HLA—DM基因遗传多态性对系统性红斑狼疮易感性的影响

目的：探索HLA－DM等位基因频率与基因型分布对系统性红斑狼疮（SLE）易感性的影响。方法：用多聚酶链反应－限制性片断长度多态性（PCR－RFLP）确定DM的基因型，用病例对照研究的方法探索DM与SLE的关联性。结果：检测到的7种DMA与DMB等位基因和42例种单体型在SLE线与正常对照组分布一致。DMB*0102／0103基因型在对照组的分布频率明显高于SLE组（P＜0．05），但校正后差异无显性，其余13种基因在两组差异均无显意义。结论：HLA－DM基因的遗传多态性对SLE的发病没有直接影响。     

羟氯喹抑制紫外线诱导的系统性红斑狼疮CD4+T细胞白细胞介素-10和干扰素-γ的表达

目的 研究紫外线对系统性红斑狼疮(SLE)CD4+T细胞因子的影响和羟氯喹的抑制作用.方法 选择SLE 30例,健康对照10名.磁珠分选SLE患者和健康人的CD4+T细胞,紫外线311 nm窄谱中波紫外线暴露,加入羟氯喹共培养,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清白细胞介素(IL)-10和干扰素-γ的表达水平.采用t检验进行统计学分析.结果 SLE患者CD4+T细胞IL-10表达高于健康对照[(27±4)和(18±3) pg/ml,P=0.011];经45、100 mJ/cm2紫外线暴露后,SLE活动患者CD4+T细胞IL-10表达升高[(27±4)和(77±42) pg/ml,(40±18)和(77±42) pg/ml,P=0.022,P=0.048],经100 mJ/cm2紫外线暴露后,活动患者CD4+T细胞IL-10表达高于稳定患者[(77±42)和(24±4)pg/ml,P=0.029];羟氯喹降低SLE活动患者CD4+T细胞IL-10和干扰素-γ表达[(2.6±4.0)和(17.9±2.3)pg/ml,P=0.018,P=-0.017)];羟氯喹降低经45,100 mJ/cm2紫外线暴露后SLE活动患者T细胞IL-10表达[(40±18)和(22±6)pg/ml,(77±42)和(21±5) pg/ml,P=0.037,P=0.04];羟氯喹降低经100 mJ/cm2紫外线暴露的SLE活动和稳定患者T细胞干扰素-γ表达[(18±3)和(13±14) pg/ml,(19±7)和(12±5) pg/ml,P=0.013,P=0.049].结论 紫外线加重SLE患者体内Th1/Th2细胞因子的比例失衡;羟氯喹抑制了紫外线诱发SLE患者干扰素-γ和IL-10的表达.

Abstract：

Objective To explore the role of hydroxychloroquine (HCQ) in ultraviolet B (UVB)- induced expression of interleukin (IL)-10 and interferon (IFN)-γ from CD4+T cells in patients with systemic lupus erythematosus (SLE). Methods Thirty patients with SLE and 10 healthy controls were enrolled in the study. CD4+ T cells were isolated using magnetic beads from SLE patients and healthy controls. HCQ was added in culture media before and after irradiation with UVB 311 nm narrow band ultraviolet B (NB-UVB). The levels of IL-10 and IFN-γ in the supernatant were detected with enzyme-linked immunosorbent (ELISA). Comparisons between groups were performed by t-test. Results The level of IL-10 was higher in SLE patients [(27±4) pg/ml] than that in healthy controls [(18±3) pg/ml, P=0.011]. After exposure of CD4+T cells to UVB in 45 or 100 mJ/cm2 dosages, the level of IL-10 was increased significantly in patients with active disease (P=0.022, P=0.048). After exposure of CD4+T cells to UVB in 100 mJ/cm2 dosages, the levels of IL-10 was higher in patients with active disease [(77±42) pg/ml] than patients with stable disease [(24± 4) pg/ml, P=0.029]. When CD4+ T cell were cultured with HCQ, IL-10 and IFN-γ levels in patients with active disease [(2.6±4.0), (17.5±2.3) pg/ml] were decreased significantly (P=0.018, P=0.017). HCQ reversed UVB-induced IL-10 expression in active SLE patients after exposure of CD4+T cells to UVB in 45 or 100 mJ/cm2 dosages (P=0.037, P=0.04). HCQ also reversed UVB-induced IFN-7 expression in active SLE patients and stable SLE patients after exposure to CD4+T cells with UVB in 100 mJ/cm2 dosages (P=0.013, P= 0.049). Conclusion UVB can aggravate the imbalance of Th1 and Th2 cytokines. HCQ inhibits UVB-induced IL-10 and IFN-7 expression of CD4+T cells in patients with SLE, especially in patients with active disease.     

紫外线暴露对系统性红斑狼疮患者DNA甲基化水平的影响

目的 研究紫外线照射对系统性红斑狼疮(SEE)患者DNA甲基化水平的影响,探讨其在SLE发病中的作用. 方法 提取45例SLE患者及20名健康对照的外周血单个核细胞(PBMC)进行培养,用不同剂量的311 nm窄谱中波紫外线(NB-UVB)照射培养的PBMC,高效毛细管电泳法(HPCE)检测基因组DNA甲基化水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法测定甲基化转移酶1(DNMT1) mRNA的表达.结果 SLE患者DNA甲基化水平低于健康对照,差异有统汁学意义(P=0.014);SLE患者经50,100mJ/cm2紫外线照射后DNA甲基化水平降低,差异有统计学意义(P＜0.01);SLE患者DNMT1 mRNA的表达与健康对照相比差异无统计学意义;紫外线照射后SLE患者DNMT1 mRNA的表达差异无统计学意义;SLE患者DNA甲基化水平与SLE疾病活动指数(SLEDAI)无相天性. 结论 紫外线暴露可改变SLE患者基因组DNA甲基化水平;紫外线可能通过改变DNA甲基化影响SLE.     

CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞在类风湿关节炎患者外周血中的表达及意义

目的 检测调节性T淋巴细胞新旧标志在活动性类风湿关节炎(RA)患者外周血中的表达,探讨用CD127代替FOXP3对调节性T淋巴细胞进行研究的可能性.方法 选取活动性RA患者32例,其中未经缓解病情抗风湿药(DMARDs)治疗者20例,经DMARDs治疗效果不佳者12例,以25例原发性干燥综合征(pSS)患者和24名健康人作为对照,采用流式细胞术检测外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+CD127low/-及CD4*CD25+FOXP3+T淋巴细胞的比例,同时检测外周血C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、免疫球蛋白、补体等水平并进行相关性分析.结果 RA患者CD4+CD25highT淋巴细胞百分率与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).其CD4+CD25+FOXP3+T淋巴细胞与CD+CD25+CD127low/-T淋巴细胞的百分率均低于健康对照组(P<0.05),但CD4+D25+FOXP3+、CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞在RA患者与pSS患者中的表达差异无统计学意义(P>0.05);这三群细胞的表达水平在RA未经治疗组和治疗效果不佳组之间差异均无统计学意义(P>0.05). RA患者CD4+CD25+FOXP3+T淋巴细胞与CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞之间呈明显正相关(r=0.698,P=0.001),但这两群细胞与患者的CRP、ESR等水平及抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、类风湿因子(RF)均无相关性(P>0.05).结论 活动性RA患者外周血中,CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞的百分率降低,并且与CD4+CD25+FOXP3+T淋巴细胞呈显著正相关性,提示CD127可能被作为Treg细胞中FOXP3的替代标记.     

免疫性疫苗治疗系统性红斑狼疮

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythmatosus,SLE）是一种常见的自身免疫性疾病,其主要治疗药物一免疫抑制剂作用有限且毒副作用大。近年来新型免疫性疫苗不断问世,主要类型有DNA疫苗、细胞疫苗、肽疫苗等,其中部分用于SLE治疗研究,取得了较好的疗效。本文就免疫性疫苗用于红斑狼疮治疗的研究进展做一综述。     

SLE患者血清、尿液和肾脏骨桥蛋白的检测及临床意义

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)在SLE患者血清、尿液中的含量及与SLE脏器损害、活动性指标的关系.方法 收集100例SLE患者临床资料,ELISA方法检测OPN在100例SLE患者和30例正常人对照外周血清中的浓度,同时用ELISA检测OPN在57例SLE患者和15例正常人对照尿液中的浓度.免疫组化检测3例SLE患者肾脏组织中OPN蛋白的表达.结果 OPN在SLE患者血清和尿液中浓度显著升高,分别为(64.03±72.87)μg/L和(454.87±231.63)μg/L,与正常对照组[(29.88±11.28)μg/L,(122.67±39.47)μg/L]相比,差异有统计学意义(P<0.05), SLE活动组血清和尿液中OPN浓度显著升高,分别为(80.92±87.49)μg/L和(584.36±207.15)μg/L,与SLE非活动组[(36.43±23.48)μg/L,(281.08±131.92)μg/L]相比,差异有统计学意义(P<0.05).血清和尿液中OPN浓度均和SLEDAI积分呈正相关(r=0.462,0.901,P值均<0.01).尿液OPN浓度和尿免疫球蛋白G、尿微量白蛋白、尿α1微球蛋白、尿B2微球蛋白呈正相关(r=0.458,0.359,0.342,0.409,P值均<0.05).OPN在狼疮性肾炎患者肾小管上皮表达.结论 OPN与SLE及肾损有密切关系.     

抗CCP抗体在类风湿关节炎诊断中的意义

目的　探讨抗环瓜氨酸肽 (CCP)抗体对类风湿关节炎 (RA)的诊断意义 ,并了解其与抗核周因子 (APF)及IgM型类风湿因子 (RF)之间的相关性。 方法　ELISA法检测 3 3例RA、2 8例非RA病例及 2 6例正常人血清的抗CCP抗体。结果　 3 3例RA病人中 ,抗CCP抗体阳性 18例 ,抗CCP抗体对RA诊断的敏感性为 75 .8%;对照组阳性率7.4%( 4 / 5 4) ,特异性为 92 .6%。 3 3例RA中抗CCP抗体与APF同时阳性 18例 ,同时阴性 4例 ,两者一致率为 66.7%;与RF同时阳性 2 1例 ,同时阴性 4例 ,一致率为 75 .8%。抗CCP抗体与APF及RF抗体的相关性无统计学意义。结论　抗CCP抗体是一种新的对RA有较高诊断价值的血清学标记物。抗CCP抗体与APF及RF的三者联合检测更有助于RA的诊断     

Pre-miR-146a基因rs2910164位点单核苷酸基因多态性及miR-146a表达与类风湿关节炎相关性研究

目的 探讨pre-miR-146a基因rs2910164位点单核苷酸基因多态性及miR-146a表达与类风湿关节炎相关性.方法 采用聚合酶链反应-连接酶检测反应检测123例类风湿关节炎(RA)患者和220例健康对照者pre-miR-146a rs2910164位点基因多态性,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测68例RA患者、10例骨关节炎(OA)患者及20例健康对照外周血单个核细胞中miR-146a的表达水平,并选取10例RA疾病活动患者行激素加免疫抑制剂正规治疗3个月后miR-146a表达水平的测定.收集并计算RA患者临床参数:发病年龄、性别、类风湿因子(RF)和抗环瓜氨酸肽(抗-CCP)抗体、RA疾病活动(DAS28≥3.2)、骨破坏(X＞Ⅰ期).统计学处理采用X2检验、方差分析、t检验和Pearson相关分析.结果 RA组pre-miR-146a rs2910164位点的基因型频率和等位基因频率与健康对照组比较,差异无统计学意义(P均＞0.05).RA患者pre-miR-146ars2910164位点基因型与发病年龄、性别、RF和抗-CCP抗体阳性率、RA疾病活动、骨破坏阳性率及miR-146a表达量均无相关性(P均＞0.05).RA患者组miR-146a的表达量高于健康对照组和OA组(P均＜0.01),后两组miR-146a的表达量无统计学差异(P＞0.05).RA疾病活动组miR-146a表达高于非活动组和对照组(P均＜0.01),后两组miR-146a的表达量无统计学差异(P＞0.05).RA疾病活动患者治疗后miR-146a表达下降(P＜0.05),DAS28评分降低(P＜0.01).RA患者组miR-146a的表达与红细胞沉降率(ESR,即血沉)、C反应蛋白(CRP)及DAS28评分之间呈正相关(P均＜0.01),与RF、抗-CCP抗体滴度无相关性(P均＞0.05).结论 我国汉族人群中,pre-miR-146a rs2910164位点多态性与RA的易感性、临床参数及miR-146a的表达无相关性,RA患者外周血单个核细胞miR-146a表达上调,其表达水平与RA病情活动有关,miR-146a的检测可能是RA病情活动的一个有用的判断指标.     

风湿免疫科规范化培训在内科住培学员中的效果评价

目的了解风湿免疫科规范化培训在内科住培学员中的实施效果,为进一步提高培训效果提供参考依据。方法采取方便抽样法,2018年12月至2019年1月选取安徽省立医院内科专业基地的住培学员作为调查对象,采用自行设计的调查表进行自填式问卷调查。结果共调查195名学员,在风湿免疫科轮转前,有87.18%的学员在临床工作中遇到风湿免疫性疾病病人。调查中已参加风湿免疫科轮转学员88人,未轮转学员107人。与未轮转学员相比,轮转学员中分别有79.55%、77.27%、80.68%的学员了解3种及以上风湿免疫科常见疾病的诊断标准、鉴别标准和治疗方法,比例均高于未轮转学员（P < 0.01）。轮转学员对抗风湿药物以及风湿免疫科临床技能掌握情况也明显高于未轮转学员（P < 0.01）。大部分学员希望采用的风湿免疫科轮转培训方式是教学查房和病例讨论;考核方式是平时表现考核;带教老师的职称是3年以上的主治医师。结论通过风湿免疫科规范化培训轮转能够明显提高学员对风湿免疫科理论知识、临床技能、风湿免疫性疾病诊治等方面的认知,提高规培学员的专科技能和诊疗水平。     

P2X7R基因rs1621388多态性与痛风易感性的关联研究

目的 分析嘌呤受体P2X配体门控离子通道7（purinergic receptor P2X ligand-gated ion channel 7,P2X7R）基因多态性与痛风易感性的关联。方法 通过对P2X7R基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点的连锁分析,确定具有代表性的rs1621388为研究位点。提取114例痛风患者（实验组）及93例高尿酸血症患者（对照组）外周血单个核细胞DNA,采用TaqMan探针法进行rs1621388基因分型,分析不同等位基因或基因型与痛风易感性的关系。结果 rs1621388基因型AA、AG和GG在痛风组中频率分别为10.5%、49.1%和40.4%,高尿酸血症组中分别为3.2%、28.0%和68.8%,两组基因型分布差异具有统计学意义（χ2=17.369,P<0.001）。等位基因A和G在痛风组中频率分别为35.1%和64.9%,高尿酸血症组分别为17.2%和82.8%;等位基因A是痛风的易感基因（OR=2.601,95%CI:1.629~4.154,P<0.001）。显性模型（AA+AG vs GG）基因型频率分布在痛风和高尿酸血症组间的差异具有统计学意义（OR=3.262,95%CI:1.833~5.807,P<0.001）。结论 P2X7R基因单核苷酸位点rs1621388多态性与痛风易感性存在关联。