职业砷接触工人某些遗传毒性指标的变化

目的探讨职业砷接触工人某些遗传毒性指标的变化。方法选择云南某砒霜厂40人为接触组,当地无明显毒物接触史28人为对照组,检测并评价外周血淋巴细胞微核细胞率、微核率、彗星试验拖尾率和尾长,以及尿中总砷、有机砷水平。结果接触组外周血淋巴细胞微核细胞率、微核率、彗星试验拖尾率、尾长均极显著高于对照组(P<0.01)。尿中总砷、有机砷浓度也高于对照组(均低于0.02mg/L)。微核细胞率和微核率随有机砷浓度、工龄乘积增加有升高趋势(rs=0.356,P=0.024;rs=0.347,P=0.028)。结论职业性砷暴露可导致外周血淋巴细胞染色体和DNA损伤。     

DNA修复抑制剂对彗星试验影响的研究

彗星试验，又名单细胞凝胶电泳，以DNA断裂为检测终点，是筛选遗传毒物的一种较理想的方法。本实验室研究发现彗星试验对黄曲霉毒素B1、重铬酸钾等物质的敏感性远远低于Ames试验。这可能是因为这些物质诱发的单链断裂修复速度较快所致。而且，由于各实验室试验条件不同(如：操作时间、环境温度差异等)，使细胞制片时DNA损伤的修复进程不一，     

子宫颈癌高危妇女中人乳头瘤病毒16和18型血清抗体分布特征

目的 分析HPV16和18型 （HPV16/18） 血清抗体在高危人群中的分布。 方法 召回952名参加2011年河南省新密市子宫颈癌筛查阳性妇女,于2012年采集子宫颈口脱落细胞检测HPV DNA,采用ELISA检测血清HPV16/18抗体。结果 952名妇女中230例 （24.2%） HPVDNA阳性,HPV16/18 病毒样颗粒 （VLP） 抗体阳性率分别为23.2%和6.5%,任意一种HPV16/18VLP 抗体阳性率为 26.8%。HPV16/18 抗体 GMT 分别为 79.1 YU（Yangshengtang Unit）/ml和125.0 YU/ml。HPV16抗体阳性率在不同年龄、 不同病毒载量和不同子宫颈病变组的差异有统计学意义 （P<0.05）; HPV18抗体阳性率与病毒载量相关 （P<0.01）,且在不同病理等级中其滴度分布不同,差异有统计学意义 （P<0.01）。结合两年HPV DNA检测结果,HPV持续感染的妇女HPV16/18抗体阳性率高于HPV新发感染和无HPV感染妇女,差异有统计学意义 （P<0.001）; 相对于无HPV感染妇女,HPV一过性感染者HPV16抗体阳性率和滴度均较高,差异有统计学意义（P<0.001）。结论 HPV16/18 抗体在调查的高危妇女中阳性率较高,且与年龄、 病毒载量、 子宫颈病变程度以及既往感染史有关,病毒载量高、 病变程度重或有既往感染史者更易产生抗体。     

针灸和丹参、芦荟抗衰老作用的实验研究

目的：探讨传统医学在延缓衰老方面的应用前景及其作用机理。方法：用臭氧照射雄性小鼠制造衰老模型，分别以针灸、丹参和芦荟对小鼠进行处理55d，实验完毕，测定各组红细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性和肝组织脂质过氧化物－丙二醛（MDA）的含量，同时以彗星试验对各组动物肝、脾细胞拖尾率和尾长进行检测。结果：与对照组比较，模型组的SOD活性下降，MDA含量升高，肝、脾细胞拖尾率和尾长显著增加。与模型组比较，针灸处理和口服丹参或芦荟无论是在生化指标还是在DNA损伤指标上均显示出一定的抗衰老作用。结论：针灸、丹参和芦荟均能提高机体护抗自由基氧化，保护DNA的能力，从而起到延缓衰老的作用。     

C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞的体外优化培养和酒精及其代谢物毒性效应的探讨

目的建立C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)的体外分离和培养体系,探讨酒精及其代谢物对MSCs的毒性。方法从C57/BL6小鼠的股骨骨髓中分离MSCs,通过优化细胞的培养方法进行有效培养、传代,最终获得纯度较高的MSCs,并对第4代细胞进行CD90和CD34免疫组织化学染色鉴定。对第2代细胞以4×105个/ml密度接种于96孔板,每孔200μl,第2天以用乙醇及乙醛进行染毒,剂量设计为乙醇5.7、17.0、50.0、100.0、150.0mmol/L,乙醛4.5、0.9、0.18、0.036、0.0072、0.00144、0.000288mmol/L,对照组为MSCs以不加乙醇及乙醛的10%胎牛血清的α-MEM培养液培养。3d后MTT检测细胞增殖活性。结果MSCs在前6代表现出较好的稳定性和旺盛的自我增殖能力,免疫组织化学染色显示第4代MSCsCD90呈阳性、CD34呈阴性。MTT检测乙醇在17.0、100.0及150.0mmol/L时出现细胞增殖抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);乙醛>0.18mmol/L时随着浓度增加细胞增殖力减弱,在4.5mmol/L时出现了细胞增殖抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论优化培养体系能有效分离和培养MSCs,乙醇和乙醛均能抑制其增殖,表现出毒性作用,乙醛的毒性作用较乙醇强,其造成的损伤更不容忽视。     

甲状腺素干扰物对甲状腺滤泡细胞分泌甲状腺球蛋白功能的影响

目的了解几种典型甲状腺素干扰物对甲状腺滤泡(FRTL-5)细胞分泌甲状腺球蛋白功能的影响,探讨其干扰甲状腺素水平的细胞学机制及建立甲状腺素干扰物甄别方法的可行性。方法将大鼠FRTL-5细胞体外培养后接种于24孔培养板,每孔细胞数2×105个,待细胞贴壁后分别加入受试物丙硫氧嘧啶、叶枯宁[N,N-甲撑-双(2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑)]、磺胺二甲嘧啶和杀草强,各设1组溶剂对照,置CO2孵箱培养48h后,每孔取1ml培养液,用放射免疫法测定甲状腺球蛋白的浓度。结果4个实验组的甲状腺球蛋白浓度与对照组相比均降低,差异有显著性(P<0.05),且可能存在剂量-效应关系。结论降低甲状腺细胞合成或分泌甲状腺球蛋白可能是这4种甲状腺素干扰物的作用机制之一。FRTL-5细胞分泌甲状腺球蛋白的功能是一个相对灵敏的指标,与其他体内体外实验结合可用于甲状腺素干扰物的一阶段甄别(初筛)方法。     

氟他胺建立SD大鼠尿道下裂模型的实验研究

目的采用抗雄激素类药物氟他胺诱导建立大鼠尿道下裂动物模型,为进一步研究尿道下裂发病的分子作用机制和治疗提供理论和实验依据。方法孕鼠20只,随机分成2组:生理盐水(normal saline,NS)对照组和氟他胺(Flutamide,Flu)组,每组10只。在孕12～17d时连续6d分别经皮下注射等量生理盐水或用生理盐水配制的氟他胺溶液(12.5mg.kg-1.d-1)。于孕18d解剖两只母鼠,提取雄性胎鼠生殖结节做病理切片,同时观察睾丸位置和前列腺发育情况。待孕鼠分娩完毕,即对仔鼠进行记数,并于出生后第2、13、28天测量肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD)和称重;观察每组雄性仔鼠的尿道口和睾丸位置、乳晕数量及拍照。结果与对照组相比,氟他胺组雄性子代大鼠尿道下裂畸形发生率为100%,单侧隐睾发生率为31.25%,解剖观察无前列腺,出现乳晕数均为12个,AGD较对照组明显缩短,有显著统计学差异,但体重随着时间的推移无明显变化。结论用氟他胺可以诱导出稳定、直观的雄性大鼠尿道下裂模型,适宜推广。     

多能干细胞——发育毒性研究的新思路

近年来多能干细胞引起了许多科学家的关注，在临床中已被作为一种基因治疗和细胞治疗手段广泛应用于多种难治之症的研究，如帕金森病、老年性痴呆、肿瘤以及器官移植等。同时，多能干细胞作为一种原始细胞具有旺盛的增殖、自我稳定能力和多向分化的潜能，因此，还可以作为一种新的测试细胞应用于环境因素致发育毒性的检测和机制研究。它的应用无疑为生殖发育毒理研究打开了一扇崭新的大门。     

041 多能干细胞--发育毒性研究的新思路

近年来多能干细胞引起了许多科学家的关注,在临床中已被作为一种基因治疗和细胞治疗手段广泛应用于多种难治之症的研究,如帕金森病、老年性痴呆、肿瘤以及器官移植等.同时,多能干细胞作为一种原始细胞具有旺盛的增殖、自我稳定能力和多向分化的潜能,因此,还可以作为一种新的测试细胞应用于环境因素致发育毒性的检测和机制研究.它的应用无疑为生殖发育毒理研究打开了一扇崭新的大门.     

DNA氧化损伤修复基因HOGG1低表达细胞株的建立及其生物学特性鉴定

目的为研究肺癌发生机制中DNA氧化损伤修复基因HOGG1的可能作用,利用携带有HOGG1特异性锤头状核酶基因的载体与肺腺癌A549细胞株,建立HOGG1低表达细胞株并观察其生物学效应。方法HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体[pcDNA3.1(+)RZ]经脂质体介导转染A549细胞;G418筛选;Neo基因的RTPCR法鉴定阳性克隆细胞;RTPCR半定量检测核酶对HOGG1基因的抑制效应。同时比较转染细胞与正常A549细胞的生长情况、细胞周期、软琼脂克隆形成率以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果转染后G418成功筛选出了阳性转化克隆,经传代形成稳定细胞株。核酶可持续抑制A549细胞HOGG1基因的表达,RTPCR结果显示转染细胞HOGG1mRNA的表达比正常A549细胞低61.5%(P<0.05);转染后,细胞株形态无明显改变;其群体细胞倍增时间为2.05天,稍短于正常A549细胞(2.17d);细胞周期各时相及细胞凋亡率以及细胞增殖指数没有明显改变(P>0.05);软琼脂克隆形成抑制率接近50%(P<0.05);SOD活力比正常A549细胞显著增加(P<0.05)。结论成功建立HOGG1低表达细胞株,所观察的生物学效应多数指标与正常A549细胞无显著差异。