ES细胞源性表皮干细胞在皮肤缺损创面的分化

目的探讨ES细胞源性表皮干细胞移植入小鼠全层皮肤缺损后对创面的修复作用,为组织工程皮肤的研究提供新的思路。方法将羊膜诱导后的带有核荧光标记的ES细胞源性表皮干细胞以生物膜为载体,覆盖小鼠全层皮肤缺损创面。术后1～8周连续取材,HE染色观察,苏丹Ⅲ染色,β1整合素、CK15、CK19、CEA免疫组化荧光双标观察。结果术后2周,创面完全长合,较厚的新生皮完全覆盖创面,基底层细胞增生,形成细胞柱伸向真皮层,真皮层中可见管腔样结构,4周后新生表皮开始变薄,新生表皮下可见毛囊样、汗腺样、皮脂腺样等结构,皮脂腺样结构苏丹Ⅲ染色阳性。免疫双标结果显示,1～4周新生表皮基底层细胞呈β1整合素、CK19阳性,真皮层中带有核标记的管状或泡状结构呈CK15、CEA阳性。结论ES细胞源性表皮干细胞在小鼠全层皮肤缺损创面可分化为表皮样、汗腺样、毛囊样和皮脂腺样等结构的潜能。     

组织工程皮肤用真皮支架细胞相容性的比较研究

目的研究几种真皮支架的细胞相容性，为构建组织工程皮肤提供资料。方法取胶原海绵、明胶海绵、PEGA和PHBV共4种真皮支架，与小鼠成纤维细胞和ES源表皮样干细胞体外培养，观察前者对后者粘附率的影响，及对成纤维细胞增殖的影响，评价真皮支架的细胞相容性。结果成纤维细胞和ES源表皮样干细胞在4种支架材料上均能粘附存活，成纤维细胞能增殖，但在胶原海绵、PHBV和PLGA支架上的增殖率明显高于明胶海绵。结论几种真皮支架的细胞相容性较好，可用于新型组织工程皮肤的构建。     

bFGF对小鼠ES细胞生长增殖的影响

[目的]研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对ES细胞增殖的影响,为建立稳定的小鼠ES细胞培养和扩增打下基础.[方法]将E14小鼠胚胎干细胞分别培养于含LIF106U/L并含5μg/L、10μg/L、20μg/L3种浓度的bFGF的ES细胞基础培养液中,观察细胞形态和计数ES细胞克隆数.[结果]10μg/L和20μg/L bFGF与含LIF 106U/L的ES细胞形态相似,3 d后ES细胞克隆数分别为88±8、128±12和114±17,三者克隆数无显著差异(P＞0.05).ES细胞组化染色呈AKP和SSEA-1阳性.[结论]bFGF可促进小鼠ES细胞增殖,其最佳浓度为10 μg/L.     

三七总皂苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖及JNK磷酸化的影响

【目的】研究发现,三总皂苷（TPNS）具有抑制和促进细胞增殖的双向调节作用,但是具体的作用机制尚不明确。本研究旨在观察TPNS对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响及经由何种信号通路介导。【方法】采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）和蛋白印迹（Western blot）法观察了体外培养的大鼠VSMC在不同浓度及一定浓度不同作用时间TPNS作用下,VSMC增殖活性的变化及c—Jun氨基末端激酶（JNK）磷酸化的变化：并用DAPI染细胞核,观察TPNS作用后核形态的变化。【结果】MTT法观察到：TPNS的浓度为0．5g／L,1．0g/L,1．5g／L时,无论是处于静息状态或50mL／L血清刺激下,VSMC的代谢于活性均增高;TPNS的浓度为3．0g／L时,静息培养的VSMC的代谢活性没有明显的变化,而50mL／L血清刺激的VSMC的代谢活性仍增高;TPNS的浓度为6．0g／L,12．0g／L时,静息培养或50mL／L血清刺激下的VSMC的代谢活性均降低,并随着浓度的增大．代谢活性降低越明显。同时．Western blot结果显示：TPNS能快速的激活JNK1／2,并呈时间和浓度依赖性。当TPNS的浓度为0．5g／L时,即可引起JNK的磷酸化,并随着浓度的增大,磷酸化作用增强：当TPNS的浓度为1．5g／L时．作用5min,JNK呈现最大程度的激活,随后逐渐减弱。DAPI染核观察到,6．0g／L TPNS作用48h后,VSMC出现了核固缩、核碎片等细胞凋亡的特征。【结论】较低浓度的TPNS可促进血管平滑肌细胞的增殖,而较高浓度的TPNS可抑制其增殖,JNK1／2磷酸化可能是引起细胞增殖受到抑制的机制之一。     

颈总动脉压诱导的小鼠移植静脉血管重构

【目的】 研究血压升高引起血管重构的机制。【方法】 手术取出麻醉后的11 ~ 12周供体C57BL/6J小鼠的下腔静脉,连接到同窝出生的受体小鼠颈总动脉,构建“静脉桥”。继而,收获受颈总动脉压作用不同时间(0,2,4,8周)后的移植静脉,经石蜡包埋HE染色。丽春红-维多利亚蓝染色以及平滑肌特异性抗体免疫组化染色后观察其血管构筑。【结果】术后各时间点均可见移植静脉血管壁增厚及新生内膜的形成,呈时间依赖性。与正常静脉[(11.10 ± 0.9)μm)]相比,术后8周血管壁[(88.97 ± 16)μm)]增厚了8倍(P < 0.01)。术后2周移植静脉新生内膜中即可见血管平滑肌细胞大量增生,4周最多,8周后数量减少,但细胞外基质明显增多。移植静脉在动脉压作用下,其弹性膜历经了断裂、合成和重建过程。【结论】 血压升高产生的机械力可直接导诱导移植的小鼠静脉粥样硬化以及弹力膜的重构。本研究可望为深一步探索高血压引起血管重构的机制及防治新策略提供有用的动物模型及实验依据。     

ES细胞源性表皮干细胞分化潜能的研究

目的探讨人羊膜诱导的ES细胞源性表皮干细胞在肾被囊内的分化,研究其在不同微环境中的分化潜能和稳定性,为组织工程皮肤寻找新的种子细胞奠定基础。方法Hoechst33342标记129小鼠E14胚胎干细胞,与人羊膜共培养4d,定向诱导其分化为的表皮干细胞克隆,诱导后的细胞移植入129小鼠肾被囊内,术后4,6和8周取材。对移植后细胞的分化进行形态学和免疫荧光双标CK19及CK18检测。结果ES细胞源性表皮干细胞在小鼠肾被囊内4周,分化为由单层或复层上皮样细胞构成的管状和泡状结构,种植6周和8周,除上述结构外,可见角化复层上皮、汗腺样、皮脂腺样及毛囊样等结构。管泡状结构免疫荧光双标染色呈CK19及CK18阳性。结论ES细胞源性表皮干细胞在肾被囊内,仍具有分化为角化复层上皮、汗腺样、皮脂腺样及毛囊样结构的潜能。     

体外构建的皮肤模型Inspectskin Ⅰ修复裸鼠全层皮肤缺损

【目的】探讨胚胎来源表皮干细胞构建的人工皮肤模型InspectskinⅠ修复全层皮肤缺损的作用,为构建含皮肤附属结构的检验用皮肤奠定基础。【方法】将人羊膜和BMP-4定向诱导小鼠胚胎细胞分化为表皮干细胞,采用筏式培养在体外与PHBV和成纤维细胞共培养构建组织工程皮肤,经短暂培养后移植于裸鼠皮肤缺损创面,对移植物进行形态学和免疫组织化学观察。【结果】移植物可封闭皮肤缺损,在其表面可形成复层表皮样结构,真皮部分可见大小不等的由单层或复层上皮样细胞构成的管状和泡状结构、汗腺样结构和毛囊样结构。免疫组化和免疫双标结果表明新生表皮的基底层分别呈CK19和CK10阳性,腺管样结构分别呈CEA和CK18阳性。【结论】体外重建的人工皮肤能修复裸鼠全层皮肤缺损,胚胎来源表皮干细胞具有分化为复层扁平上皮、汗腺样结构和毛囊样结构的潜能。     

成年大鼠和恒河猴骨髓基质干细胞的体外培养及鉴定

本实验目的是比较成年大鼠和恒河猴骨髓基质干细胞(MSCs)原代培养的细胞形态和生长状况的差异。分别分离成年大鼠和恒河猴的骨髓,密度梯度离心法分离MSCs,传代培养。在细胞生长过程中显微镜观察两种细胞形态及生长状况的差异,并分别进行成脂及成骨诱导。结果表明,在相同的培养条件下,成年大鼠和恒河猴MSCs原代培养细胞形态比较接近,但细胞原代及传代生长状况有差异。大鼠MSCs原代培养及细胞冻存后复苏的生长均快于猴的MSCs。两种动物的细胞都可以向脂肪和成骨细胞分化。猴的MSCs因其生长缓慢和细胞形态的明显改变,需改良其培养条件,才能用于进一步的研究。     

幽门螺杆菌体外培养条件的研究

目的 优化幽门螺杆菌体外培养条件.方法 通过幽门螺杆菌培养基处方及培养环境的对比,探索体外培养的实验综合条件.结果与结论用哥伦比亚培养基作为培养基础制成的选择性培养基培养效果较好,用四通管把培养罐、手动负压泵、压力表和混合气体瓶连接起来,采用抽气-换气法可以有效保证Hp所需的气体环境,并且经济实惠.幽门螺杆菌在添加了混合抗生素和优质胎牛血清的哥伦比亚培养基培养效果优胜于其它选择性培养基,实验的用品及操作过程中严格按照无菌操作规范,能有效地防止杂菌和霉菌的滋生,为提高幽门螺杆菌体外培养率提供条件.     

“双共享”人体寄生虫种质资源库的实践与分析

开放共享的人体寄生虫资源库是开展寄生虫学和寄生虫病防治研究的物质基础。本文在建设人体寄生虫种质资源库中强调"双共享"这一理念和思路。通过实施数据库建设、网站建设和免费开放实物种质资源库等提升其在教学服务、科研服务、科普教育服务和社会服务的水平,以进一步提升华南地区乃至我国寄生虫种质资源的保护和利用水平。