DIFF33H参与TRAIL诱导的人Jurkat T淋巴细胞白血病细胞凋亡调控

目的：研究DIFF33H在人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡中的表达规律及其生物学功能。方法：采用PCR扩增DIFF33H cDNA，Northern blot分析DIFF33H的mRNA表达，MTT法测定细胞凋亡。结果：在重组可溶性TRAIL诱导的人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡过程中，DIFF33H mRNA的表达水平随着Jurkat细胞的凋亡而下降，并对重组可溶性TRAIL的作用具有浓度和时间的依赖性。在抗肿瘤药物5-FU诱导肿瘤细胞凋亡过程中，DIFF33H的mRNA表达水平也显著下降。结论：DIFF33H参与人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat凋亡的调控。     

真核基因的转录调控

自从1953年Watson和Crick确立了DNA的双螺旋结构,近40年来分子生物学研究阐明了遗传信息的传递是由DNA→RNA→蛋白质的“中心法则”以及其逆向转录的补充。然而,直到70年代基因工程技术问世,才有可能深入研究基因表达的时空调控机制。真核基因中由组蛋白和DNA形成的“串珠状”核小体是染色质结构的基本单位。真核基因转录前染色质结构改变     

槲皮素及其衍生物对中性粒细胞功能的影响

槲皮素(Quercetin)是黄酮类化合物,它是人饮食中的非活性成分,是蔬菜、浆果、水果、葡萄酒和啤酒等中的天然成分.黄酮类化合物共有5000种以上,其平均摄入量因地区而不同,但平均吸收是每天23mg,其中槲皮素是吸收最多的,每天16mg.对14个不同国家的饮食研究显示槲皮素的吸收占整个黄酮类化合物吸收的68～73 %,可见槲皮素是黄酮类化合物的重要部分.     

人TRAIL分子胞外区的克隆及新型表达载体的构建

目的：利用基因工程技术克隆人TRAIL分子胞外区41－281片断的cDNA，构建其原核表达载体，从而建立原核表达体系。方法：采用RT－PCR方法从人早幼粒白血病细胞系HL－60的总RNA中扩增TRAIL分子41－281片断的cDNA，以限制性酶切和DNA测序进行鉴定，并将目的片断克隆至原核表达载体pQE-80L。结果：克隆到人TRAIL分子41－281片断的cDNA,DNA测序结果与报道的完全一致；构建了该片断的原核表达载体，为后续基因工程研究打下了基础。结论：成功克隆人TRALL分子41－281片断的cDNA并构建了其原核表达载体。     

胰岛素及其受体在肾缺血再灌注损伤中的作用

目的　探讨肾缺血再灌注 (IR)过程中胰岛素及其受体的作用。方法　采用钳夹肾动脉的方法建造急性缺血再灌注肾损伤模型。将大耳白兔分为对照组、单纯缺血再灌注组 (IR组 )、胰岛素处理组 (Ins+IR组 ) 3组 ,Ins+IR组再灌注的同时给予胰岛素溶液 (Ins3U/ kg.wt) ,而对照组和 IR组则给予等量生理盐水。测定各组动物的血糖、血清胰岛素水平及肾组织胰岛素受体高、低亲和力常数 (Kd1 ,Kd2 )和高、低亲和力受体最大结合容量(Bmax1 ,Bmax2 )。结果　缺血再灌注 2 h后 ,3组动物血糖值、血清胰岛素水平均较术前显著升高 (P<0 .0 5 ) ,IR组尤为显著 ,IR组 Kd1 、Kd2 、Bmax1 、Bmax2 均较对照组显著降低 (P<0 .0 5 ) ,Ins+IR组仅 Bmax2 较对照组显著降低 (P<0 .0 5 ) ;4 8h后 ,3组动物血糖值恢复至正常水平 ,对照组胰岛素水平恢复至正常水平 ,IR组也较 2 h时明显下降(P<0 .0 5 ) ,但仍明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,3组动物 Kd1 、Bmax1 值无差异 ,Ins+IR组 Bmax2 仍维持较低水平 (P<0 .0 5 ) ,Ins组 Kd2 明显高于对照组 (P<0 .0 5 )。结论　在肾 IR过程中 ,内源性胰岛素的作用减弱 ,外源性胰岛素对肾组织高亲和力受体位点无下降调节作用 ,但胰岛素可引起低亲和力受体数目的下调。胰岛素减轻 IR肾损伤的作用主要是     

质粒的制备

随着人类基因组计划的顺利进行 ,一个更为广阔且具活力和应用前景的研究领域人类基因组后计划已形成 ,并吸引全世界顶尖科学家和实验室参与。人类基因组后计划的研究内容主要涉及功能基因的分离、鉴定 ,其编码蛋白质的生物学功能及其可应用研究。本领域所采用的研究方法主要包括分子生物学、蛋白质组学和功能蛋白质学等实验方法。其中 ,分子生物学常用实验方法在研究中使用最广 ,可变性最大 ,且可选择最多。为提高我校广大科学研究者对分子生物学技术和实验方法有一较全面的了解和知晓本校可用的资源 ,特邀请本校分子生物学中心试验室根据其研究工作撰写有关分子生物学常用实验方法的介绍 ,并陆续在本刊上发表 ,供大家参考     

脆性X综合征中不稳定的DNA序列和异常甲基化研究

采用ＰＣＲ结合序列胶分析的方法，对８２条正常中国人Ｘ染色体ＦＲＡＸＡ位点（ＣＧＧ）ｎ重复序列拷贝数的多态性进行了测定，其范围为２１～３１，高峰为２７。并通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析了来自６个Ｆｒａ（Ｘ）家系的１５名成员（ＣＧＧ）ｎ的拷贝数与该重复序列上游ＣｐＧ岛的甲基化状态。Ｆｒａ（Ｘ）患者（ＣＧＧ）ｎ大量扩增并伴随ＣｐＧ岛异常甲基化。Ｆｒａ（Ｘ）携带者女性（ＣＧＧ）ｎ扩增较少，有嵌合现象。其子代或产生更大扩增，或保持原来状态，呈动态突变遗传特征。     

PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性

目的 研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异，探讨PAl-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响。方法 分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒。转染Hela细胞，RT-PCR鉴定，筛选出能稳定表达PAI-2D和PAI-2M的阳性细胞株。用MTT法检测PAI-2的这两个突变体抗凋亡的活性，并利用计算机同源模建，比较PAI-2的这两个突变体空间构象的变化。结果 突变体PAI-2M能抑制TNF-αa诱导的Hela细胞凋亡，而PAI-2D则不能。PAI-2M较好地保持了野生型PAI-2的空间构象，而PAI-2DCD螺旋间区的空间构象则发生了较大的变化。结论 PAI-2抑制TNF-α诱导的细胞凋亡依赖于其CD螺旋间区空间构象的完整性，而与PENF结构域(PENF73～76)无关。     

重组人生长激素对荷人胃癌裸鼠移植瘤血管内皮生长因子表达的影响

目的研究重组人生长激素（rhGH）对生长激素受体（GHR）不同表达状态裸鼠人胃癌移植瘤生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法采用免疫细胞化学染色法筛选出GHR阳性和阴性表达的细胞株各1株，分别接种于24只裸鼠皮下。将两种细胞接种裸鼠均随机分为对照组（0．9％NaCl，0．2ml／d）、低剂量rhGH组（0．5U·kg^-1·d^-1，0．2ml／d）和高剂量rhGH组（2．5U·kg^-1·d^-1，0．2mL／d）3组，每组8只，各组均连续给药14d，观察并记录裸鼠体重和肿瘤体积变化；采用酶联免疫吸附法测定各组裸鼠血清VEGF含量，免疫组织化学方法检测胃癌组织中VEGF蛋白表达，RT-PCR方法检测胃癌组织VEGFmRNA水平变化。结果筛选出GHR阳性表达的人胃癌细胞株SGC-7901和阴性表达的MKN-45。对于GHR^＋SGC-7901接种裸鼠，rhGH给药组皮下移植瘤体积较对照组增大（P〈0．05），且高剂量rhGH组促增长效应最为显著（P〈0．05），3组间体重差异无统计学意义（P〉0．05）；高剂量rhGH组的血清VEGF浓度为（252．94±15．32）ng／L，明显高于对照组的（49．94±5．73）ng／L和低剂量rhGH组的（167．60±9．54）ng／L（P〈0．05）；对照组VEGF表达为中度阳性，rhGH给药组呈强阳性；高剂量rhGH组肿瘤组织中VEGFmRNA相对表达量为0．6470±0．0447，明显高于对照组的0．3230±0．0258和低剂量rhGH组的0．4120±0．0351（P〈0．05）。对于GHR—MKN-45接种裸鼠，rhGH给药组体重明显大于对照组（P〈0．05）；肿瘤体积大小、血清VEGF水平、肿瘤组织VEGF蛋白及mRNA表达，3组间差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论rhGH能促进GHR阳性表达的SGC-7901移植瘤生长，并促进VEGF表达增高；对于GHR阴性的MKN-45移植瘤，则没有表现出明显的促肿瘤生长及促VEGF表达效应。GHR存在可能是rhGH影响VEGF分泌的关键靶点。     

人细胞色素p450IA1基因cDNA的克隆和鉴定

在用３－甲基胆蒽诱导培养人羊膜ＦＬ细胞２４ｈ后，抽提细胞总ＲＮＡ并直接合成ｃＤＮＡ第一链。利用人工合成的一对寡核苷酸引物，采用ＰＣＲ技术特异性地扩增Ｃｙｔ ｐ５０ＩＡ１ ｃＤＮＡ。３０个循环后琼脂糖凝胶电泳显示１．５Ｋｂ大小片段，长度与预计相符。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果证实此片段确为Ｃｙｔ ｐ４５０ＩＡ１ ｃＤＮＡ。将此片段克隆至质粒ｐＧＥＭ－３Ｚ并进行部份序列分析。结果显示克隆片段包含Ｃｙｔ ｐ