P-糖蛋白的融合表达研究

目的：对P－糖蛋白胞外段基因进行表达研究。方法：根据P－糖蛋白抗原性分布曲线及mdrl基因结构，设计了一对引物，PCR扩增产物插入到pGEM-T中，经测序正确后，再克隆入表达载体pGEX-2T，构建高效表达载体pGEX-Pgp，转化大肠杆菌DH5α，进行表达、鉴定及纯化。结果：经IPTG诱导4h，蛋白表达即达高峰，SDS－PAGE分析，表达出约30kD大小的蛋白。结论：该基因片段的高效表达为进一步制备其抗体或筛选其特异性结合肽，进行靶向治疗等工作奠定了基础。     

肝细胞生长因子缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化

目的 研究肝细胞生长因子(HGF)缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化的机制。方法 18只Wistar大鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻组和HGF治疗组。rhHGF(500μg-1．kg-1．d^-1)大鼠皮下注射21d后，采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1 mRNA表达水平；Western杂交检测α-SMA蛋白的表达；底物酶谱法检测MMP2、9的活性；判断纤维化程度通过测定肾组织羟脯氨酸含量。结果 HGF能明显降低梗阻肾TGF-β1 mRNA和α-SMA蛋白表达，增加MMP2、9的活性，降低肾组织羟脯氨酸的含量。结论 HGF能有效缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化，有望成为临床治疗梗阻性肾病的方法之一.     

处理骨盆骨折合并的后尿道损伤的经验

处理骨盆骨折合并的后尿道损伤,目前仍有争议。一般认为,后尿道损伤的处理原则是:恢复尿道的连续性,引流血肿和尿外渗,膀胱内尿液引流良好等。实现这些原则,问题很多:1、如何早期处理病人可能存在的多处致命伤。2、即使致命伤被控制,允许探查损伤的尿道,但因局部出血、骨折、组织裂损以及术中无法接近尿道的损伤处,致使损伤的尿道难以得到解剖定位。另外手术还可能使不完全性的尿道损     

核酶对mdr1 mRNA的体外切割

应用计算机对ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ二级结构进行模拟，设计针对ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ１９５９位ＧＵＣ的锤头状核酶（ＲＺ１）基因，定点克隆于质粒ｐＧＥＭＥＸ－１的ＢａｍＨ Ｉ和ＥｃｏＲ Ｉ位点上；将ｍｄｒ１ ｃＤＮＡ８６４ｂｐ的片段亚克隆于ｐＧＥＭＥＸ－１的ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲ Ⅰ位点上，在Ｔ３启动子作用下体外转录成ＲＺ１和８６４ｎｔ的ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ，ＲＺ１在体外将８６４ｎｔ的ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ切割成两个     

膀胱镜检查的并发症及其防治

膀胱镜检查是诊断和治疗泌尿外科疾病的一项重要方法。本文将我科十余年来施行此项检查700人次(561例)所遇到的几种重要的并发症加以讨论,仅供同道们参考。     

肾损伤83例诊断与治疗的经验

24年收治肾损伤83例。内服血尿占72．8％，肾实质伤严重者血尿明显且持续时间长。本组肾损伤分为挫伤（65．1％），裂伤（28．g％），碎裂伤（4．8％）和肾蒂伤（1．2％）；非手术治疗74例（89．2％），手术治疗9例（10．8%），其中肾切除5例（6．0%），强调X线检查对诊断和治疗的重要性。对手术治疗应采取慎重态度，尽可能使肾手术率和肾切除率有一明显的下降，以保存更多有功能的肾组织。     

抗APO-1单抗诱导人膀胱癌多药耐药细胞凋亡的研究

目的：研究巨噬细胞游抑制因子（ＭＩＦ）基因修饰的瘤苗诱导抗肿瘤免疫反应的机理。方法：ＭＩＦ基因修饰的ＦＢＬ３瘤苗小鼠免疫后,观察腹腔巨噬细胞数量和功能的变化。结果：ＭＩＦ基因修饰的瘤苗免疫后,小鼠腹腔巨噬细胞的数量,表面免疫相关分子的表达,以及ＴＮＦ－α和ＮＯ的分泌水平增高,吞哓功能、杀知性和抗原提呈功能增强。结论：ＭＩＦ基因修饰的瘤苗体内免疫后,其分泌的ＭＩＦ显著增强了巨噬细胞的功能,被活化的巨     

逆转录病毒转染法建立耐药性人膀胱癌细胞系

目的 建立高效、稳定的人膀胱癌多药耐药性细胞模型。方法 应用逆转录病毒转染法建立人膀胱癌耐药性细胞模型;ＭＴＴ法检测细胞系在不同化疗药物作用下的生存率。免疫组化检测肿瘤的Ｐ－ＧＰ表达,原位杂交检测肿瘤细胞ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ的表达量,ＰＣＲ检测ｍｄｒ１基因转移至细胞基因组片段。结果 转基因细胞系对阿霉素、秋水仙素的耐药性分别提高８倍和２１倍,免疫组化示转基因细胞系Ｐ－ＧＰ表达量增强,原位杂交结果示肿     

转基因方法建立多药耐药细胞系

目的建立多药耐药细胞系。方法将带有ｍｄｒ１ｃＤＮＡ全序列的逆转录病毒载体ｐＨａＭＤＲ通过脂质体直接导入到敏感的人膀胱癌细胞系ＢＩＵ８７细胞中。结果经６０～１００ｎｇ／ｍｌ秋水仙素筛选２１天后,克隆出高强度ＭＤＲ表型的耐药细胞系,基因组ＤＮＡＰＣＲ扩增表明ｍｄｒ１ｃＤＮＡ已掺入到ＢＩＵ８７细胞基因组中。结论应用转基因方法可建立多药耐药细胞系,该细胞系具有耐药强度高,耐药性稳定等特点。     

胰腺十二指肠肾脏一期联合移植一例

我院于１９９８年１２月１５日为１例Ⅰ型糖尿病伴肾功能衰竭尿毒症患者施行了胰腺十二指肠肾脏一期联合移植手术,报告如下。一、病例报告患者,女,５１岁。多食、多饮、多尿伴进行性消瘦１８年,长期使用胰岛素及其它降糖药物,血糖仍波动于１３～１９ｍｍｏｌ／Ｌ之间,尿糖＋＋＋＋,Ｃ肽测定：空腹３．２μｇ／Ｌ,餐后半小时３．３μｇ／Ｌ,餐后１小时３．５μｇ／Ｌ,餐后２小时４．５μｇ／Ｌ,餐后３小时３．８μｇ／Ｌ。６年前出现尿量减少及视物模糊,近两年来视力明显下降,并出现尿少及双下肢浮肿,血尿素氮２６．３ｍｍｏｌ…