线粒体Prohibitin蛋白在紫杉醇耐药的CCRF-CEM细胞中表达的变化

目的：研究线粒体prohibitin蛋白在紫杉醇耐药的CCRF—CEM细胞中的表达变化，探讨线粒体prohibitin蛋白在CCRF—CEM肿瘤细胞耐药发生机制中的作用。方法：提取紫杉醇耐药的CCRF—CEM／taxol细胞的线粒体总蛋白，对经双向电泳分离后得到的SDS—PAGE胶用ImageMaster^TM 2D Platinum software进行分析、比对。对胶上的蛋白点进行质谱分析，通过SWISS—PROT和NCBInr数据库鉴定蛋白的归属。结果：紫杉醇耐药的CCRF—CEM／taxol细胞中的线粒体pmhibitin Protein15表达升高了68．6％（以蛋白表达的体积计）。结论：紫杉醇耐药的CCRF—CEM／taxoI细胞中线粒体prohibitin表达增加。prohibitin可能通过调节线粒体的活动，对抗紫杉醇诱导的细胞凋亡，在耐药机制中发挥重要作用。     

β-石竹烯醇抑制哮喘豚鼠气道炎症及清除氧自由基作用

建立卵白蛋白（OA）致敏的特异性哮喘豚鼠模型，观察β-石竹烯醇对特异性哮喘豚鼠引喘潜伏期、支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞分类计数、支气管形态病理学改变以及血清和肺组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）水平的影响。结果表明，β-石竹烯醇灌胃给药，可显著延长特异性哮喘豚鼠引喘潜伏期，减少BALF中各细胞组分，减轻支气管炎症性病理改变；提高哮喘豚鼠血清和肺组织SOD活性、降低MDA水平。抑制气道炎症和清除氧自由基（OFR）可能是β-石竹烯醇平喘作用的机制之一。     

Duchenne型肌营养不良症药物筛选模型的构建

建立一种能方便检测utrophin表达的方法，制备筛选Duchenne肌营养不良症治疗药物的细胞模型。将Utrophin基因上18号和19号外显子及其周围约6．7kb的DNA，分三段克隆下来，并将TETC报告基因插入插入片段I（其中的18号外显子）中，构建打靶基因。经过电转化的方法，将测序正确的打靶基因转染到C2C12细胞株中。经G418筛选，FlAsH荧光染色，PCR扩增鉴定得到正确同源重组的细胞株。为筛选utrophin表达促进剂建立了细胞模型，为筛选DMD治疗药物打下基础。     

西红花酸含量的高效液相色谱法测定

目的:建立西红花酸含量的高效液相色谱法测定。方法:色谱柱为C_(18)柱(4.6mm×200mm,5μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(75:24.5:0.5),流速为1.0 mL·min~(-1),柱温为30℃,检测波长为423nm,进样量为20μL。结果:该方法的线性范围为0.26～1.29μg(r=0.999 8)。平均回收率分别为98.18％,99.52％,101.4％;RSD分别为1.3％,1.8％,2.1％(n=5)。结论:本方法快速、可靠、简单、灵敏度高。     

人参愈伤组织的药理活性研究——与栽培人参的比较

人参愈伤组织水浸液给小鼠腹腔注射,从几方面观察其药理作用——镇静、抗疲劳、抗高温以及对心血管方面的影响,并同栽培人参作了活性比较。结果表明:1.人参愈伤组织对小鼠自发活动有非常明显的抑制作用,而且较栽培人参抑制作用强,两药均有相似的协同戊巴比妥钠的中枢抑制作用;2.两药均能显著地降低氧耗量,延长小鼠耐缺氧时间及具有相似的抗疲劳作用;3.两药均具有心脏抑制和血管收缩作用;4.人参愈伤组织抗高温作用较栽培人参弱。总之,人参愈伤组织与栽培人参药理活性基本相似,但在某些方面,作用略有强弱之别。     

抗高血压药物的评价与研究进展

高血压是最常见的心血管疾病之一，也是导致充血性心力衰竭、脑卒中、冠心病、肾功能衰竭、主动脉瘤的发病率和病死率升高的主要危险因素。     

西红花苷对3β,5α,6β-三羟胆甾烷致内皮细胞凋亡和相关基因表达的影响

目的:研究西红花苷(crocin)对3β,5α,6β-三羟胆甾烷(cholestane-3β,5α,6β-triol,Triol)致血管内皮细胞凋亡和相关基因表达的影响.方法:将内皮细胞分成正常对照组、模型组(25 μmol/L Triol)、西红花苷 (10-6 mol/L,10-7mol/L,10-8mol/L) 25 μmol/L Triol组.采用诱导内皮细胞凋亡的模型,用比色法测定丙二醛含量.光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态和超微结构的变化,电泳法检测DNA 梯形条带、流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Bcl-2和Bax mRNA表达,免疫细胞化学方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达.结果:用Triol处理后,培养液中MDA含量增加(P<0.01 vs control),细胞收缩,核浓缩,深染,线粒体肿胀空化,出现凋亡小体、DNA 梯形条带和亚二倍体峰,细胞凋亡率为30.62%,Bax mRNA、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达明显高于正常对照组(P<0.01);Bcl-2 mRNA和蛋白表达低于正常对照组(P<0.01);西红花苷(10-7mol/L、10-6mol/L) Triol组,MDA含量减少,内皮细胞形态结构完整,细胞凋亡率分别为24.4%、6.3%,细胞Bax和Caspase-3基因表达明显下调,Bcl-2基因表达上调(P<0.05 or P<0.01 vs Triol).结论:西红花苷可能是通过调节Bcl-2,Bax 和Caspase-3基因表达抑制Triol诱导的内皮细胞凋亡.     

固态发酵产纳豆激酶的工艺优化

目的研究纳豆菌的固体发酵。方法采用单因素和正交试验 ,对以豆渣为原料纳豆菌固体发酵生产纳豆激酶的工艺条件进行了优化。结果固体发酵最佳条件为培养基配比豆渣∶麸皮 =5∶2 ,初始含水量 6 5 % (w) ,接种量 10 % (φ) ,初始pH 8 0 ,培养温度 35℃ ;采用最适培养基和优化工艺 ,在 2 5 0mL三角瓶中进行验证实验 ,纳豆激酶的酶活可达到 15 77U·g-1。结论以豆渣为原料固体发酵产纳豆激酶是可行的     

青蒿素和青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制作用比较研究

目的 对比研究青蒿素及其衍生物青蒿琥酯对人乳腺癌MCF—7细胞增殖的影响并探讨其作用机制。方法 采用体外培养的人乳腺癌MCF—7细胞株，利用SRB法测定青蒿素和青蒿琥酯对MCF—7细胞增殖的影响，FCM法测定细胞周期的变化，亚Gl期含量测定和DAN荧光染色法观察细胞凋亡。结果 10μmol/L青蒿素和lμmol/L青蒿琥酯能明显改变MCF—7细胞的细胞周期，使S期细胞显著减少，G0 Gl期细胞明显增加。青蒿素对MCF—7细胞增殖仅有微弱抑制作用，但其衍生物青蒿琥iB却有显著的抑制作用，IC50为0．3lμmol/L。同样，lμmol/L青蒿琥酷引起MCF—7细胞的凋亡和直接的细胞毒作用明显强于10μmol/L青蒿素的作用。结论 体外研究表明，对肿瘤细胞增殖的抑制青蒿琥酯比青蒿素作用强。     

西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化的抑制作用

目的研究西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化的影响。方法以牛血清白蛋白(BSA)质量浓度、葡萄糖质量浓度及温孵时间为3因素,采用3因素4水平正交设计,通过方差分析寻找体外非酶糖基化的最适反应体系,以此最适体系观察西红花酸对非酶糖基化的影响。结果糖基化蛋白产量与BSA质量浓度、葡萄糖质量浓度、温孵时间呈正相关;方差分析结果提示,5 g/L BSA、4.5 m g/mL葡萄糖及14 d的温孵时间为蛋白质体外非酶糖基化的最佳条件;荧光值测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE s)均表明西红花酸对体外蛋白质非酶糖基化具有显著的抑制作用。结论西红花酸对体外蛋白质的非酶糖基化具有明显的抑制作用;这可能是西红花酸具有广泛的心血管药理活性及改善胰岛素抵抗的重要机制之一。