应用IC-RT-PCR法检测怀地黄中烟草花叶病毒(TMV)

目的: 建立一套快速、灵敏、高效的怀地黄TMV检测技术,为怀地黄TMV的脱毒检测提供技术支持,以实现怀地黄脱毒苗的产业化生产,改善病毒病引起的品种退化现象。 方法: 根据GenBank上登录的TMV外壳蛋白基因保守序列,设计特异性引物,利用免疫捕捉RT-PCR(IC-RT-PCR)技术检测怀地黄中的TMV,并对PCR扩增产物进行测序。 结果: 利用IC-RT-PCR技术扩增出了预期目的条带,其扩增产物与地黄TMV CP基因(登录号为AY555269)核苷酸序列的同源性达95.29%,氨基酸同源性达96.7%。 结论: 建立了怀地黄TMV的IC-RT-PCR检测技术,集免疫学与分子生物学检测技术于一体,灵敏度高,操作简便,适合于怀地黄TMV的快速检测。     

小蓟中黄酮类化学成分的研究

综合运用硅胶、MCI、Sephadex LH-20等柱色谱及高效液相色谱技术对小蓟的乙酸乙酯部位进行分离纯化,从中分离得到黄酮类化合物15个,分别鉴定为:4',5,6-三羟基-7-甲氧基黄酮(1),4',5-二羟基-7,8-二甲氧基黄酮(2),sorbifolin-6-O-β-glucopyranoside(3),山柰酚-7-O-α-L-鼠李糖苷(4),山柰酚(5),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷(6),myricetin(7),myricetin-3-O-β-D-glucoside(8),5,7-二羟基-3',4'-二甲氧基黄酮(9),3',4',5-三羟基-3,7-二甲氧基黄酮(10),3',3,4',5-四羟基-7-甲氧基黄酮(11),3'-羟基-4',5,7-三甲氧基黄酮(12),7-羟基-3',4',5-三甲氧基黄酮(13),4',5-二羟基-2',3',7,8-四甲氧基黄酮(14),5-羟基-2',3',7,8-四甲氧基黄酮(15)。以上所有化合物均为首次从本植物中分离得到。该实验运用PTP1B抑制剂高通量筛选模型对化合物(1~15)进行活性筛选,结果表明化合物2,12和14具有较强的PTP1B抑制活性,IC50分别为2.54,1.85,2.11μmol·L~(-1)。     

板蓝根多糖对环磷酰胺造模大鼠的双向免疫调节作用

目的 研究板蓝根多糖（IRPS）对机体不同免疫状态的调节作用。方法 36只颈静脉插管大鼠,随机分为6组：免疫正常（NS）组、免疫亢进（IH）组、免疫抑制（IS）组、IRPS组、IH+IRPS组、IS+IRPS组,每组6只;各组大鼠均ip鸡卵清蛋白进行免疫,应用环磷酰胺（Cy）注射制备大鼠IH和IS模型,ig 60 mg/kg IRPS,每天给药1次,连续给药3 d;免疫后第6和12天,每组大鼠处死3只,测定T、B淋巴细胞增殖情况和NK细胞活性,试剂盒法检测各组血清OVA抗体水平;免疫后第1～10、12天,颈静脉采血,分离血清,液相芯片技术检测γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。结果 IRPS对于不同免疫状态大鼠的B淋巴细胞增殖、NK细胞活性均具有双向调节作用;对Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-10具有双向调节作用;对免疫功能正常大鼠具有免疫增强作用。结论 IRPS能够抑制IH组大鼠的亢进趋势,提升IS组大鼠的免疫功能,对Cy造模大鼠具有双向免疫调节作用。     

光甘草定通过调节ERK/IRS-1和PI3K/Akt信号通路改善HepG2细胞的胰岛素抵抗

目的 探索光甘草定改善肝细胞胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）的作用和机制。方法 通过高胰岛素诱导人肝癌HepG2细胞建立IR模型,采用葡萄糖氧化酶法检测细胞的葡萄糖消耗量及生成;荧光标记法检测葡萄糖摄取量;蒽酮法检测糖原含量;ELISA检测葡萄糖代谢关键酶的活性;Western blotting检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt）、细胞外调节蛋白激酶/胰岛素受体底物-1（extracellular regulated protein kinase/insulinreceptor substrate-1,ERK/IRS-1）信号通路相关蛋白以及葡萄糖转运蛋白4（glucose transporter 4,GLUT4）的表达。采用分子对接技术研究光甘草定和ERK分子间的相互作用。结果 光甘草定显著增加IR-HepG2细胞的葡萄糖消耗和摄取（P＜0.05）;通过显著提高糖原合成酶（glycogen synthase,GS）、葡萄糖激酶（glucokinase,GCK）和丙酮酸激酶（pyruvate kinase,PK）活性（P＜0.05、0.01）,促进IR-HepG2细胞的糖原合成和糖酵解;通过显著减弱磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK）和葡萄糖-6-磷酸酶（glucose-6-phosphatase,G6Pase）的活性（P＜0.05）,抑制IR-HepG2细胞的糖异生。IR-HepG2细胞经光甘草定处理后,Akt、糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β）和叉头框蛋白O1（forkhead boxing protein O1,FOXO1）的磷酸化水平得到显著恢复（P＜0.01）,而这种作用被PI3K的抑制剂LY294002所逆转（P＜0.01）。同时,光甘草定显著促进GLUT4向质膜的易位（P＜0.01）。光甘草定显著降低IRHepG2细胞的ERK和IRS的磷酸化水平（P＜0.01）,还可作为ERK的I1/2型抑制剂。结论 光甘草定通过抑制ERK/IRS-1通路,激活PI3K/Akt信号通路,修复IR-HepG2细胞的糖代谢紊乱,缓解IR症状。     

小动物核医学显像心脏功能分析方法研究进展

本文主要介绍采用核医学显像评价大鼠、小鼠等小动物心脏功能的不同分析方法,比较各自的优缺点,并对其发展方向进行展望。     

体素形态学方法与人工神经网络结合在Alzheimer病诊断中的应用研究

目的 将体素形态学方法与人工神经网络方法相结合,用于阿尔茨海默氏病的诊断,探索自动、客观的Alzheimer临床诊断新途径.方法 研究对象包括10名可能的Alzheimer病人和12例年龄与性别与之相匹配的正常老年人,在Siemens Sonata 1.5T超导MR成像系统上获得精细的三维结构图像,首先利用体素形态学方法得到了Alzheimer患者灰质发生缺失的10个区域,然后统计每个区域的灰度值,在此基础上,利用反向传播神经网络对数据进行分析处理.结果 海马、海马旁回、内嗅皮层、杏仁体、尾状核头部、颞中回、扣带回、顶下小叶、岛叶和前额背外侧区域,在训练样本数为18的情况下,利用神经网络能够达到100%的判别效果.结论 将人工神经网络方法和体素形态学(VBM)方法相结合诊断Alzhei-mer患者,具有良好的临床应用前景,可能成为一种实用和可靠的临床诊断工具.     

CFT-PET脑功能成像标准模板的制作与验证

目的 制作CFT-PET脑功能成像标准模板,以便使用统计参数图(SPM)进行统计分析.方法 对11例晚期帕金森病(PD)患者、10名正常人进行CFT-PET显像.用10名正常人的显像数据制作标准模板,并用PD组的数据验证标准模板的可用性.结果 SPM分析结果显示,相对于正常对照组,PD组纹状体两侧仅出现多巴胺转运蛋白(DAT)降低区域,且PD组纹状体受损重的一侧DAT降低区域大于对侧,分析结果证明了模板的可用性.结论 采用本文方法制作的脑功能成像标准模板能够成功分析CFT-PET的成像数据,SPM为一种准确客观的统计分析方法.     

耐碳青霉烯革兰阴性杆菌耐药性及耐药基因blaKPC的分子特征

目的 探讨耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌的临床耐药性及耐药基因blaKPC的分子特征。方法 分析2017年1月-2018年12月某院临床检出的耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌。通过WHONET 5.6软件对药物敏感试验数据进行统计分析,采用PCR检测碳青霉烯耐药基因blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48,对PCR阳性产物进行DNA测序,分析耐药基因的分子结构特点。结果 共收集510株耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌,其中耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）420株,耐碳青霉烯非肠杆菌科细菌90株。菌株主要来自重症监护病房（ICU）、神经外科和呼吸科,分别占60.8%、11.8%、5.3%;标本来自痰、脓性分泌物、静脉血、无菌中段尿,分别占66.9%、8.8%、8.2%、6.5%。耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌对常用抗菌药物具有较高的耐药性。PCR结果显示,420株CRE中blaKPC、blaNDM、blaIMP的阳性率分别为54.3%（228/420）、1.2%（5/420）、1.4%（6/420）,未检测出blaVIM和blaOXA-48基因,其中肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、大肠埃希菌分别占携带blaKPC CRE的83.8%、11.8%、2.6%;其他少见菌种中也检出blaKPC基因。非肠杆菌科细菌中仅有2株鲍曼不动杆菌检测出blaKPC。DNA测序结果显示,174株携带blaKPC的菌株中173株检测为blaKPC-2、1株检测为blaKPC-1。结论 该地区耐碳青霉烯类革兰阴性菌以CRE为主,其中以携带blaKPC-2的肺炎克雷伯菌占绝对优势,其他菌株中也均有发现。提示临床需重点加强耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的监测及预防,防控blaKPC的传播流行。