WNT5A干扰对鼻咽癌细胞侵袭转移能力的影响

目的观察WNT5A干扰对鼻咽癌细胞侵袭转移能力的影响。方法以高转移鼻咽癌细胞CNE2的亚克隆Clone-18为研究对象,通过逆转录病毒感染系统,建立WNT5A稳定干扰的细胞株,并用免疫印迹进行鉴定,划痕修复实验和三维培养观察细胞侵袭迁移能力的改变。结果WNT5A在高转移鼻咽癌细胞株Clone-18中的蛋白表达明显减少,稳定干扰WNT5A的细胞模型建立。当干扰WNT5A后,Clone-18的侵袭转移能力大大降低。结论WNT5A高表达与鼻咽癌侵袭转移密切相关。     

二烯丙基二硫通过细胞外信号调节激酶途径调节HepG2细胞Survivin表达

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法W estern b lot法检测survivin、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）和p-ERK1/2的表达;AO/EB染色观察细胞形态学变化。结果ERK1/2抑制剂PD98059抑制DADS诱导survivin表达的作用。PD98059与DADS联合应用可以促进HepG2细胞凋亡。结论DADS诱导HepG2细胞survivin的表达与ERK1/2信号通路有关。     

Caveolin-1在氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达

目的观察Caveolin-1在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达变化,进而分析Caveolin-1在巨噬源性泡沫细胞形成过程中的作用。方法采用75mg／L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育不同时间,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化,建立巨噬细胞荷脂化模型;Western-blot检测Caveolin-1蛋白的表达改变。结果75mg／L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育48h后,细胞内胆固醇酯／总胆固醇的比值上升至42.3％±5.9％,符合荷脂细胞特征。Caveolin-1的蛋白表达较0h组明显减弱。     

染料木黄酮衍生物抗血管内皮氧化应激损伤的活性筛选

目的:对8个染料木黄酮衍生物抗血管内皮氧化应激损伤的活性进行筛选。方法:采用全自动生化分析仪测定8个染料木黄酮衍生物对氧化应激损伤的血管内皮细胞乳酸脱氢酶释放的影响,PI染色FCM检测8个染料木黄酮衍生物对内皮细胞凋亡的影响。结果:在所有衍生物中,7-二氟亚甲基-5,4-二甲氧基染料木黄酮抗血管内皮氧化应激损伤的活性最高,且其作用强于先导化合物染料木黄酮。结论:通过筛选获得的7-二氟亚甲基-5,4-二甲氧基染料木黄酮具有更强的抗血管内皮氧化应激损伤作用,具有进一步研究的价值。     

血管紧张素转换酶2与高血压

血管紧张素转换酶2与血管紧张素转换酶一样参与肾素-血管紧张素系统中血管紧张素的代谢。它通过将血管紧张素Ⅱ水解成血管紧张素1-7对抗血管紧张素转换酶-血管紧张素Ⅱ代谢轴,是平衡肾素-血管紧张素系统内部调节的另一血管紧张素代谢通路。这种系统的内部调节在调节心血管系统活动中起重要作用,其平衡的破坏与高血压等相关疾病的发生发展密切相关,通过调节血管紧张素2来治疗高血压及其并发症可能是本世纪高血压治疗学上的新靶点。     

用于酵母双杂交的M-CSF诱饵载体的构建和鉴定

目的构建用于酵母双杂交系统的结合域(binding domain，BD)诱饵载体pGBKT7-M—CSF，并检测其是否具有自身激活作用。方法用PCR方法从M—CSF cDNA中扩增出M—CSF的胞外活性区，引入酶切位点SalⅠ、NcoⅠ，与pGBKT7载体连接起来，并检测pGBKT7-M—CSF在酵母双杂交系统3中的自激活作用。结果成功构建了BD诱饵载体pGBKT7-M—CSF，并证明其在酵母双杂交系统中无自激活作用。结论pGBKT7-M—CSF可以用于酵母双杂交系统中，找出与M—CSF相互作用的分子。     

DADS活化HL-60细胞G2/M检查点与cyclinB1亚细胞分布的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞G2/M期生长阻滞的分子机制。方法采用MTT法检测DADS对细胞增殖活性的影响、流式细胞术检定细胞增殖周期、蛋白印迹法检测细胞内cyclinB1表达水平。结果DADS呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖活性，且DADS（20μmol／L）与ATRA（10^-6mol／L）对HL-60细胞增殖活性影响相近（P〈0．01），DADS（20μmol／L）作用12h后能引起G2，M期细胞百分数增高并达到最大值，上调cyclinBl的表达水平并诱导cyclinB1细胞质定位。结论DADS能启动HL-60细胞G2/M检查点，它的激活与cyclinB1细胞质定位有关。     

环磷酰胺免疫删减法制备细胞表面抗原单克隆抗体小鼠模型的建立

目的:观察不同剂量环磷酰胺(CP)诱导免疫耐受的作用, 建立一个免疫删减法制备细胞表面抗原单克隆抗体(mAb)的动物免疫模型.方法:雌性 BALB/c小鼠经CHO细胞免疫后分别给予不同剂量的CP诱导免疫耐受, 选择血清抗体效价最低的一组小鼠按常规方式腹腔注射CHO-TM5细胞进行免疫.ELISA测定各小鼠血清中CHO抗体及CHO-TM5抗体效价, 检测血清抗体对CHO细胞与CHO-TM5细胞结合反应的差异性.结果:BALB/c小鼠腹腔注射不同剂量的CP后, 各剂量组均出现不同程度的免疫耐受作用.CP 100 mg/kg组与CP 125 mg/kg组小鼠血清抗体效价较低, 接近阴性对照组.ELISA检测显示CP 100 mg/kg组血清抗体与CHO-TM5细胞呈阳性结合反应, 不与CHO细胞结合;而CP 0 mg/kg组血清抗体与CHO细胞与CHO-TM5细胞的结合反应均呈阳性.结论:CP 100 mg/kg具有良好诱导小鼠对CHO和CHO-TM5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受, 相对增强对CHO-TM5细胞目的抗原hTM的免疫应答的作用, 为免疫删减法制备细胞表面抗原mAb提供了一个理想的动物免疫模型.     

促进细胞内胆固醇流出抑制单核细胞源性泡沫细胞凋亡

目的：研究细胞内胆固醇流出对单核细胞源性泡沫细胞凋亡的影响。 方法： 用50 mg/L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育建立泡沫细胞模型，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率，油红O观察细胞内脂滴的形成情况，用［3H］-胆固醇标记法检测细胞内胆固醇流出率，HPLC检测细胞内胆固醇含量。 结果： 用50 mg/L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育48 h后，细胞内形成大量脂滴，细胞内胆固醇酯含量由(6.8±3.6)mg/g升至(101.7±4.5)mg/g,细胞凋亡率由8.14%升至42.6%（P<0.05）。HDL3处理组和β-环糊精处理组细胞内仅见少量脂滴，胆固醇流出率由（5.2±2.1）%分别升至（36.7±4.6）%和（42.2±3.1）%，细胞凋亡率由42.6%分别降至14.3%和12.0%（P<0.05）。 结论： HDL3、β-环糊精均可通过促进巨噬细胞内胆固醇流出从而抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞凋亡。     

Caveolin-1在肿瘤发生发展及耐药机制中的作用

Caveolin-1是细胞膜微囊（caveolae）的重要组成结构，在大多数正常的细胞中表达丰富。通过其脚手架区域，在多种信号分子向胞内传递信息的过程中发挥着重要作用，其功能研究是生物学研究的热点。而近来研究表明caveolin-1在大多数肿瘤细胞中表达下降甚至缺如，过表达caveolin-1能抑制其恶性生长性状。近来的癌细胞转化及基因敲除等实验结果倾向于caveolin-1就是7q31位点的肿瘤抑制基因。但在少数肿瘤如前列腺癌、乳腺癌患者的细胞中检测到caveolin-1高表达。在纤维原细胞和上皮细胞的凋亡中起促进作用。Caveolin-1与多种肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭、转移以及凋亡关系密切，且可能是肿瘤细胞多药耐药逆转的一个新靶点，以类似于介导胆固醇流出途径的方式将药物排出细胞导致细胞耐药性增强。