脂质体介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞：筛选理想浓度

背景：siRNA转染是完成RNA干扰的关键一步。目前用于心肌细胞的RNA干扰技术多以质粒为载体转染长链shRNA,其步骤复杂。脂质体转染化学合成短链siRNA是一种操作简便,低毒高效的转染方法,将其应用于心肌细胞转染,有利于RNA干扰技术的推广应用。 目的：筛选脂质体介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞的最佳浓度,以及简单高效的RNA干扰操作方法。 方法：应用脂质体siPORTTM NeoFXTM转染试剂介导5,10,20,30 nmol/L的CY3-Negative siRNA转染心肌细胞,同时设立空白对照组,转染24 h后分别应用荧光显微镜,流式细胞仪检测转染效率和细胞凋亡率,筛选最优浓度。根据优化浓度转染PHB siRNA,48 h后检测蛋白表达验证转染效果。 结果与结论：随CY3-Negative siRNA浓度的增加,在荧光显微镜下观察到激发出红色荧光的细胞比例随之增加,流式细胞仪检测出各组平均转染效率也依次增高(P < 0.05),其中30 nmol/L组转染效率最高(P < 0.05),而各实验组与空白对照组之间的细胞凋亡率差异无显著性意义(P > 0.05)。将心肌细胞转染30 nmol/L 的PHB siRNA,48 h后PHB蛋白表达平均下降74.11%(P < 0.05)。实验结果表明,脂质体转染试剂siPORTTM NeoFXTM介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞的理想浓度是30 nmol/L。     

丹参多糖保护H2O2致心肌细胞损伤作用机制

目的 研究prohibitin在H2O2致心肌细胞氧化应激损伤中的表达及中药丹参多糖对其调节作用.方法 以H2O2干预体外培养乳鼠心肌细胞建立氧化应激心肌损伤模型;MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法检测prohibitin蛋白表达情况.结果 与模型组相比,丹参多糖组的细胞活力明显上升,凋亡率显著降低,其中高剂量组尤为明显(P＜0.01);prohibitin在正常心肌细胞内表达较低,而在模型组表达代偿性增高,丹参多糖用药组其表达有所增加,高剂量组增加更明显,与模型组相比有显著性差异(P＜0.05).结论 丹参多糖可通过上调prohibitin蛋白表达发挥其保护H2O2致心肌细胞损伤的作用.     

冠心病心绞痛三种血瘀证的血浆代谢组学研究

目的 研究冠心病心绞痛血瘀证(气滞血瘀证、心血瘀阻证、气虚血瘀证)患者的血浆代谢组学变化.方法 对18例健康人、18例冠心病心绞痛血瘀证患者(6例气滞血瘀证、6例心血瘀阻证、6例气虚血瘀证)的血浆样本进行氢核磁共振(1H NMR)检测.通过偏最小二乘判别分析(PLS-DA)方法研究各组之间的血浆代谢产物谱差异.结果 各组血浆1H NMR谱的PLS-DA结果显示,与健康人相比,心绞痛血瘀证患者血浆柠檬酸、琥珀酸、葡萄糖、乙酰糖蛋白、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、3-羟基丁酸、谷氨酸、脯氨酸、亮氨酸含量较高,高密度脂蛋白、不饱和脂肪酸、苏氨酸、组氨酸含量较低.气虚血瘀证组与其他两个血瘀证组差别较大,而气滞血瘀证与心血瘀阻证差别不明显.与其他血瘀证相比,气虚血瘀证组血浆柠檬酸、3-羟基丁酸、丙酮、氧化三甲胺含量较高,葡萄糖、N-乙酰糖蛋白、酪氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、亮氨酸含量较低.结论 血浆1H NMR代谢谱差异能明显区分健康人与心绞痛血瘀证患者:不能区分心绞痛气滞血瘀证与心血瘀阻证:能在一定程度上区分气虚血瘀证与其他血瘀证.代谢组学方法对于研究冠心病心绞痛中医证候具有重要价值.     

定心方 氧化苦参碱治疗大鼠缺血再灌注心律失常及对ICAM-1表达的影响

目的:研究定心方(DXR)及氧化苦参碱(OMT)对大鼠缺血再灌注心律失常的保护作用及对细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响。方法:用冠脉结扎及再松开的方法制备缺血再灌注心律失常动物模型;记录Ⅱ导联心电图,对心律失常进行评分;双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清中ICAM-1的表达。结果:定心方及氧化苦参碱干预后,缺血再灌注心律失常明显减轻(P<0.01),血清中ICAM-1表达明显降低(P<0.01)。结论:定心方及氧化苦参碱降低再灌注大鼠血清ICAM-1的表达,可能是其抗心律失常的机制之一。     

蛋白质组学在心血管疾病中的研究进展

蛋白质组学是继基因组学后提出的新学科，它以组织或细胞的全部蛋白质为研究对象，以蛋白质表达的整体水平为研究特点，为生命科学的研究提供了新的视角。心血管疾病的研究是蛋白质组学研究的重要领域，并且取得了不少阶段性成果，即运用2-DE、质谱等手段来观察扩张型心肌病、心肌缺血及再灌注损伤、动脉粥样硬化、心力衰竭、应激等病理状态下心肌细胞蛋白质表达和翻译后修饰的改变，从而从分子机制上进一步阐明这些疾病的本质。本文参阅近十年内外文献资料，对蛋白质组学在心血管疾病中的研究进展作一简要概述。     

清肺方治疗咳嗽的临床研究

目的观察清肺方治疗咳嗽的临床效果。方法选取咳嗽2周以上的病人,清肺汤加减治疗咳嗽。结果发现清肺方治疗咳嗽的显效率98.11%,有效率100%。结论以疏风开肺为治法的清肺方是治疗咳嗽的有效方剂。     

定心方和丹参酮ⅡA对心律失常大鼠血小板膜粘附分子表达的影响

目的:研究定心方(DXR)和丹参酮Ⅱ_A(Tan)对心律失常大鼠血小板膜粘附分子表达的影响。方法:冠状动脉结扎再通制作心律失常模型,流式细胞仪测定血小板膜粘附分子表达。结果:DXR和Tan能明显降低CD41和CD62P的表达(P<0.01),减少心律失常发生(P<0.05);L—N—硝基精氨酸甲酯(L—NAME)能抑制丹参酮的减少血小板膜粘附分子表达以防治心律失常的作用(P<0.05),但不能抑制DXR的该种作用。结论:DXR和Tan通过减少血小板膜粘附分子的表达防治心律失常。     

逻辑归纳记忆法在中医辨证课堂教学中的应用

中医诊断学应用把每一证型中的症状、体征,按其病机和临床特点进行归类,并用既能联系病因病机又能概括临床证候特点,相互构成逻辑联系的几个字加以归纳,作为理解、记忆该证的要点,同时又注重各证型间的比较鉴别,这就是逻辑归纳记忆法。应用该法进行教学,取得了较好的效果。     

定心方对大鼠缺氧及正常心肌细胞内钙、膜电位和线粒体膜电位的影响

目的：探讨定心方（DXR）抗心律失常的分子机理。方法：采用胰蛋白酶法分离培养心肌细胞，用不同荧光染料分别标记细胞，在激光共聚焦显微镜上测定DXR血清对心肌细胞内钙[Ca^2+]i、膜电位（MP）和线粒体膜电位（MMP）的变化。结果：缺氧使心肌细胞[Ca^2+]i和MMP升高，而使MP降低，DXR血清降低了正常和缺氧心肌细胞[Ca^2+]i,改善了缺氧引起的MP降低，使缺氧状态下MMP保持在基线水平。结论：DXR能通过抑制缺氧引起的[Ca^2+]i和MMP升高，及拮抗缺氧所致的MP降低，从而发挥保护心肌细胞，防治心律失常的作用。