口腔念珠菌病患者唾液硝酸根分泌能力升高

Objective To observe the alterations of saliva nitrate and nitrite level in patients with oral candidiasis. Methods Parotid saliva and whole saliva were collected from 33 patients and 34 healthy volunteers. Concentrations of nitrate and nitrite in saliva were determined by high-performance liquid chromatography. Follow-up observation was performed on 10 patients after treatment. The data were statistically analyzed with independent-samples t test or paired-samples t test at α=0. 05. Results There was significant increase of the concentrations and secretion rate of parotid saliva nitrate in patient group as compared with controls: (49. 70±0. 50) vs (21.51±0. 60) mg/L (t=2. 692,P=0. 009) and (27.71±0. 50) vs (12. 55±0. 60)μg/min (t=2. 554, P=0. 013), respectively. Significantly increased concentrations and secretion rate of nitrate and nitrite [nitrate: (6. 46±0. 94) vs (1.11±0. 70) mg/L (t=3.792,P=0.000); nitrite: (8.48±0.58) vs (3.39±0.53) mg/L (t=2.888,P=0.005); nitrate secretion rate: (10. 57±0. 91) vs (2. 10±0. 74)μg/min (t=3.464, P=0. 001) ; nitrite secretion rate:(13.91±0.55) vs (6.42±0.58)μg,/min (t=2.397,P=0.020)]were revealed in whole saliva of patients group. Significantly decreased nitrate and nitrite levels were also observed in patients after treatment, especially the changes of parotid saliva nitrate secretion rate [(37. 50±0. 50) vs (14. 34±0. 64)μg/min (t=3. 142, P=0. 012)], whole saliva nitrate [(14.29±1.01) vs (2. 59±1.03) mg/L (t=3.475, P=0. 007)]and whole saliva nitrate secretion rate [(25.97±0. 93) vs (4. 12±1.00)μg/min (t=3. 922,P=0. 003)]. Conclusion The present study revealed the significant increase of salivary nitrate and nitrite level in patients with oral candidiasis is considered to be associated with the host defense reaction.     

分子佐剂TBhsp和MT在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体制备中的作用

目的探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用。方法构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp-PRL-3和pET28a-TBhsp-PRL-3-MT,并纯化其表达蛋白,分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测并比较各组的抗血清效价,选取效价最高的小鼠,采用杂交瘤技术制备PRL-3 mAb,并进行类和亚类鉴定。结果成功构建了上述4种PRL-3相关的重组表达质粒,并表达纯化出相应的融合蛋白,其中PRL-3-MT融合蛋白免疫组抗体效价高于其他组;用该组小鼠进行细胞融合并筛选获得均为IgG类的10株分泌PRL-3 mAb的细胞株。结论 MT在PRL-3 mAb制备中可以发挥较为明显的免疫佐剂作用。     

从p53肿瘤基因治疗临床试验展望我国肿瘤生物学研究的前景

近20年来,随着分子生物学的发展,疾病的分子诊断和基因治疗的实验研究及应用取得了快速的发展。美国、欧洲和日本不仅在疾病分子诊断研究领域取得重要进展,而且在临床应用方面也取得实效。针对恶性肿瘤的p53基因治疗已进入临床试验Ⅲ期。其中美国Introgen生物技术公司研制的重组     

连黛胶囊抗胃癌的药理特性与临床应用

目的观察连黛胶囊防治胃癌的药理活性与临床疗效方法采用MNNG诱发胃癌大鼠进行药理实验,基因蛋白表达用免疫组化法检测,细胞分子药理采用甲基绿-派诺宁染色、吖啶橙染色、原位末端标记、琼脂凝胶电泳、免疫组化、MTT、流式细胞仪分析、615近交系小鼠皮下成瘤等方法进行,药理基因差异条带检测采用mRNA差异显示法,临床观察随机单盲设计结果试药灌胃使大鼠胃癌发生率明显降低,使p21ras和c-erbB2表达阴性(对照组阳性).试药血清可抑制MGC-803细胞生长和诱导细胞凋亡.盐酸小檗碱(试药的主要有效成分)可使SGC-7901和MGC-803细胞软琼脂集落形成率降低,增殖抑制及移植成瘤率降低;能抑制MGC-803细胞生长,诱导细胞凋亡,使bcl-2弱阳性表达;能抑制BGC-823细胞生长,并出现基因差异显示条带.临床观察31例胃肠癌患者,服药1mo能改善证候,提高生存质量,提高NK细胞和CD3水平.结论连黛胶囊具有防治胃癌的功效,作用机制与抑制癌基因蛋白过表达和诱导癌细胞凋亡有关,有药理作用靶基因存在.     

结核分枝杆菌乙酰转移酶fadA3对宿主蛋白乙酰化修饰及其体内存活影响的研究

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)乙酰转移酶fadA3对宿主蛋白乙酰化修饰、基因表达和MTB在体内存活的影响。方法:从首都医科大学附属北京胸科医院/北京市结核病胸部肿瘤研究所分子生物学实验室选取MTB标准株(H37Rv),利用CRISPR-cas系统辅助的非同源性末端接合技术(CRISPR-NHEJ)构建H37Rv-fadA3基因敲除株(ΔfadA3),利用微孔板法分别检测H37Rv和ΔfadA3在7H9液体培养基中的吸光度值(A值)和细菌活性,绘制生长曲线图和最低抑菌浓度表。运用免疫印迹和转录组学测序分析H37Rv和ΔfadA3感染巨噬细胞(巨噬细胞系THP-1分化得到)后蛋白质乙酰化修饰变化及基因表达的差异情况;采用菌落计数和苏木精-伊红染色法分析H37Rv和ΔfadA3在C57BL/6J小鼠肺组织和巨噬细胞中的存活及病理变化。结果:fadA3经敲除1116 bp片段后成功获得ΔfadA3敲除株。H37Rv和ΔfadA3在培养第3、6、9和12天的A₆₀₀值(分别为0.245±0.005和0.232±0.01...     

CASP8AP2基因表达调控、功能与临床价值研究进展

我们系统总结了有关CASP8AP2基因的表达调控、生物学功能及其临床预后价值的研究报告。现有研究显示,CASP8AP2基因的表达受到同源盒蛋白和DNA甲基化的调控,miRNA-210能够使其表达沉默。CASP8AP2的生物学功能包括:参与FAS和TNFα介导的细胞凋亡、TNFα介导的NF-κB活化、糖皮质激素和盐皮质激素受体介导的基因转录调控、组成Cajal体和组蛋白位点体、复制依赖性组蛋白的转录和前体mRNA的3'端加工成熟、调控细胞周期S期进展,还能作为转录因子c-Myb、p73的辅助激活因子参与调控多种基因的转录。同时,CASP8AP2基因低表达与儿童ALL的复发相关;在儿童T-ALL和T淋巴母细胞淋巴瘤中,CASP8AP2基因的缺失较为常见,与患儿的较差预后相关。另外,在CASP8AP2基因序列中的3个单核苷酸多态性位点可能与弥漫性大B细胞淋巴瘤和白血病的发生有关。结论:CASP8AP2是一个多功能蛋白,具有调控细胞增殖、凋亡、基因表达等多种生物学功能,在儿童血液系统恶性肿瘤中,CASP8AP2基因还是一个有价值的预后标志物,部分单核苷酸多态性可能与白血病、淋巴瘤的发病相关。     

关于我国胃癌基础与临床研究模式的思考

在我国,胃癌与其他常见肿瘤一样发病率居高不下,现有的诊疗方法不宜早期发现,难以获得满意的疗效。以往的临床资料表明,早期胃癌术后的5年生存率明显高于中晚期,特别是日本早期胃癌诊断率远远高于我国,但是,针对我国现有的经济实力和医学知识与技术的普及程度,我们在短时间不可能采用同样的方式去实现这样的目标。为此,应结合我国所面临的胃癌防治的科学问题、社会需求和我们的实际能力,认真考虑我国胃癌基础和临床的研究策略及模式,为降低发病率、提高早期诊断水平及改善临床疗效,避免治疗不当和过度治疗提供理论指导。     

γ-干扰素释放试验中两种细胞计数方法的对比分析

目的比较Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪和显微镜人工镜检两种计数方法对外周血单个核细胞(PBMC)悬液的计数结果,探讨Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪用于γ-干扰素释放试验(T-SPOT.TB)中细胞定量的可行性。方法随机抽取T-SPOT.TB检测中的60份血液标本,对其外周血单个核细胞悬液,分别用人工显微镜和Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪计数PBMC,同时进行T-SPOT.TB检测,对结果进行比较分析。结果人工显微镜和Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪两种计数方法相关性好(r=0.967);细胞悬液用人工显微镜计数所得PBMC浓度为(6.03±2.18)×109/L,用Muse Cell Analyzer自动细胞分析仪计数所得PBMC浓度为(6.10±2.34)×109/L,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);按两种计数方法所得T-SPOT.TB检测结果一致性好。结论 Muse cell analyzer自动细胞分析仪计数可取代人工显微镜计数法用于T-SPOT.TB检测中对细胞悬液中PBMC的计数。     

噬菌体表面展示文库筛选人干细胞因子模拟肽

目的 用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽.方法 采用酶联免疫吸附测定法(EUSA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,根据序列测定结果合成阳性小肽,四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测合成小肽刺激UT-7细胞增殖的活性.结果 经3轮筛选获得11个来源于环七肽库和8个来源于十二肽库与rc-kit/Ig1-3结合活性较高的噬菌体克隆,DNA测序结果显示环七肽库筛选到1个共有序列DPSSPHTH,十二肽库没有筛选到共有序列.序列比对分析显示,这些小肽与hSCF没有同源序列.MTT法测定结果表明,合成的4个小肽均能促进UT-7细胞增殖,其中CE16和LE20刺激效果明显.结论 获得4个具有较高hSCF生物学活性的模拟肽.     

CRISPR-Cas9系统在真核细胞领域内的研究进展

CRISPR-Cas免疫系统在天然状态下保护细菌和古生菌免受外来质粒或噬菌体的入侵.研究者们根据Ⅱ型CRISPR-Cas系统开发了全新的基因编辑工具——CRISPR-Cas9,它利用与靶序列互补的向导RNA引导Cas9酶定点切割DNA,该技术具有设计简单、操作方便、特异性强、效率高等优势,成为新一代基因组编辑技术.本文综述了CRISPR-Cas系统的技术发展史、最新分类和作用原理,重点介绍了近几年来CRISPR-Cas9系统应用于真核细胞领域的研究进展.