眼内不同组织氨基酸的测定及对视细胞损伤的影响

视网膜脱离是引起视功能损伤的眼科常见病之一,随着基础研究和手术技巧的日臻完善,视网膜脱离手术后的解剖复位率已明显提高,但术后视功能恢复尚不理想,脱离后视细胞凋亡、外节变性及不完全再生和主要由视网膜色素上皮细胞增生所介导的增生性玻璃体视网膜病变是术后视力不良的主要原因。近年的研究表明,兴奋性氨基酸的过度释放可产生兴奋性毒素作用,以谷氨酸和天冬氨酸为主致神经元死亡学说备受学者的关注。视网膜属神经系统的一部分,视网膜脱离后是否也伴有兴奋性氨基酸的产生并对视网膜各层组织尤其是对视细胞及视网膜色素上皮细胞产生了影响。目前尚未定论。本研究采用HPLC反向柱前衍生技术,利用Pico-Tag法对氨基酸分析快速和灵敏高等特点,首次将该方法用于对人眼内组织游离和水解氨基酸的分析,并检测了不同时期玻璃体视网膜内兴奋性氨基酸的含量变化,探讨了兴奋性氨基酸与视网膜脱离后组织损伤的关系,并进行药物干预兴奋性氨基酸以保护视细胞的相关研究,希望能在视网膜脱离后组织损伤的病理机制及药物保护方面有所突破,为临床手术联合兴奋性氨基酸拮抗剂的应用,促进视网膜脱离后视功能恢复提供理论和实验依据。本研究成果主要包括以下内容：     

SV40 BKV及JCV在人脑肿瘤中的表达

目的:探讨多瘤病毒SV40、BKV、JCV与人脑肿瘤发生之间的关系.方法:采用聚合酶链式反应(PCR)技术,对脑星形细胞瘤23例,少突胶质细胞瘤19例,室管膜瘤18例,脉络丛乳头状瘤12例,脑膜瘤11例及正常脑组织12例进行了三种病毒的检测.结果:SV40、BKV和JCV在脑肿瘤组织的阳性率分别为56.6%(47例)、53.0%(44例)和14.5%(12例);在正常脑组织中阳性率分别为8.3%(1例)、8.3%(1例)和16.7%(2例).SV40在脑肿瘤组织中阳性率显著高于正常脑组织(P＜0.01),所检测的五种脑肿瘤与正常组织相比具有显著性差异(P＜0.05);BKV在脑肿瘤组织中阳性率显著高于正常脑组织(P＜0.01),所检测的五种脑肿瘤与正常组织相比具有显著性差异(P＜0.05);SV40与BKV在脑肿瘤中的阳性率具有相关性(关联系数=0.56).JCV在肿瘤组织与正常组织间无显著性差异.结论:SV40及BKV参与脑肿瘤的发生.     

神经生长因子对视网膜脱离视细胞保护作用的实验研究

目的 探讨神经生长因子(NGF)对视网膜脱离(RD)视细胞损伤的保护作用。方法 选用健康青紫蓝兔36只随机分为正常对照组、NGF治疗组和生理盐水(NS)模型组，实验组右眼RD模型制作后，NGF治疗组每天结膜下注射NGF0．1mL(1mg／mL)2次；NS模型组每天结膜下注射NS0．1mL，2次；实验动物于3d、14d后处死，取眼球壁做光镜、电镜检查。结果 光镜、电镜检查NGF治疗组内外节损害较轻、视细胞数较多、外核层较厚、视网膜结构和层次排列较好。NGF治疗组视网膜外核层凋亡细胞计数少于NS模型组。视网膜脱离后14d外核层厚度NGF治疗组厚于NS模型组；NGF治疗组视网膜外核层细胞计数多于NS模型组。结论 结膜下注射NGF对视网膜脱离后视细胞损伤有一定的保护作用。     

用两种PCR方法对HIV-1测定的敏感度对比分析

目的:探讨用Roche公司生产的Combas Amplicor HIV-1病毒载量检测试剂与巢式RT-PCR法检测HIV-1这两种检测方法之间的相关性。方法:将81份HIV-1阳性患者血浆样本首先用Combas Amplicor病毒载量检测试剂盒检测出病毒拷贝数/ml,根据病毒拷贝数对数/ml的多少分为5组。再用巢式RT-PCR法对以上样本进行重复测定,观察以上2种检测方法的相关性。结果:用巢式RT-PCR法对用Combas Ampli-cor病毒载量检测的病毒拷贝数/ml分为2.000~2.999组;3.000~3.999组;4.000~4.999组;5.000~5.999组和>6.000组病毒拷贝数/ml的检测阳性率分别为87.5%(7/8),93.75%(30/32),95.83%(23/24),100%(14/14)和100%(3/3)。结果表明,随着病毒拷贝数/ml的增高巢式法检测的阳性率也相应增高。结论:巢式RT-PCR由于具有操作简单,价格便宜等优点可作为AIDS的初步筛查,指导抗AIDS药物治疗等使用,对于基层而言是一种简便易行的方法。     

嗜水气单胞菌引起外伤性眼内炎一例

嗜水气单胞菌是引起人肠道内和肠道外感染的病原菌之一。偶尔发生的肠道外感染主要为菌血症和伤口感染,引起眼内严重感染的报道极为少见。本文就我院查出的１例该菌引起眼内炎的病例,报告如下。 患儿,男,６岁,左眼被针头扎伤,１天后视力下降且伴眼痛,当地医院按左眼穿通伤给予抗生素治疗,疗效不佳,３天后眼结膜囊内发现黄色脓性物流出,即转入我院。检查:左眼光感阳性,左眼鼻下方结膜缺损,球结膜混合充血( ),角膜透明,后壁KP( ),晶状体混浊,内眼不能窥入,眼压Tn-2。诊断为左眼眼内炎。取结膜囊分泌物做细菌培养,结果分离出１株嗜水气单胞…     

用高效液相法行人眼组织氨基酸含量测定

目的 探讨用高效液相（HPLC）PICO－TAG分析法测定正常成年人眼内玻璃体、晶状体、视网膜和色素膜内17种游离和水解氨基酸含量。方法 将以上组织标本依不同要求分别制成游离或水解组织标本，采用A，B双泵梯度法洗脱，以RonVERSION3．86软件系统对各峰面积分析。结果 该方法对晶状体、视网膜和色素膜各组织内水解氨基酸的分离效果均很好，对玻璃体不论是水解还是游离样本，除对缬氨酸、蛋氨酸和胱氨酸无法将这3种氨基酸分离开，对其他氨基酸的分离效果均不错。结论 首次对我国正常成年人眼内组织17种游离和水解氨基酸做了测定，并提供了一种HPLC眼组织游离和水解氨基酸样本的制备方法。     

人表皮生长因子缓释型滴眼剂对角膜碱烧伤的基因治疗

目的观察人表皮生长因子基因对角膜细胞的转染情况,探讨用人表皮生长因子基因对角膜损伤治疗的可行性。方法利用基因重组技术构建了人表皮生长因子全基因序列,将该基因序列插入 pcDNA3.1真核表达高效穿梭质粒,用脂质体制成人表皮生长因子基因缓释型滴眼剂,滴眼治疗家兔角膜碱烧伤。在治疗后的不同天数,分别测定了角膜组织中人表皮生长因子 mRNA 和 DNA 的表达,用 ELISA 法测定了人表皮生长因子在兔角膜组织中的含量。结果在基因转染后24h 至28天,角膜组织分别用 RT-PCR 和 PCR 均可检测出人表皮生长因子 mRNA 和 DNA 表达。用 ELISA 法测定人表皮生长因子蛋白质表达水平。结果表明,在转染后24h,实验组分别与对照组和空白组平行对比,实验组蛋白质表达水平明显升高(P<0.01),第7天达高峰,为224.286mg/g 角膜湿重,随后逐渐降低,持续可表达20天以上;在转染后24h,免疫组织化学染色在全层角膜细胞内亦可见 hEGF 蛋白质表达,第7天达到高峰,细胞转染率高达98%以上,随后逐渐降低,持续可表达20天以上。结论用 pcDNA3.1真核表达高效穿梭质粒作为载体,携带人表皮生长因子基因用脂质体包裹后制成缓释型滴眼液,以滴眼的方式给药转染角膜,可达到极高的转染率,具有良好的应用前景。     

α_2－巨球蛋白联合氟哌酸治疗金黄色葡萄球菌性角膜溃疡的实验研究

局部应用α２－巨球蛋白（α２Ｍ）和氟哌酸滴眼液对家兔金黄色葡萄球菌（金葡萄）性角膜溃疡进行治疗。治疗前先做了α２Ｍ体外抑菌环实验。结果：α２Ｍ滴眼液体外对金葡菌可产生平均直径为１．２５ｃｍ的抑菌环；用药第５ｄ，α２Ｍ实验组重度角膜混浊眼数少于对照组（Ｐ＜０．０１）；用药的第１、第３和第５ｄ，α２Ｍ实验组角膜培养细菌数较对照组少（Ｐ＜０．０５）。结果提示：α２Ｍ体外对金葡菌具有直接抑制作用。α２Ｍ与氟哌酸联合应用可增强抑菌作用，具有降低金葡菌致病性，减轻组织损伤的功能。     

光和氧的毒性代谢产物引发晶状体脂质过氧化(LPO)的实验研究

白内障是重要的致盲病,约占世界盲人总数的40%,研究白内障的防治,探讨其发病机理具有防盲意义。各型白内障共有的特点:可溶性蛋白减少不溶性蛋白显著增加,晶体混浊时可溶性蛋     

河南沙眼衣原体株的分离

鸡胚是衣原体属的敏感感染系统。近年来,由于各种原因,应用鸡胚成功分离并连续传代的我国沙眼衣原体株未见报告。1984年我们通过改进标本采集方法及传代中延长收获时间的方法从5份活动性沙眼结合膜标本中,用鸡胚卵黄囊分离到3株沙眼衣原体,现报告如下: