肿瘤相关抗原OVA66单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备和鉴定人卵巢癌cDNA文库筛选到的肿瘤相关抗原OVA66的单克隆抗体,为研究其生物学功能提供手段。方法：采用基因重组方法构建pET32bOVA66重组表达质粒,经大肠杆菌诱导表达OVA66融合蛋白,利用NiTED亲和层析技术分离纯化HisOVA66融合蛋白;采用经典的杂交瘤技术制备OVA66单克隆抗体;ELISA和Western blotting鉴定单克隆抗体的生物学和免疫学特性,并对OVA66单克隆抗体在细胞免疫荧光法、流式细胞术和免疫组化等方法中进行了初步应用。结果：成功构建重组表达载体pET32bOVA66,并诱导表达和纯化OVA66融合蛋白。制备获得两株小鼠OVA66单克隆抗体杂交廇细胞株5F4和4G9。两株细胞分泌的抗体亚类均为IgG1,轻链为κ型,亲和力常数Ka分别为2.96×1010和0.4×1010L/mol,初步表位分析结果显示两者针对不同的抗原表位;两株抗体均可以采用细胞免疫荧光和流式细胞术检测OVA66的表达,5F4还可通过免疫组织化学检测肿瘤组织中OVA66的表达。结论：成功制备两株特异性的小鼠OVA66单克隆抗体杂交瘤细胞株,为进一步研究OVA66的生物学特性和临床应用奠定了基础。     

C225单用及与DDP联用对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的: 探讨C225单用及与DDP联用对人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用的机制.方法: 将40只人宫颈癌HeLa细胞株的裸鼠移植瘤模型随机分为对照组、C225组、DDP组和C225+DDP组,每组各10只.各组裸鼠分别经腹腔注射质量分数为0.9%的氯化钠溶液、C225(1 mg·只-1·次-1)、DDP(5 mg·kg-1·次-1)和C225+DDP,每周2次,共4周.实验结束时,将移植瘤完整取出,测量瘤体体积,计算抑瘤率;镜检移植瘤组织和细胞形态变化,应用免疫组织化学技术检测2药单用及联用后对p27Kip1、cyclin D1在宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤组织中表达的影响.结果: C225组、DDP组和C225+DDP组的体积抑瘤率分别为37.14%、46.96%和69.32%;镜下可见对照组的癌细胞生长旺盛,异型性高,而各治疗组的肿瘤细胞不同程度减少,间质增加,DDP组与C225+DDP组可见瘤组织大量坏死,联用组尤甚.免疫组织化学结果显示,p27Kip1的表达率在C225组与C225+DDP组较对照组显著提高(P<0.01,P<0.05),DDP组与对照组结果一致.cyclin D1的表达率经C225单用及与DDP联用后较对照组显著降低(P<0.05,P<0.01),而DDP组与对照组间差异无统计学意义(P0.05).结论: C225可能通过上调p27Kip1水平,并抑制cyclin D1表达来影响宫颈癌裸鼠移植瘤的生长;C225和DDP联合用药的抑瘤率高于单一用药,可能和C225能提高DDP的敏感性有关.     

子宫内膜异位症患者γδ＋T细胞及NK细胞的功能分析

目的 分析子宫内膜异位症患者γδ＋T细胞和天然杀作细胞（NK）功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ＋T细胞细胞和自然杀伤细胞（NK）功能的影响。方法 采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中γδ＋T细胞细胞及NK细胞的表型与功能。结果 子宫内膜异位症（疾病组）患者外周血、腹腔液中CD56^ 细胞与正常对照组相比较无明显差异,而疾病组腹腔液中的γδ＋T细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组。疾病组的腹腔液对正常人外周血γδ＋T细胞及NK细胞的功能具有负调节作用。结论 子宫内膜异位症患者的γδ＋T细胞及NK细胞的功能低下,处于被抑制状态,提示患者的腹腔液中,可能在γδ＋T细胞细胞及NK细胞的功能抑制因子。     

肿瘤细胞HLA分子的表达及IFN—γ的调控作用

目的 研究肿瘤细胞表达HLA分子及IFN－γ的调控作用。检测TIL细胞中T细胞亚群的变化,并与PBMC比较。方法 采用FACS检测细胞表达的CD抗原,采用ABC免疫组化染色检测肿瘤细胞HLA－Ⅰ,Ⅱ类分子的表达。以IFN－γ诱导建系的卵巢癌细胞表达HLA分子。结果 明细胞癌患者TIL细胞中的T细胞明显多于大肠癌患者。肿瘤患者PBMC中的T细胞数少于正常对照;肿瘤组织HLA－Ⅰ类抗原的表达明显低于正常组织,HLA－Ⅱ类抗原泊表达高于正常组织。与正常组织相比较,大肠癌患者比肾细胞癌患者HLAⅠ类抗原的表达更低。IFN－γ可诱导建系卵巢癌细胞表达HLA－Ⅰ类抗原,但不能诱导HLA－Ⅱ类抗原的表达。结论 肿瘤组织HLA表达的变化与肿瘤组织中TIL的数有关;IFN－γ能选择性地诱导卵巢癌细胞表达HLA－Ⅰ类分子,在抗肿瘤免疫中具有重要的意义。     

MHC-I类分子在诱导异体肾癌特异性 CTL中的作用

目的探讨MHC-I类分子匹配的异体人肾癌细胞诱导肾癌细胞特异性CTL的作用。方法用经照射的HLA-I类分子匹配的异体人肾癌细胞作为刺激细胞,诱导外周血CTL,并分析其表型及杀伤效应。结果11例肾癌患者外周血淋巴细胞经HLA匹配的肾癌细胞刺激后,诱导的CTL细胞主要以TCRαβ＋、CD8＋为主,具有明显的杀伤效应。结论用MHC-I类分子匹配的异体肾癌细胞可诱导肿瘤特异性、并具有明显杀伤活性的的CTL。     

三苯氧胺对肿瘤细胞的体外逆转耐药作用

目的　探讨三苯氧胺 (tamoxifen ,TAM)逆转肿瘤细胞耐药性的可行性。　方法　以TAM联合化疗药物盐酸长春新碱 (VCR) ,羟基喜树碱 (HCPT)治疗人耐药肿瘤细胞KBv2 0 0 ,用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT) ,流式细胞仪PI染色法 ,荧光显微镜HT染色法对KBv2 0 0细胞行抑制率和凋亡率检测。　结果　单独应用 10 μg/ml的TAM无明显抑制肿瘤细胞的作用 ,而TAM联合化疗药物VCR、HCPT后 ,其抑制率及凋亡率均明显增加 (t =5 6 6 3,P <0 0 1;t =2 919,P <0 0 1)。　结论TAM能有效逆转肿瘤细胞KBv2 0 0对VCR ,HCPT的化疗敏感性     

14C放射酶分析西那普利药动学及生物利用度

目的研究抑平舒(国产)与西那普利药动学及生物等效性。方法14名志愿者分别单剂量口服2.5mg抑平舒与西那普利,采用以14C-HL为ACE底物的放射酶分析法测定血药对ACE的抑制率及两者的药动学参数,并以AUC0→∞与Cmax/AU0→∞为指标,用t检验法分析两种制剂的生物等效性。结果两者的药-时曲线可用二室模型拟合,两者的Cmax(ng·ml-1)分别为82.4与83.5;tmax(h)分别为2.3与2.3;AUc0→∞(ng·ml1·h)分别为1759.0与2162.9;1max(％)分别为97.11与97.49。两者AU0→∞与Cmax/AUC0→∞无显著性差异(P＞0.05)。结论抑平舒与西那普利为生物等效制剂,抑平舒的相对生物利用度为81.3％。     

系统性红斑狼疮患者外周血γδT细胞受体V区基因取用的初步研究

目的 探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者外周血中γδＴ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖ区基因限制性取用。方法 应用ＰＣＲ特异性扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＤＩＧ杂交等方法检测在ＳＬＥ患者的正常人外周血中ＴＣＲγ链、δ链Ｖ区基因的表达。结果 与正常对照相比,发现ＳＬＥ患者在Ｖγ基因、Ｖδ基因均表现出限制性取用在７例ＳＬＥ患者中均未检测到ＶγⅡ、Ｖδ４、Ｖδ６。结论 提示ＳＬＥ患者ＴＣＲγδ链基因组的变可能造成     

转导CⅡTA基因的肿瘤细胞克隆及生物学特性的研究

目的 研究转导ＣⅡＴＡ基因肿瘤细胞的生物学特性改变。 方法 以ＲＴ－ＰＣＲ和流式细胞术分别检测克隆转导ＣⅡＴＡ基因的肿瘤细胞中ＣⅡＴＡ基因的表达。在光镜和电镜下观察细胞形态和结构变化。结果 转导ＣⅡＴＡ基因后,肿瘤细胞中ＣⅡＴＡ基因得以有效表达,肿瘤细胞形态和细胞内的超微结构发生改变,细胞生长受限,ＩＦＮ－γ可诱导转导ＣⅡＴＡ基因的肿瘤细胞死亡。 结论 转导ＣⅡＴＡ基因能改变肿瘤细胞的生物学特性,     

MHC—Ⅰ类分子在肿瘤浸润性淋巴细胞识别人黑色素瘤细胞中的…

应用人白细胞抗原－Ａ２阳笥黑色素瘤病人的瘤块中分离得到的肿瘤浸润性淋巴细胞，进行ＨＬＡ－Ａ２限制性ＴＩＬ抗人黑色素瘤细胞作用的研究。在实验中发现，ＴＩＬ对自身和同种本的ＨＬＡ－Ａ＾＋２黑色素瘤细胞具有杀伤作用，而对ＨＬＡ－Ａ＾－２黑色素瘤细胞及ＨＬＡ－Ａ＾＋２非黑色素瘤细胞无作用。