雌激素处理DCs在诱导小鼠同种皮肤移植免疫耐受中的作用

目的：研究雌二醇（17β-estradiol, E₂）处理的供体骨髓来源树突细胞（dendritic cells, DCs）在诱导小鼠同种异基因皮肤移植免疫耐受中的作用。方法：体外培养小鼠骨髓来源DCs，然后用E₂处理。受体小鼠在皮肤移植前经尾静脉分别输注经E₂处理的供体小鼠DCs、供体小鼠成熟DCs以及不成熟DCs，输注PBS为对照组。1周后对受体小鼠进行同种异基因皮肤移植，手术后观察皮肤存活情况，应用流式细胞术检测手术前后受体小鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞百分率的变化。结果：在同种异基因皮肤移植中，受体小鼠尾静脉输注经E2处理的DCs组与对照组和不成熟DCs组比较，移植皮肤存活时间显著延长，较不成熟DCs组存活时间平均延长10.6 d（P<0.01）；与对照组和不成熟DCs组比较，E₂处理组外周血中CD4+CD25+ 调节性T细胞百分率明显升高（P<0.01）。结论：在同种异基因小鼠皮肤移植模型中，E₂处理的供体小鼠DCs可以延长移植皮肤存活时间。     

骨髓源间充质干细胞在异基因小鼠免疫器官内的分布及其免疫功能调节作用

目的：探讨骨髓源间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC)在异基因小鼠免疫器官内的分布及其免疫调节作用。方法：以CM-Dil荧光染料示踪BMSC的体内分布情况，并辅以PCR检测Y染色体的方法进一步鉴定；体外实验采用MTT法、ELISA和FACS等方法检测BMSC的免疫调节作用。结果：BMSC可进入并较长期(30天)存在于异基因小鼠免疫器官内；在体外，BALB／C小鼠的BMSC对由ConA诱导的BALB／C和C57BL／6(B6)和BXSB小鼠的T细胞增殖均有抑制作用；而对前两种小鼠由12S诱导的B细胞增殖和分泌k方面表现为促进作用，对BXSB小鼠由IPS诱导的B细胞增殖和k分泌有抑制作用。BALB／C小鼠的BMSC对BALB／C和B6小鼠由ConA诱导的IL-4生成细胞的数量无明显影响，却可降低由ConA诱导的两种品系小鼠的IFN-γ生成细胞的数量；但对于BXSB小鼠却不同，BALB／C的BMSC可降低由ConA诱导的BXSB小鼠的IL-4生成细胞的数量，而提高由ConA诱导的IFN-γ生成细胞的数量。结论：异基因BMSC不但可进入受体的免疫器官，且可较长期(30天)存在；另外，BMSC对同基因正常、异基因正常和异基因自身免疫病的个体均有一定程度的免疫调节作用。     

血清HCV RNA检测在预防输血后丙型肝炎中的意义

目的 探讨血清HCV RNA检测在预防输血后丙型肝炎中的意义。方法 用ELISA法检测2000年1月至2003年12月末抗．HCV阴性的全血标本56400份次，再进行RT-PCR（荧光适时技术）检测HCV RNA，并对输过HCV RNA筛查阴性血液的患者进行追查。结果 HCVRNA阳性率为2．5‰（146／56400）。对输过HCVRNA筛查阴性血液的患者追查结果，无一例发生输血后丙型肝炎。结论 对抗-HCV阴性的血液标本用敏感的试剂进行HCV RNA检测在预防输血后丙型肝炎中不但有效，而且可行。     

WT1基因增强子构建位点对WT1基因启动子转录活性的影响

目的：以WT1基因启动子和增强子的功能片段为研究对象，探讨增强子构建在质粒的不同位点对基因启动子转录活性的影响。方法: 利用基因重组技术将WT1基因增强子的功能片段分别插入在已含有WT1基因启动子的质粒，pEWP的不同位点（MCS中的BamH I、EGFP 终止密码后的Not I和SV40polyA位点后的AflⅡ）中，将重组质粒转染慢粒白血病红白急变细胞株K562细胞、乳腺癌细胞株MCF-7细胞和人类胚胎肾转化细胞株293细胞，通过检测转基因细胞中EGFP的平均荧光强度来评估增强子对启动子的转录促进作用。结果: 通过基因重组技术分别构建了含有WT1基因启动子的载体，即pEWP，和含有WT1基因启动子和增强子的载体，即pEWPE、pEWPD和pEWPA。流式细胞仪检测EGFP的平均荧光强度，发现pEWPA在293细胞和K562细胞中能够增强WT1启动子的转录活性，而pEWPE和pEWPD则无增强作用。3者均不能在MCF7细胞中增强WT1启动子的转录活性。结论: SV40polyA位点后插入增强子能够有效地增强启动子的转录活性，且具有细胞特异性。     

丙型肝炎病毒p7膜蛋白的原子力显微镜研究

目的：以丙型肝炎病毒p7蛋白为模型，探讨原子力显微镜在膜蛋白方面的研究。方法：在云母表面准备p7蛋白样品以及将p7合并到磷脂双分子层中，进行扣击模式原子力显微镜的观察。结果：可清晰观察p7蛋白分子离子隧道结构。p7合并到磷脂双分子层中后，始终存在于DOPC液相中，并出现多个蛋白逐渐结合的现象。结论：原子力显微镜能够用于膜蛋白的基本结构特征的观察，同时可了解磷脂双分子层对膜蛋白所产生的影响，为后期细胞表面膜蛋白的原子力显微镜研究打下基础。     

流感病毒血凝素基因工程抗体的抗病毒实验效果观察

目的：对昆虫细胞系统表达纯化的中和性流感病毒血凝素基因工程全抗体IgG-IV-2,IgG-IV-6进行体外和体内抗病毒效果的研究。方法：对比抗体应用前后病毒在MDCK细胞中的病毒滴度和动物模型中粘膜用药前后鼠肺内病毒滴度的改变，验证抗体的粘膜抗感染效果。结果：两株基因工程抗体使4．5log10TCID50滴度的病毒下降1／2的剂量分别为0．8μg和0．5μg；动物模型的粘膜给药表明使4．0log10TCID50的病毒下降1／2所需的抗体剂量IgG-IV-2为0．25mg/kg体重，IgG-IV-6为0．1mg/kg体重，联合应用时为0．08mg/kg体重。结论：获得的基因工程抗体具有体内体外的抗病毒效果，能够中和病毒毒力。     

胃癌中p16INK4a基因启动子高甲基化及其蛋白表达

目的探讨胃癌中p16^INK4a基因失活的主要分子机制及其与胃癌发生、发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR技术检测62例胃癌和癌旁组织及10例慢性胃炎黏膜p16^INK4a基因启动子区CpG岛甲基化状态，用免疫组化EnVision两步法检测p16^INK4a蛋白的表达。结果62例胃癌和癌旁组织p16^INK4a基因启动子高甲基化率分别为51．6％（32／62）和19.4％（12／62），10例正常对照胃黏膜未发现高甲基化，胃癌组织p16^INK4a基因启动子高甲基化率高于癌旁组织和正常对照（P〈0．05）。58.1％（36／62）的胃癌组织p16^INK4a蛋白表达阴性，其中72.2％（26／36）的病例具有p16^INK4a基因启动子的高甲基化，p16^INK4a基因启动子的高甲基化与其蛋白失表达密切相关（P〈0.05）。结论胃癌中p16^INK4a基因启动子的高甲基化是p16^INK4a基因失活的主要机制，并可能是胃癌发生中的早期分子事件。     

糖尿病大鼠心肌NF-κB、iNOS、COX-2表达的研究

目的：观察核因子-κＢ（ＮＦ-κＢ）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）以及环氧化酶-2（COX-2）3种炎症因子在糖尿病大鼠心肌组织的表达。方法:30只SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病组，糖尿病组大鼠按60 mg/kg的剂量1次性腹腔注射链脲菌素。实验于24周末结束，观察2组大鼠的体重、平均血糖浓度、心重指数。并取心肌组织石蜡切片分别行NF-κＢ、iNOS和COX-2免疫组化染色。同时用凝胶电泳迁移率（EMSA）的方法测定心肌组织ＮＦ-κＢ活性。结果:(1)糖尿病大鼠心肌组织ＮＦ-κＢ阳性表达细胞明显多于对照组；（2）EMSA方法显示，糖尿病大鼠心肌组织ＮＦ-κＢ表达强度明显高于对照组；（3）对照组大鼠心肌组织未见iNOS的表达，糖尿病大鼠见明显iNOS的表达；（4）对照组大鼠心肌组织偶见COX-2的表达，糖尿病大鼠见明显COX-2的表达。结论:NF-κＢ、iNOS和COX-2在糖尿病大鼠心肌组织中表达活性明显增强。     

透析法去除红细胞渗透性低温保护剂的实验研究

要实现人类红细胞深低温保存,必须在冷冻前添加、复温后去除低温保护剂.本研究提出了低温保护剂的新型的透析去除法,与常规的离心洗涤法比较而言,该方法能够快速、有效、安全地去除红细胞内的低温保护剂(甘油).使用该方法冰冻.复温.洗涤后的红细胞计数回收率为(89.17±2.46)%,血红蛋白回收率为(84.93±4.64)%,上清游离血红蛋白的含量为(0.66 ±0.13)g/L,所得冰冻-复温-洗涤后的红细胞悬液的渗透压(残余甘油的含量)为(340.33±20.56)mOsm,均达到了国家对冰冻洗涤红细胞的质量标准要求.     

微孔高分子PLGA涂层疏水性及血小板粘附行为的研究

利用水蒸气辅助自组装方法在心血管支架用316L不锈钢表面上制备出了规则排列的微孔丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)薄膜.实验研究表明,大气湿度和聚合物溶液浓度对孔径大小和分布有较大影响.接触角检测结果表明,微孔结构改变了PLGA涂层的亲疏水性质,呈现出疏水特性,而致密涂层及不锈钢基体表面则为亲水性.血小板粘附实验显示血小板在孔径小于3～5μm微孔涂层的表面几乎不粘附;在孔径大于5μm微孔涂层表面有微量粘附;而在致密涂层和不锈钢表面则发生粘附、聚集,甚至产生伪足.这一研究结果证明:通过水蒸气辅助自组装法制备的PLGA微孔涂层具有较强的抗血小板粘附的能力,有助于提高金属血管支架表面的血液相容性.