白介素-10对肝纤维化大鼠星状细胞表达细胞间黏附分子-1的影响

目的:探讨外源性白介素-10(IL-10)对肝纤维化大鼠星状细胞(HSC)表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响.方法:60只♂性SD大鼠随机分为生理盐水对照组8只(N组)、CCl4组28只(C组)和IL-10干预组24只(Ⅰ组),建立正常对照、CCl4诱导肝纤维化模型及IL-10干预模型.造模第7周和第11周,采用链霉蛋白酶E、Ⅳ型胶原酶经门静脉离体灌流消化,11%Nycodenz密度梯度离心分离HSC.半定量RT-PCR法检测各组HSC的ICAM-1 mRNA表达水平.结果:成功构建纤维化大鼠模型并分离肝星状细胞.造模第7周、第11周新分离的HSC中,N组的ICAM-1不表达,C组与I组均检出ICAM-1表达,C组表达均明显高于Ⅰ组(P＜0.01);造模第11周,Ⅰ组的ICAM-1表达水平较第7周有明显下降(P＜0.01),C组较第7周则明显增多(P＜0.01).结论:ICAM-1随实验性大鼠肝纤维化进展表达升高;IL-10可通过抑制HSC ICAM-1表达,在抗纤维化中发挥作用.     

外源性rIL-10基因质粒静脉注射及其在大鼠体内表达

目的建立大鼠体内质粒DNA尾静脉快速大容量注射法,使外源性rIL-10在肝组织中高表达,为探索肝脏疾病的基因治疗提供动物试验手段。方法以rIL-10为报告基因,将含不同体积及不同质粒浓度的质粒DNA溶液经大鼠尾静脉快速注射,在注射后的不同时间内分别收集血浆及肝、肾、肺、脾和心组织,使用RT-PCR、ELISA和免疫组化法检测rIL-10在体内的表达情况。结果尾静脉快速大容量注射rIL-10DNA溶液可使rIL-10基因在大鼠肝脏有较明显转录及表达。血浆中rIL-10浓度可通过质粒的重复注射使其保持在一个稳态。结论尾静脉快速大容量注射法是一种简单、方便和有效的大鼠体内基因转移及基因表达的方法,为进一步探讨rIL-10基因在肝脏疾病的基因治疗打下基础。     

白细胞介素-10对实验性肝纤维化大鼠Bax/Bcl-2表达的影响

目的探讨白细胞介素-10（IL-10）对实验性肝纤维化大鼠Bax／Bcl-2表达的影响及外源性IL-10对肝纤维化的治疗及可能机制。方法47只SD大鼠随机分为生理盐水对照组（N组，6只）和CCl4组（Z组，41只）。至造模第9周，Z组随机分为模型组（M组，9只），自然恢复组（R组，9只）和IL-10治疗组（T组，9只）；于12周末处死各组动物。免疫组织化学法和RT—PCR法检测各组大鼠肝脏Bax／Bcl-2的表达。结果成功建立肝纤维化模型。T组肝细胞变性及坏死程度较M组减轻；R组肝脏炎症活动度较M组有所缓解，但肝纤维化程度未见明显改善。免疫组织化学提示，Bax主要表达在肝细胞质内，Bcl-2主要表达在汇管区及纤维间隔区。组织蛋白及mRNA表达检测均显示，M组Bax较N组增高（P〈0．01），Bcl-2表达亦显著增高；R组Bax表达较M组降低（P〈0．01），但Bcl-2表达则较M组显著升高；T组Bax／Bcl-2均较R组显著降低。结论肝纤维化过程肝脏Bax／Bcl-2表达增强．外源性IL-10可以减轻CCl4诱导的肝脏纤维化，IL-10抗纤维化作用可能是通过减少肝细胞表达Bax、抑制肌成纤维细胞样细胞表达Bcl-2实现的。     

转化生长因子β1和肿瘤坏死因子α在门静脉高压症发病中的意义

目的　研究转化生长因子 β1 (TGFβ1 )和肿瘤坏死因子 α(TNFα)在门静脉高压症 (门脉高压 )发病中的作用。　方法　应用酶联免疫分析方法对 5 0例门脉高压患者 (其中 2 0例伴腹水形成 )、5 0例正常对照者进行TGFβ1 和 TNFα的检测。　结果　对照组血清 TGFβ1 和 TNFα为 12 .32± 3.2 9ng/ml,94.74± 49.30 pg/ml,门脉高压组分别为 19.2 1± 5 .87ng/ml,140 .85± 5 3.47pg/ml(P<0 .0 5 ) ;门脉高压伴腹水者为 18.44± 5 .89ng/m l,16 7.34± 38.6 2 pg/ml,不伴腹水者为 2 0 .6 8± 6 .73ng/ml,10 1.5 4± 2 8.2 4pg/m l,两者比较 TGFβ1 差异无显著性 ,而有腹水者 TNFα高于无腹水者 (P<0 .0 5 )。　结论　 TGFβ1 和 TNFα水平升高在肝硬化门脉高压发病的病理生理机制中起作用。     

系统性红斑狼疮患者血清sICAM-1和IL-12的变化

目的 探讨活动期和稳定期系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者血清中的可溶性胞间粘连分子－１（ｓＩＣＡＭ－１）和白细胞介素１２（ＩＬ－１２）的变化及其意义。方法 应用ＥＬＩＳＡ法测定１６例活动期、１５例稳定期及２０例健康者血清中要和ＩＬ－１２水平,并与抗－ｄｓＤＮＡ,抗核抗体（ＡＮＡ）,血沉等进行相关分析。结果 与对照组比较,稳定期和活动期口才血清中ＩＬ－１２水平依次降低;ＳＬＥ患者血清中ｓＩＣＡＭ－１水平     

门脉高压症患者生长抑素、血管活性肠肽与心钠素的检测及意义

目的研究生长抑素(SS)、血管活性肠肽(VIP)与心钠素(ANP)在门脉高压症发病中的作用. 方法应用放射免疫学方法对30例门脉高压症患者、30例正常对照者血浆及20份门脉高压性腹水进行SS、VIP与ANP的检测. 结果门脉高压症组血浆SS、VIP与ANP水平分别为61.23±23.85,17.65±4.75及202.95±35.82 pg/ml,正常对照组分别为81.23±41.89,13.33±3.29及97.95±36.57 pg/ml,二者差别有显著性(P<0.05),腹水组分别为164.03±58.41,14.92±3.78及125.43±50.04 pg/ml,腹水SS、ANP高于对照组血浆含量(P<0.05),腹水VIP与对照组血浆含量差异无显著性.门脉高压症伴腹水者血浆SS低于无腹水者,而VIP与ANP水平高于无腹水者(P<0.05). 结论血浆SS、VIP与ANP在肝硬化门脉高压症的病理生理机制中起一定作用.     

门脉高压症患者生长抑素,血管活性肠肽与心钠素的检测？…

目的　研究生长抑素 (SS)、血管活性肠肽 (VIP)与心钠素 (ANP)在门脉高压症发病中的作用。　方法　应用放射免疫学方法对 30例门脉高压症患者、30例正常对照者血浆及 2 0份门脉高压性腹水进行 SS、VIP与ANP的检测。　结果　门脉高压症组血浆 SS、VIP与 ANP水平分别为 6 1.2 3± 2 3.85 ,17.6 5± 4.75及 2 0 2 .95±35 .82 pg/ ml,正常对照组分别为 81.2 3± 41.89,13.33± 3.2 9及 97.95± 36 .5 7pg/ ml,二者差别有显著性 (P <0 .0 5 ) ,腹水组分别为 16 4.0 3± 5 8.41,14.92± 3.78及 12 5 .43± 5 0 .0 4pg/ ml,腹水 SS、ANP高于对照组血浆含量(P<0 .0 5 ) ,腹水 VIP与对照组血浆含量差异无显著性。门脉高压症伴腹水者血浆 SS低于无腹水者 ,而 VIP与ANP水平高于无腹水者 (P<0 .0 5 )。　结论　血浆 SS、VIP与 ANP在肝硬化门脉高压症的病理生理机制中起一定作用。     

门脉高压患者降钙素基因相关肽、神经肽y与醛固酮检测及意义

目的研究降钙素基因相关肽(CGRP)、神经肽y(NPY)与醛固酮(ALD)在门脉高压症发病中的作用.方法应用放射免疫学方法对30例门脉高压症患者、30名正常对照者的血浆以及20例门脉高压症患者的腹水进行CGRP、NPY与ALD的检测.结果门脉高压症组患者血浆CGRP、NPY与ALD水平分别为125.95±35.43pg/ml、88.49±52.51pg/ml及868.5±459.6pg/ml,正常对照组分别为69.14±23.29pg/ml、151.54±38.51pg/ml及306.4±124.3pg/ml,两组差别有显著意义(P＜0.05),腹水组分别为81.83±38.55pg/ml、61.47±28.35pg/ml及216.7±186.1pg/ml.腹水CGRP与正常对照组相比差异无显著意义,腹水NPY与ALD含量低于正常对照组(P＜0.05).其中有腹水者NPY低于无腹水者,而CGRP与ALD水平高于无腹水者(P＜0.05).结论血浆CGRP、NPY与ALD均在肝硬变门脉高压发病的病理生理机制中起作用.     

靶向乙型肝炎病毒X蛋白小干扰RNA对稳定表达X基因的正常人肝细胞株线粒体功能的影响

目的 构建并鉴定靶向HBV X蛋白(HBx)小干扰RNA(siRNA)重组表达质粒,观察其对稳定表达HBx基因的正常人肝细胞株HL-7702/HBx线粒体功能的影响.方法 设计合成两条针对全长HBx基因具有短发夹结构的siRNA序列,克隆至载体psiRNA-Hh1GFPzeo中,构建重组表达质粒pX1和pX2,并以不针对任何序列的重组质粒pScr作为对照.通过脂质体介导转染人HL-7702/HBx肝细胞株,RT-PCR及Western印迹检测其对HBx的阻抑效应.流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位(△ m)水平的变化.采用方差分析对实验结果进行统计分析.结果酶切鉴定和测序结果证实pX1和pX2构建成功.pScr、pX1、pX2分别转染入HL-7702/HBx细胞48 h后,空白对照组HBx mRNA和蛋白表达水平分别为0.65±0.12和0.62±0.09,pX1组分别为0.33±0.10和0.19±0.08,明显低于空白对照组(t=4.73,P<0.05;t=7.53,P<0.05),pX2组分别为0.48±0.10和0.37±0.11,亦明显低于空白对照组(t=2.39,P<0.05;t=4.43,P<0.05),但pX1组抑制效果强于pX2组(t=2.28,P<0.05).RNA干扰后细胞内ROD水平为5.00±0.38,△ m水平为33.86±0.50;空白对照组ROS为72.10±0.55,△ m为3.57±0.26(t=276.22,P<0.05;t=107.15,P<0.05).结论 靶向HBx的siRNA能特异性抑制HBx在HL-7702/HBx细胞中的表达,并降低细胞内ROS水平,提高△ m水平,减轻细胞内氧化应激反应.