人直肠癌组织匀浆上清液对树突状细胞内皮化的影响

目的:观察人直肠癌组织匀浆上清液对人外周血来源的树突状细胞(DC)内皮化的影响.方法:用ELISA方法检测直肠癌组织、癌旁组织匀浆上清液中血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的含量.采集健康男性志愿者外周血单个核细胞,常规方法培养,分别在第1、3、7、10和14天收集细胞,流式细胞仪动态监测CD1a、CD31和CD34的表达.分3组培养DC细胞,分别在第3和7天加入直肠癌组织匀浆上清液、癌旁组织匀浆仁清液及等体积生理盐水(对照组).用免疫细胞化学方法检测3组细胞的CD1a、CD31及CD34双阳性和血管内皮细胞Ⅷ因子(vWF)的表达.结果:直肠癌组织匀浆上清液VEGF-A的含量[(0.837±0.345)μg/L]高于癌旁组织匀浆上清液[(o.236±0.216)μg/L](t=4.668,P<0.001).不同培养时间收集的DC表面分子CD1a、CD31和CD34的阳性表达率差异均有统计学意义(F分别为1 832.478、20.410和49.137,P均<0.001).第3和7天,癌及癌旁组织匀浆上清液组CD1a+ CD31+、CD1a+CD34+的表达率均高于对照组(F分别为342.21、544.70、107.09和189.72,P均<0.001);且癌及癌旁组织匀浆上清组第3天CD1a+CD31+、CD1a+CD34+的表达均高于第7天(t分别为13.110、25.480、9.115和21.550,P均<0.001).癌[(6.3 ± 1.1)个/HPF]、癌旁[(6.0 ± 0.6)个/HPF]组织匀浆上清组vWF的表达均高于对照组[(0.8 ± 0.1)个/HPF](F=176.57,P<0.001,但前2组差异无统计学意义(P>0.05).结论:直肠癌组织匀浆上清液可促使未成熟DC发生内皮化.     

负载人HUVECs抗原的DC疫苗诱导小鼠对宫颈癌U14的特异性免疫反应

目的:探讨负载人脐静脉内皮细胞(HUVEC)抗原的DC疫苗诱导小鼠对宫颈癌U14的特异性免疫反应.方法:原代培养和鉴定人HUVECs,制备抗原,负载树突状细胞(DC),免疫小鼠,免疫结束后1周小鼠皮下注射小鼠宫颈癌U14细胞,观察肿瘤生长大小、检测免疫后小鼠脾细胞体外CTL效应、表面CD3+CD8+百分率和血清抗体滴度,通过细胞免疫组化和Western blot血清特异性反应分析.结果:经免疫组化鉴定成功培养出纯度高的HUVECs,抗原负载DC并注射BALB/c小鼠后,PBS组肿瘤生长最快,DC组和HUVEC-DC组肿瘤也有生长,但生长较慢,在2周后HUVEC-DC组肿瘤消失,3周后DC组肿瘤消失.小鼠脾细胞体外CTL结果显示HUVEC-DC组有明显的特异性杀伤HUVEC的作用.CD3+CD8+百分比提示HUVEC-DC组细胞毒性T细胞比例较其他两组高.小鼠血清抗体滴度示有抗体产生,免疫组化检测示组与HUVEC有特异性抗原抗体反应,Western blot显示在相对分子质量(Mr)130 000和220 000处有特异性条带.结论:负载人HUVECs抗原的DC疫苗和DC疫苗对小鼠宫颈癌U14有抑制作用,HUVEC-DC疫苗诱导了小鼠的细胞和体液免疫,并诱导了针对HUVECs细胞中的某些抗原的应答,这些抗原可能是整合素αν和VEGF-R2.     

曲古菌素A通过抑制MAPK/ERK通路上调食管癌EC1细胞CAR的表达

摘 要　目的：观察曲古菌素A（trichostatin A,TSA）对人食管癌细胞EC1膜表面柯萨奇病毒-腺病毒受体(Coxsachievirus and adenovirus receptor, CAR)表达水平的影响,探讨MAPK/ERK信号通路在TSA上调CAR表达中的作用。方法：0.3、0.5、1.0 μmol/L的TSA处理EC1细胞48 h,采用免疫荧光、RT-PCR、Western blotting检测CAR的表达。以1.0 μmol/L TSA作用EC1细胞1、6、12、24、48 h,Western blotting检测p-ERK、CAR表达水平的变化,分析CAR表达和p-ERK水平变化的相关性。结果：0.3、0.5、1.0 μmol/L TSA处理EC1细胞后,CAR蛋白和mRNA水平均明显增加（P<0.05),并呈剂量依赖关系。1.0 μmol/L TSA作用EC1细胞6、12、24、48 h后,CAR蛋白表达较对照组均明显增加（P<0.05);p-ERK表达水平均明显下降（P<0.05),两者变化呈显著负相关（r=-0.886,P<0.01)。结论：TSA能够上调人食管癌EC1细胞膜表面CAR的表达水平,其机制可能与其抑制MAPK/ERK通路有关。     

DNA聚合酶β基因表达对NIH3T3细胞增殖影响

目的 观察不同类型DNA聚合酶B(DNA Polymerase β,DNA pol β)在小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)的表达及细胞增殖特性的变化.方法 用脂质体转染的方法,将野生型(wild type,wt)和食管癌缺失突变型(delete mutional type,dmt)的pol β重组荧光载体pEGFP-C3-pol β转染NIH3T3细胞,建立稳定表达pol β的细胞系,通过荧光倒置显微镜观察其定位,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法绘制生长曲线,流式细胞仪测定其细胞周期.结果 转染2种类型pol β的NIH3T3细胞株中,均有外源基因mRNA水平和蛋白水平的表达;荧光倒置显微镜结果显示,野生型的以细胞胞核为主,缺失突变型的pol β表达以细胞胞浆为主,从第3 d开始,缺失突变型的细胞生长速度较野生型和对照组明显增快(P<0.05);转染缺失突变型NIH3T3细胞的S期细胞比例为68.29%,明显高于野生型的57.18%、对照组的58.12%和未转染NIH3T3细胞的57.35%(P<0.05).结论 外源野生型pol β基因表达后对NIH3T3细胞的增殖速度无明显影响,而缺失突变型则使其增殖速度加快.     

阻断PKA信号通路对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响

目的观察蛋白激酶A（PKA）信号通路在食管癌EC9706细胞增殖和凋亡中的作用。方法利用PKA特异性阻断剂H89作用于食管癌EC9706细胞,倒置显微镜下观察食管癌EC9706细胞形态学改变;WST-8检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC和PI双染法检测细胞凋亡。结果与对照组相比,H89作用于食管癌EC9706细胞24 h后,部分细胞出现细胞形态缩小,细胞增殖减慢;细胞增殖实验显示,吸光度值降低（P〈0.05）,细胞存活率下降;细胞凋亡检测结果显示,阻断PKA通路,促进细胞早期凋亡和晚期凋亡（P〈0.05）。结论利用H89阻断PKA信号通路,可以改变食管癌EC9706细胞生物学特性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

4.1蛋白家族在大鼠大脑皮质神经细胞中的表达和定位

背景:研究发现不同组织和细胞表达的4.1蛋白种类和剪切形式差别很大,不同4.1蛋白的不同结构域和细胞定位与其功能有必然的联系.目的:观察4.1蛋白家族中4.1R,4.1N,4.1G和4.1B在大鼠大脑皮质神经细胞中的mRNA和蛋白表达和细胞定位.方法:用RT-PCR,Western blot和免疫细胞化学染色及激光扫描共聚焦显微镜技术检测4.1蛋白家族在新生SD大鼠大脑皮质神经细胞中的mRNA和蛋白表达和在细胞中的定位.从细胞水平分析4.1蛋白家族中4.1R,4.1N,4.1G和4.1B的细胞内表达和定位的差异.结果与结论:4.1蛋白家族mRNA和蛋白在大鼠大脑皮质神经细胞均有所表达.4.1R主要表达在神经细胞胞膜和胞浆中,特别是突起延伸或轴突延伸部位高表达.4.1G主要表达在神经细胞的胞浆中,尤其是突起部位.4.1N主要表达在突起胞浆和胞膜.4.1B主要表达在胞体部位的胞浆和胞膜中.结果提示,4.1R,4.1G,4.1N和4.1B蛋白在体外培养的皮质神经细胞中均有不同程度的表达,并且在细胞内定位不同.     

辣椒素联合DDP对宫颈癌HeLa229细胞增殖及侵袭力的影响

目的 探讨辣椒素联合DDP对宫颈癌HeLa229细胞增殖、耐药和侵袭力的影响.方法 将HeLa229细胞分为对照组、辣椒素组、DDP组和联合用药组,MTT法检测72 h后细胞的增殖情况及辣椒紊联合应用不同浓度DDP对宫颈癌细胞增殖的影响.Boyden chamber体外侵袭实验检测辣椒素及联合DDP后细胞体外侵袭力的变化.结果 MTT实验表明,辣椒素与DDP联合应用可明显抑制HeLa229细胞的增殖.与单独使用辣椒素或DDP组相比,细胞存活率显著降低;对照组和辣椒素组细胞的存活率均随着DDP浓度的增加而下降,但在同一浓度,辣椒素与DDP联合应用可明显提高HeLa229细胞对化疗药物的敏感性.体外侵袭实验结果表明,与单独使用辣椒素或DDP组相比,辣椒素与DDP联合应用使穿越Matrigel胶的细胞数明显减少.结论 辣椒素与DDP联合应用,可以抑制宫颈癌细胞的增殖和体外侵袭力,增强宫颈癌细胞对化疗药物的敏感性,因此辣椒素有望成为宫颈癌治疗中的辅助用药.     

宫颈癌组织中DNA聚合酶β基因突变检测

目的：探讨宫颈癌组织中有无DNA聚合酶β基因(polβ)突变。方法：采用RT-PCR法、PCR-SSCP分析法对12例正常宫颈组织、18例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)及34例宫颈鳞癌组织进行poll3突变检测。结果：CIN及宫颈癌组织中存在polβ突变,宫颈癌组织中的突变率(13／34)高于CIN(2／18),后者高于正常宫颈组织。测序结果表明宫颈癌组织中polβ 660位发生A→G突变。结论：宫颈癌组织中的DNA聚合酶β基因突变可能与宫颈癌的发生发展有关。     

全反式维甲酸诱导的食管癌细胞DNA聚合酶β的表达

目的：了解食管癌细胞分化过程中DNA聚合酶β(polβ)基因的表达。方法：采用全反式维甲酸(ATRA)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用甲基绿-派洛宁染色、原位杂交、免疫组化和Western blot方法分别检测细胞分化和polβ基因的表达。结果：ATRA作用5d后可以诱导Eca109细胞分化。Wt—polβ和mt—polβ(截短的)基因的表达随着Eca109细胞的分化而降低。结论：ATRA可下调Eca109细胞wt-polβ和mt—polβ的表达,促使其分化。     

pcDNA3/TCRγV1真核表达载体的构建及表达

目的：构建含TCRγV1基因的真核表达质粒并检测其存小鼠骨骼肌中的表达。方法：从人淋巴瘤Jurkat细胞中提取RNA,用RT-PCR法扩增含BamH Ⅰ与Hind Ⅲ酶切位点的TCRγV1基因序列,将TCRγV1基因PCR产物插入pcDNA3后转化到大肠杆菌DH5α,阳性克隆酶切鉴定后测序分析。大量提取质粒,股四头肌注射法免疫小鼠,RT—PCR法检测小鼠肌肉巾TCRγV1 mRNA的表达。结果与结论：pcDNA3／TCRγV1重组质粒构建成功,并能在小鼠骨骼肌中表达。