尼群地平衍生物Ⅵ对蟾蜍离体心脏活动的影响

目的 :对比观察尼群地平衍生物Ⅵ (NITDⅥ )及尼群地平 (NIT)对蟾蜍离体心脏活动的影响。方法 :取蟾蜍 40只 ,采用离体蛙心灌流实验方法 ,分别观察NITDⅥ及NIT对心肌收缩力和自律性的作用。结果 :NITDⅥ 3× 1 0 - 8mol·L- 1 ～ 3× 1 0 - 5mol·L- 1 可明显抑制蟾蜍离体心脏的收缩力 (P <0 .0 1 ) ,并表现有剂量依赖性 ;NITDⅥ 3× 1 0 - 5mol·L- 1 可同时降低自律性 (P <0 .0 5) ;NIT 3× 1 0 - 9mol·L- 1 ～ 3× 1 0 - 5mol·L- 1 可显著抑制蟾蜍离体心脏的收缩力 ,从 3× 1 0 - 8mol·L- 1 开始明显抑制自律性。结论 :NITDⅥ与NIT对心肌收缩力及自律性均表现有抑制效应 ,但NITDⅥ的抑制作用弱于NIT。     

云南省脑炎患者脑脊液中检测到基因Ⅰ和Ⅲ型流行性乙型脑炎病毒

目的调查云南省流行性乙型脑炎(乙脑)患者感染乙脑病毒(JEV)基因型状况。方法在云南省西双版纳州医院和大理州医院采集脑炎患者急性期血清标本20份和脑脊液标本11份,用RT-PCR法检测JEV核酸,阳性者进行JEV-PreM/C区基因序列测定,用核苷酸同源性和系统进化分析进行基因型鉴定。结果用RT-PCR法从11例脑炎患者脑脊液标本中检测到JEV核酸阳性3份(JB114、JB135和DLN24),而20例脑炎患者血清标本均为阴性。3株病毒的PreM/C区核苷酸序列同源性分析显示,JB114、JB135与JEV基因Ⅰ型代表株同源性高达98.3%和99.2%,而与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型仅为82.5%~84.6%;DLN24与基因Ⅲ型代表株同源性为94.6%,而与基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型分别为85.0%、82.5%和80.4%。进化树分析显示,JB114和JB135位于基因Ⅰ型分支中,DLN24位于基因Ⅲ型分支上。结果表明,来自西双版纳的JB114和JB135病毒株属于基因Ⅰ型,来自大理的DLN24病毒株为基因Ⅲ型。结论云南省乙脑患者中分别存在基因Ⅰ型和Ⅲ型JEV感染的病例,表明云南省存在这两个基因型病毒的共同流行。     

鼻咽癌动态增强MRI参数与临床病理特征的关系

目的 探讨鼻咽癌动态增强MRI（DCE-MRI）相关参数与其临床病理特征之间的关系。方法 对102例经病理确诊的鼻咽癌初诊患者行DCE-MRI,获取ROI的DCE-MRI参数,观察其曲线特征,并分析DCE-MRI相关参数与临床病理特征的关系。结果 不同性别、年龄鼻咽癌患者的曲线最大上升斜率（MS）差异无统计学意义（P均>0.05）,而不同T分期、N分期及临床分期MS差异有统计意义（P均<0.05）;达峰时间（TTP）、曲线下面积（AUC）差异均无统计学意义（P均>0.05）。结论 鼻咽癌DCE-MRI相关参数与病变进展密切相关;DCE-MRI技术对辅助诊断鼻咽癌及准确分期有一定价值。     

用肾皮质区ROI计算GFR评价尿路梗阻患者肾功能

目的探讨设定不同肾感兴趣区（ROI）计算肾小球滤过率（GFR）评价尿路梗阻患者肾功能改变的临床价值。方法采用^99Tc^m-DTPA肾动态显像，应用Gates法计算30例不同程度单侧上尿路梗阻患者在设定全肾ROI及肾皮质ROI时各自的GFR值，并与同期检测的患肾尿微量白蛋白（MAlb）进行相关性分析。结果随积水程度加深，由2种ROI计算的GFR均下降；设定全肾ROI时，重度与轻及中度积水组相比GFR显著降低（P〈0．01）；设定肾皮质ROI时，各组GFR组间差异均显著（P〈0．01）；随积水程度加重，各组尿MAlb显著升高（P〈0．01）；设定肾皮质ROI时，各组GFR与MAlb均显著相关。结论由肾皮质ROI计算GFR值可更灵敏、更准确地发现尿路梗阻肾功能改变。     

心肌灌注显像和多普勒超声对冠心病检查的比较

1．1 对象：临床症状典型和非典型冠心病患者118例，其中男72例，女46例，年龄22-77岁。患者到我院心内科就诊，临床表现为胸痛或心律不齐等，症状典型的患者为37例．不典型的81例，对患者进行SPECT心肌灌注显像和彩色多普勒超声心动图检查。     

A组轮状病毒结构蛋白基因在马铃薯细胞中的初步表达

目的 在马铃薯细胞中表达轮状病毒结构蛋白。方法采用RT-PCR扩增截短VP4蛋白基因，克隆于植物表达载体paBI221，再双酶切pBI221，将带有CaMV35S启动子、外源基因及终止子的片段转入pSB11，通过三亲杂交方法，制备农杆菌转化载体pSB111-VP4，并对pSB111-VP4作点杂交检测，筛选鉴定重组子，对马铃薯组织细胞进行转化。结果转化细胞经Western印迹检测其免疫活性，具有良好的抗原性。结论为研制轮状病毒重组疫苗、亚单组疫苗、转基因植物口服疫苗做了前期准备。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体的构建表达与初步鉴定

目的构建和表达日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体,初步鉴定表达产物的活性。方法用overlap PCR法扩增双链抗体基因VH-GGGGS—VL将双链抗体基因重组入原核表达载体pBAD／gⅢ。表达质粒转化E．coli TOP10F’,左旋阿拉伯糖诱导表达。对表达产物进行分离纯化,ELISA检测纯化蛋白与血吸虫病人血清抗体的结合活性。结果测序证实双链抗体基因正确,构建了双链抗体的原核表达系统,双链抗体在细菌超声上清和沉淀内均有表达,分子量约为34kD。纯化产物经ELISA鉴定,结果表明NP30单特异性双链抗体可与血吸虫病人血清抗体特异性结合。结论构建和表达的日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体具有与亲本单抗相同的结合活性。     

全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定

目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性?方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库?以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性?结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0 × 107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv?经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体?经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg?结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础?     

抗炭疽毒素保护性抗原单克隆抗体的制备及功能分析

目的:原核表达炭疽杆菌保护性抗原PA10蛋白,制备单克隆抗体,并进行功能分析?方法:人工合成炭疽杆菌保护性抗原PA10编码基因并克隆入pUC57载体,酶切鉴定后,将PA10编码基因插入原核表达载体pColdⅡ中,测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG和低温条件下诱导蛋白表达,SDS-PAGE验证产物;用HiTrap IMAC HP柱纯化重组蛋白,Western blot进一步验证?以纯化获得PA10重组蛋白为抗原,常规程序免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并检测所制备抗体的中和活性?结果:获得的PA10重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,最终获得了4株特异性的单克隆抗体(分别命名为2G8?5A8?7B3? 9C9)?经体外炭疽毒素保护试验证实,其中1株单抗(7B3)具有较强的中和活性,其保护率可高达96%?结论:本文成功构建并表达炭疽杆菌保护性抗原PA10,制备了具有中和活性的抗PA单克隆抗体,为构建人源化的抗PA中和抗体奠定基础,从而有望用于炭疽病的治疗?