狗、鼠类等体表寄生蚤，用3对巴尔通体属特异性引物BhCS．781p—BhCS．1137n、Bh．311p—Bh．452n和TI1e．455p—TA1a．885n进行聚合酶链反应(PCR)，扩增巴尔通体gltA和16S～23S rRNA ITS中部分核酸片段，检测采集的蚤类是否感染巴尔通体。结果共采集251只寄生蚤，包括猫栉首蚤、人蚤、缓慢细蚤等7个常见蚤种，从1组猫栉首蚤和1组缓慢细蚤中扩增出目标带，证实有巴尔通体感染。结论猫栉首蚤和缓慢细蚤能够感染巴尔通体，是该种病原体的潜在传播媒介，间接表明当地家猫和鼠类动物存在巴尔通体感染。