等位基因特异性PCR法快速检测结核分枝杆菌常见耐药突变基因

摘要：目的：建立一套同步检测结核分枝杆菌(MTB)常见耐药突变基因的等位基因特异性PCR（AS-PCR）检测体系,以间接判断对利福平（RFP）与异烟肼（INH）的耐药性。 方法：用AS-PCR技术同步检测58株MTB临床分离株rpoB基因516位、526位和531位,katG基因315位及inhA基因-15位密码子突变,并与DNA测序结果进行比对。 结果：AS-PCR法对RFP耐药株检出率为95.1%（39/41）,其中rpoB基因531位、526位、516位点突变分别检出28株、10株、2株,包括531位与526位联合点突变1株;未检出突变的2株RFP耐药株经测序验证1株未发生突变、1株发生533位点突变;RFP敏感株均未检测到突变。AS-PCR法对INH耐药株检出率为86.5%（45/52）,其中katG基因315位点突变43株、inhA基因-15位点突变2株,未检出突变的7株INH耐药株经测序验证未见突变;INH敏感株均未检测到突变。 结论：等位基因特异性PCR能够快速检测MTB常见突变基因,具有较高的敏感性与特异性,快速经济、操作简便。     

流感嗜血杆菌分布及耐药性分析

摘要：目的：了解临床分离流感嗜血杆菌（Hi）的分布及耐药情况,为临床合理使用抗菌药物、预防和控制感染提供依据。 方法：收集中南大学湘雅医院2010~2012年各类临床标本Hi分离株187株,用K-B纸片扩散法检测Hi对常用的14种抗菌药物的敏感性,用头孢硝噻吩纸片法检测产β-内酰胺酶情况。 结果：187株Hi主要分离自呼吸内科(41.17%),以儿童（21.39%）和老年（39.57%）患者居多。冬、春两季分离率较高,分别为36.90%(69/187)和30.48%(57/187)。Hi对氨苄西林、复方磺胺甲噁唑和头孢呋辛的耐药率较高,依次为81.3%、57.2%和38.5%;对氨苄西林/舒巴坦、头孢曲松、洛美沙星、左氟氧沙星、四环素、头孢噻肟、环丙沙星和阿奇霉素敏感率均＞60%。未成年人分离株对环丙沙星、氧氟沙星、左氟氧沙星敏感率（82.35%、76.47%、97.06%）高于成人分离株（49.57%、47.89%、79.87%）,χ²值分别为19.629、14.529、10.728,P均<0.05;对头孢曲松的敏感率（85.29%）低于成人分离株（94.12%）,χ²=4.076,P<0.05。产β-内酰胺酶株检出率为64.17%,β-内酰胺酶阴性氨苄西林耐药(BLNAR)菌株22株。 结论: Hi对氨苄西林和复方磺胺甲噁唑耐药严重,而β-内酰胺酶抑制剂、喹诺酮类、第2、3代头孢类药物、阿奇霉素可作为优先选择药物。     

免疫血红蛋白法与转铁蛋白法检测胃液隐血结果比较

目的 评价并比较免疫血红蛋白法（IFOBT）与转铁蛋白法（Tf）在胃液隐血检测中的应用.方法 收集72例胃液标本（标本需在收集后1 h内检验完成,若不能及时检验需置于4℃冰箱保存）分别用血红蛋白胶体金试纸条、转铁蛋白试纸条进行隐血检测.结果 免疫血红蛋白法共检出阳性标本20例,阳性率为27.78%;转铁蛋白法检出阳性标本41例,阳性率为56.94%,两种检验方法结果差异有显著性（P＜0.05）,转铁蛋白法阳性率高于血红蛋白法.而联合检测（Tf＋IFOBT）阳性率增加到62.5%.通过胃液颜色与隐血检测结果分析发现,当胃液颜色为黑色、黑褐色、咖啡色时,绝大多数隐血试验为阳性.但是其他颜色的胃液也有阳性结果.结论 转铁蛋白法检测胃液隐血优于免疫血红蛋白法,联合检测可提高胃液隐血试验阳性率.     

ICU病房2012株病原菌耐药性分析

目的调查ICU病房临床分离株分布及对临床常用药物耐药性,为临床合理应用抗菌药物、预防和控制感染提供依据。方法对本院2009年6月至2011年6月ICU病房送检的各种标本进行细菌培养鉴定及药敏试验,对分离出的病原菌及其耐药情况进行统计分析。结果2012株病原菌以革兰阴性杆菌为主,占70．1％;其次是革兰阳性球菌,占18．2％;真菌占11．7％。分离率居前6位的依次为鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及白色念珠菌;病原菌主要来自呼吸道和血液标本。革兰阴性杆菌对大多数抗菌药物耐药严重,耐药率大多在40％以上。肠杆菌科细菌和铜绿假单胞菌对头孢哌酮／舒巴坦、美洛培南和亚胺培南耐药率较低,均低于16．0％;鲍曼不动杆菌对头孢哌酮／舒巴坦耐药率最低（8．8％）。金黄色葡萄球菌中MRSA的检出率为75．2％,检出两株耐万古霉素屎肠球菌。结论ICU病原菌以鲍曼不动杆菌为最多,主要病原菌耐药情况严重。     

1120株鲍氏不动杆菌的分布及耐药性分析

目的 了解医院感染鲍氏不动杆菌(ABA)的临床分布及其耐药性,为临床用药提供依据.方法 回顾性调查分析2009年1月-2011年6月临床标本中分离的1120株鲍氏不动杆菌临床特点及其耐药性.结果 2009年1月-2011年6月共检出1120株ABA,其中2009-2011年分别检出253、444、423株,检出率分别为8.9％、10.1％、14.6％;ABA的标本来源以呼吸道为主,占76.7％,主要来自ICU、神经外科和呼吸内科,分别占36.9％、12.2％、9.3％;鲍氏不动杆菌除对头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低外,对其余15种抗菌药物耐药率均较高,且呈逐年升高趋势.结论 鲍氏不动杆菌的分离率及耐药性逐年增加,应积极预防治疗医院感染,合理使用抗菌药物,以减少耐药株的产生.     

长沙地区鲍曼不动杆菌临床分布特征及耐药性分析

目的 了解长沙地区鲍曼不动杆菌的临床分布特征及耐药现状,为临床合理选用抗菌药物提供依据.方法 收集长沙地区10家综合性医院临床分离的165株鲍曼不动杆菌,采用K-B法检测药物敏感性.结果 165株鲍曼不动杆菌中,154株来自痰及支气管分泌物(占93.4%),其次为伤口分泌物6株(占3.6%).病区来源以ICU病房最高,占41.2%,其次为神经外科和呼吸科,分别为12.7%和11.0%.在检测的18种药物中,耐药率超过50%的达14种(77.8%),且102株鲍曼不动杆菌呈多重耐药,占61.8%.耐药率最高为哌拉西林(72.5%),其次为头孢噻肟(71.2%)和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑(70.0%),耐药率最低为头孢哌酮/舒巴坦(1.2%).结论 临床分离鲍曼不动杆菌多来源于呼吸道标本,以ICU、神经外科和呼吸科为主,且多重耐药现象十分严重.临床应加强对鲍曼不动杆菌耐药性监测,合理选用抗菌药物.     

2009年中国13家教学医院院内感染病原菌的抗生素耐药性监测

目的 监测2009年我国不同地区13家教学医院院内获得病原菌的分布和体外药物敏感性.方法 收集来自13家医院院内BSI、HAP和IAI患者标本的病原菌.菌株经中心实验室复核后,采用琼脂稀释法测定替加环素等抗菌药物的MIC值,数据输入WHONET5.6软件进行耐药性分析.结果 共收集到2 502株病原菌.引起BSI的前3位病原菌分别为大肠埃希菌[27.1%(285/1 052)]、凝固酶阴性葡萄球菌[12.6%(133/1 052)]和肺炎克雷伯菌[10.8%(114/1 052)];引起HAP的前3位病原菌分别为鲍曼不动杆菌[28.8%(226/785)]、铜绿假单胞菌[16.1%(126/785)]和肺炎克雷伯菌[14.6%(115/785)];而IAI的主要病原菌为大肠埃希菌[31.0%(206/665)]、肺炎克雷伯菌[11.3%(75/665)]和屎肠球菌[10.8%(72/665)].对于大肠埃希菌和克雷伯菌,敏感率大于80%的药物包括亚胺培南和美罗培南(98.1%～100%)、替加环素(95.3%～100%)、哌拉西林-三唑巴坦(88.6%～97.1%)和阿米卡星(88.3%～92.5%).对于肠杆菌属、柠檬酸杆菌属和沙雷菌属,替加环素的敏感率为93.5%～100%,亚胺培南和美罗培南的敏感率为92.9%～100%,敏感率较高的抗萧药物还包括阿米卡星(85.2%～96.7%)、哌拉西林-三唑巴坦(82.4%～96.4%)、头孢吡肟(79.6%～96.7%)和头孢哌酮-舒巴坦(78.7%～90.0%).铜绿假单胞菌对多黏菌素B的敏感率最高(100%),其次为阿米卡星和哌拉西林-三唑巴坦(81.9%和80.1%).鲍曼不动杆菌对多黏菌素B的敏感率最高(98.8%),其次为替加环素(90.1%)和米诺环素(72.O%).CRAB的发生率为60.1%.金黄色葡萄球菌中MRSA的发生率为60.2%,凝固酶阴性葡萄球菌中MRSCoN的发生率为84.2%.所有葡萄球菌对替加环素、万占霉素和利奈唑胺敏感,仅有1株溶血葡萄球菌对替考拉宁中介.本次监测发现2株利奈唑胺中介的粪肠球菌和1株万古霉素和替考拉宁耐药的屎肠球菌,替加环素对这3株肠球菌的MIC值范围为0.032～0.064μg/ml.结论 替加环素、碳青霉烯类、哌拉西林-三唑巴坦、阿米卡星和头孢吡肟对医院分离的肠杆菌科菌保持了较高的抗菌活性;多黏菌素B对铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌体现出高抗菌活性,替加环素对鲍曼不动杆菌抗菌活性较高;替加环素、万古霉素和替考拉宁、利奈唑胺对院内获得革兰阳性球菌保持了较高的抗菌活性.

Abstract：

Objective To investigate distribution and antimicrobial resistance among nosocomial pathogens from 13 teaching hospitals in China in 2009. Methods Non-repetitive pathogens from nosocomial BSI, HAP and IAI were collected and sent to the central lab for MIC determination by agar dilution method.WHONET5.6 software was used to analyze the data. Results A total of 2 502 clinical isolates were collected. The top three pathogens of BSI were Escherichia coli [27. 1% (285/1 052 )] , coagulase-negutive staphylococcus [12. 6% ( 133/1 052)] and Klebsiella pneumoniae [10. 8% ( 114/1 052)]. The top three pathogens of HAP were Acinetobacter baumannii [28. 8% (226/785)], Pseudomonas aeruginosa [16. 1% (126/785)] and Klebsiella pneumoniae [14.6% (115/785 )] . The top three pathogens of IAI were Escherichia coli[31.0% ( 206/665 )], Klebsiella pneumonia [11.3% ( 75/665 )] and Enterococcus faecium [10. 8% (72/665)]. Against Escherichia coil and Klebsiella spp. , the antimicrobial agents with higher than 80% susceptibility rate included imipenem and meropenem (98. 1%-100% ), tigecycline (95.3%-100% ), piperacillin-tazobactam ( 88.6% -97. 1% ) and amikacin ( 88. 3% -92. 5% ). Against Enterobacter spp. , Citrobacter spp. and Serratia spp. , the susceptibility rates of tigecycline were 93.5% -100% whereas the value of imipenem and meropenem were 92.9% -100%. Other antimicrobial agents with high activity included amikacin ( 85.2% -96. 7% ), pipcracillin-tazobactam ( 82.4% -96.4% ), cefepime ( 79. 6% -96. 7% ) and cefoperazonc-sulbactam (78. 7%-90. 0% ). Polymyxin B showed the highest susceptibility rateagainst Pseudomonas aeruginosa ( 100% ), followed by amikacin ( 81.9% ) and piperacillin-tazobactam (80.1% ). Polymyxin B also showed the highest susceptibility rate against Acinetobacter baumannii (98. 8% ), followed by tigecycline (90. 1% ) and minocycline (72. 0% ). The incidence of carbapenemresistant Acinetobacter baumannii was 60. 1%. The MRSA rate was 60. 2% and the MRSCoN rate was 84. 2%. All Staphylococcus strains were susceptible to tigecycline, vancomycin, teicoplanin and linezolid except for one isolate of Staphylococcus haemolysis with intermediate to teicoplanin. Two Enterococcus faecalis isolates which were intermediate to linezolid and one Enterococcus faecium isolate which was resistant to vancomycin and teicoplanin was found in this surveillance, while the MICs of tigecycline against these three isolates were 0. 032-0. 064 μg/ml. Conclusions Tigecycline, carbapenems, piperacillin-tazobactam,amikacin and cefepime remain relatively high activity against nosocomial Enterobacteriaceae. Pseudomonas aeruginosa exhibite high susceptibility to polymyxin B, while Acinetobacter baumanni shows high susceptibility to polymyxin B and tigecycline. Tigecycline, vancomycin, teicoplanin and linezolid remain high activity against nosocomial gram-positive cocci.     

长沙市某医院儿科常见病原菌分布及其耐药性分析

目的了解和探讨某医院儿科分离的病原菌构成及其耐药情况,为临床诊治提供实验室依据。方法 对2009年1-12月该院儿科2 973份临床标本进行接种培养、分离,利用VITEK2全自动细菌鉴定仪对病原菌进行鉴定和药敏试验,对所得结果进行回顾性分析。结果2973份标本中共分离出常见病原菌405株,分离率为13.6%,病原菌主要分离自痰和血液标本;所分离出的405株菌株中革兰阳性球菌占31.6%,以凝固酶阴性葡萄球菌（CONS）为主达48.4%,MRSA和MRCNS检出率分别为45.5%和54.8%,未发现耐万古霉素菌株;革兰阴性杆菌占60.5%,排在前4位的是大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌,大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌对氨苄西林的耐药率都高于95%,对头孢曲松及头孢呋辛等耐药率高于50%,未发现亚胺培南耐药株。结论该院儿科分离的病原菌存在严重耐药现象,耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）检出率高,大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌对多种抗菌药物耐药率高,加强耐药监测,合理使用抗生素非常重要。     

湘雅医院细菌耐药性监测

目的了解中南大学湘雅医院2009年临床常见分离菌的分布及耐药性。方法采用Vitek 2全自动微生物鉴定分析系统对临床分离菌株进行鉴定及药敏试验,WHONET 5.4统计软件对数据进行分析。结果 7 841株临床分离菌株中,革兰阳性菌占28.5%（2 237/7 841）,革兰阴性菌占55.7%（4 369/7 841）,真菌占15.8%（1 235/7 841）。革兰阳性球菌居前五位的分别为凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌和血液链球菌。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的检出率分别为63.7%和67.2%,未发现万古霉素耐药或中介的葡萄球菌,但分离到万古霉素耐药肠球菌（VRE）7株。革兰阴性杆菌中分离率居前五位的依次为铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌。肠杆菌科细菌中,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率最低（〈2.3%）,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率〈13.0%,而阴沟肠杆菌对哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别达40.0%和28.4%。非发酵菌中,铜绿假单胞菌对美洛培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率较低,分别为9.1%和12.4%;鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦、左氟沙星及氨苄西林/舒巴坦耐药率较低,分别为7.0%、7.6%和16.3%,对美洛培南耐药率达28.8%;对其他抗菌药物耐药率均超过40%。结论该院常见病原菌以革兰阴性杆菌为主;病原菌对多种临床常用抗菌药物耐药,尤其是对万古霉素耐药肠球菌的出现及对碳青霉烯类耐药非发酵菌的增加,应引起临床高度重视,及时采取有效措施,控制耐药菌在医院内播散和暴发流行。