人脐静脉内皮细胞的分离培养与鉴定*

目的：建立体外培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的方法,并对培养的细胞进行鉴定,为人工血管立体环化打下基础。方法：胶原酶灌注法分离HUVEC,用含胎牛血清的RPMI-1640营养液培养。光镜、电镜、免疫荧光方法进行形态学鉴定,放射免疫法测定其细胞活性与分泌激素功能。结果：分离的HUVEC体外培养一周左右可长成单层,光镜下为多角形,呈铺路石子状排列。透射电镜可见W-P小体。荧光染色Ⅷ因子相关抗原阳性,培养上清中含高浓度6-keto-PGF1a与ET。结论：所培养的细胞为HUVEC,并具有其细胞生物学功能。     

融合基因CDglyES重组腺病毒对卵巢癌细胞抑制作用的体外研究

  目的  构建含CDglyES融合基因的重组腺病毒,体外观察其对人卵巢癌细胞的直接抑制作用及其对血管内皮细胞生长的抑制作用。  方法  用细菌内同源重组方法构建腺病毒穿梭质粒prAdCDglyES。采用脂质体介导转染293包装细胞,扩增获取重组腺病毒rAdCDglyES。采用MTT法观察rAdCDglyES对卵巢癌细胞SKOV-3生长抑制的影响,同时观察其表达产物抑制脐静脉血管内皮细胞ECV-304增殖的作用。  结果  纯化的rAdCDglyES滴度是1×1013.3 TCID50/L,其对SKOV-3细胞生长抑制率是（83.1±6.3）%,与对照组rAd-LacZ（24.1±13.2）%相比有显著性差异（P < 0.01）。浓缩的转染rAdCDglyES的细胞培养上清液抑制ECV-304细胞增殖,抑制率是（78.7±1.6）%,而同样浓缩的转染rAd-CD的细胞培养上清液抑制率是（23.9±9.7）%,二者有显著性差异（P < 0.01）。  结论  研究结果表明重组腺病毒rAdCDglyES具有体外直接和间接抑制人卵巢癌细胞效能。      

乳腺癌rAdCDES基因治疗的体内外实验研究

恶性肿瘤已成为一类严重威胁人类健康和生命的疾病.目前,将多种目的基因融合后行肿瘤基因治疗已为众多学者所关注.将胞嘧啶脱氨酶(CD)基因和内皮抑素(ES)基因融合成重组腺病毒rAdCDES,并观察其在体内外对乳腺癌细胞生长抑制作用,以期为乳腺癌的基因治疗提供新的研究方向.     

含TKglyES融合基因重组质粒的构建

目的：构建携带胸腺嘧啶激酶（thymidine kinase，TK）及内皮抑素（Endostatin，ES）融合基因的重组质粒。方法：以pAdE1CMV—TK为模板，经聚合酶链反应（PCR）扩增TK片段，将其插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack—CMV，再以PET-19b—ES质粒为模板经PCR扩增glyES片段，将其插入TK片段的下游，构建成pAdTrackCMV—TKglyES。结果：酶切、PCR及DNA测序鉴定表明成功构建了携带胸腺嘧啶激酶（thymidine kinase）及内皮抑素（Endostatin）融合基因的重组质粒。结论：为进一步构建病毒载体用于肿瘤基因治疗打下基础。