慢病毒转染人骨髓间质干细胞研究

目的:分离培养人骨髓来源间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并进行慢病毒载体介导的基因转染研究。方法:采取全骨髓贴壁培养法分离培养人骨髓MSCs。利用脂质体法进行慢病毒感染人骨髓MSCs。结果:分离培养出人骨髓来源的MSCs,并用携带绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的慢病毒成功感染人骨髓MSCs。结论:获得人骨髓MSCs并进行慢病毒载体介导的基因修饰,为间质干细胞基因工程和组织工程研究奠定了基础。     

体外诱导人骨髓间质干细胞分化为肝细胞样细胞

目的:探讨人骨髓间质干细胞(MSCs)在体外特定条件下是否可以转化为肝细胞样细胞.方法:分离培养人骨髓间质干细胞,采用肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)及CCl4损伤的小鼠肝脏共培养等诱导方式,在不同时间点分别用RT-PCR和荧光定量PCR检测肝细胞特异性基因的表达,免疫组织化学染色检测肝细胞标志. 结果: 在HGF和bFGF诱导第7天时甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)、细胞角蛋白18(cytokeratin-18, CK18)和色氨酸2,3-双加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase,TDO)基因表达阳性,CK18和TDO的表达随诱导时间延长增高;第7天诱导细胞组织化学染色AFP、白蛋白(ALB)、肝细胞核因子(hepatocyte nuclear factor,HNF)、肝细胞特异性抗原(HSA)和CK18表达阳性.与损伤小鼠肝组织共培养21 d后细胞表达AFP和TDO.结论:HGF和bFGF联合诱导以及与CCl4损伤肝组织共培养的方法可体外促进人MSCs分化为肝细胞样细胞,可为肝脏疾病或肝损伤的干细胞治疗提供细胞来源.     

MMP-2和VEGF在视网膜新生血管中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和血管内皮生长因子（VEGF）在视网膜新生血管中的表达及意义。方法取C57BL/6J小鼠60只,随机分为高氧组和正常组,各30只。以高浓度氧诱导小鼠建立视网膜新生血管模型。采用ADP酶视网膜铺片、苏木精-伊红染色及免疫组织化学法分别观察视网膜血管的改变、计数视网膜新生血管内皮细胞数并检测MMP-2、VEGF蛋白的表达。结果高氧组视网膜可见大量新生血管形成;突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数为（33.51±2.55）个,与对照组相比差异有统计学意义（t=9.345,P〈0.05）。高氧组与对照组比较,MMP-2、VEGF蛋白在神经节细胞层、内丛状层、内核层和突破视网膜内界膜的新生血管中高表达,且二者表达呈正相关（r=0.825,P〈0.05）。结论MMP-2、VEGF共同促进视网膜新生血管的形成,且二者可能具有协同作用。     

亚健康人群中失眠者与正常人群脑电地形图对比分析

目的:比较分析亚健康人群中失眠患者与正常人群的脑电地形图,获得诊断学上的证据.方法:对500例亚健康人群中失眠患者(亚健康组)及500例健康人群(健康组)均进行脑电地形图及头颅CT检测,并把二者进行对比研究.结果:脑电地形图中亚健康组中失眠者α波波幅降低463例,调节调幅欠佳474例.β活动增多473例.过度换气(HV)后θ活动增多456例.δ活动增多27例.无明显变化17例.α频带平均功率谱降低且不对称,在Scale(标尺)为32时其平均功率谱值<1.5uV,颜色灰阶为<3灰阶为479例 ,θ频带平均功率谱在大脑前部有增高者276例.平均功率谱值在<1.5 uV.β频带平均功率谱增高为479例 .健康组中α波波幅降低26例,调节调幅欠佳23例.β活动增多37例.过度换气(HV)后θ活动增多33例.δ活动增多2例.无明显变化465例.α频带平均功率谱正常并且对称,在Scale(标尺)为32 时其平均功率谱值在>3.5uV,颜色灰阶为>5灰阶为465例.与健康组比较,亚健康组出现的异常率明显增高(P<0.05);头颅CT检测2组均显示正常范围.结论:亚健康失眠患者的脑电活动不稳定,具有明显焦虑趋势,脑电地形图侧重于大脑功能性诊断,对亚健康人群中失眠患者有诊断价值.     

HSV—1 SM44株糖蛋白D基因真核表达载体的构建及其免？…

目的 构建ＨＳＶ－１型ＳＭ４４株糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因的真核表达载体,并用此重组质粒直接免疫小鼠,探讨ＨＳＶ－１ ｇＤ基因作为基因疫苗的可能性。方法 从ＨＳＶ－１基因组中扩增ｇＤ的全编码基因,克隆入载体ｐＵＣ１９中,测序鉴定后转入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）。所得重组质粒ｐｃＤ－ＮＡ－ｇＤ以电穿孔法转染ＣＨＯ细胞,并以荧光染色法鉴定表达效果。用ｐｃＤＮＡ－ｇＤ免疫小鼠,ＥＬＩＳＡ法检测基因免疫     

日本脑炎病毒内影像组抗独特型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的 制备具有内影像作用的分泌日本脑炎病毒（JEV）抗独特型单克隆抗体（AId mAb)杂交瘤细胞系。方法 以传统免疫法和硝酸纤维素膜（NC膜）皮下包埋免疫法,用具有高中和活性的抗JEV mAb 2H4和2F2分别免疫Balb/c小鼠,按常规方法融合,经多种ELISA、表面等离子共振和动物免疫实验筛选并鉴定具有内影像作用的AId mAb。结果 获得了3株可分泌AId mAb的杂交瘤细胞系。结论 所获AId mAb均能模拟JEV抗原,为JEV受体的分离、纯化提供了条件。     

12例鼻息肉中花生凝集素受体的研究

近 2 0年来凝集素在生物学方面的应用研究发展尤为迅速 ,它最大的特点在于其能够识别糖和糖类 ,每一种凝集素具有对某一种特殊的碳水化合物有专一结合的能力 [1 ] ,凝集素受体是指能与相应凝集素特异结合的糖复合物 (糖蛋白 ,糖脂和蛋白聚糖 ) ,它在细胞的多种功能中起主要作用 ,如细胞间的识别和粘着、营养吸收、抗原抗体反应等 [2 ] 。本文利用花生凝集素 (PNA)与其糖复合物受体特异结合的特性 ,采用免疫组化ABC技术研究鼻息肉中花生凝集素受体的分布及其意义。1　材料与方法1.1　材料 :经病理证实的鼻息肉标本 12例 ,正常鼻窦粘膜标本…     

胰肾联合移植的体会

目的　总结胰肾联合移植的经验与教训。方法　回顾性分析 1例胰肾联合移植治疗的全过程和并发症。结果　糖尿病合并肾功能损害的病人 ,围手术期的并发症很多 ,有些并发症很凶险。手术顺利完成 ,移植的胰腺和肾脏功能都很好。绝大多数的并发症均被控制 ,只是口腔顽固性溃疡没有好办法 ,可能跟免疫抑制过量有关。术后 6 5 d发生大面积脑梗死 ,可能跟栓子脱落有关。结论　胰肾联合移植围手术期并发症的处理是管理的重点 ,应注意免疫抑制剂的个体化。     

上海市7岁以下儿童头胸围发育的调查

[目的 ]　了解上海市 7岁以下儿童头胸围发育现状 ,1985～ 1995年头胸围相互变化的规律。 [方法 ]　选取同年龄、同性别、同城乡的 0～ 6岁儿童分 2 2个年龄组 ,每组 2 0 0例 ,分析头胸围的均数及标准差。 [结果 ]　1995年现状 :0～ 4个月龄的婴儿 ,胸围增长的速度大于头围 ,4～ 12月龄婴儿 ,胸围增长速度小于头围 ,1岁以后胸围增长速度又大于头围。头胸围交叉相对早的婴儿 ,体格发育优越。 1985年与 1995年比较 :头胸围交叉时间无明显提前 ,个别年龄组有延迟。 10年均值比较发现 ,胸围发育落后于头围发育。 [结论 ]　头胸围增长速度因年龄增长而变化。 10年比较 ,胸围发育落后于头围发育。     

补阳还五汤药物血清对周围神经再生的影响

目的用血清药理学方法观察补阳还五汤对体外培养的施万细胞生长情况的影响。方法用补阳还五汤药物血清及对照组血清培养取自Wistar新生鼠的施万细胞,在种植不同时间时观察各组的生长情况:用S-100免疫组织化学染色的方法来鉴定所取施万细胞的纯度,同时,用MTT法测定各组的OD值,推测细胞的活性。结果(1)免疫组织化学染色结果显示:所取细胞中85%以上是施万细胞,达到了试验所需要求;(2)药物组细胞比对照组细胞生长形势好,突起长度明显长于对照组(P<0.05);(3)药物组OD值明显高于对照组(P<0.05),而且有一定的血清浓度依赖性。结论本实验成功地建立了中药促进周围神经再生的血清药理学实验方法,并用此实验方法证明了补阳还五汤对周围神经再生的促进作用,为进一步阐明补阳还五汤治疗周围神经损伤的机制打下了基础。