稳定高表达RORα基因的人胃癌MGC803细胞系的构建与鉴定

目的 构建维甲酸相关孤核受体α(RORα)基因的真核表达载体,并建立稳定高表达RORα的人胃癌MGC803细胞,为研究RORα的功能奠定基础。方法根据RORα基因的cDNA全序列,设计一对带有限制性酶切位点的引物。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成RORα cDNA第一链,并用上述引物扩增目的基因全序列,然后经双酶切插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),转化大肠杆菌DH5α;用氨苄青霉素筛选pcDNA3.1(+)-RORα的阳性菌株,双酶切和测序进行鉴定。用经鉴定的重组质粒pcDNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞,G418筛选获得RORα/MGC803细胞株;Real-time PCR和Western blot检测该细胞株RORα的表达情况。结果经双酶切鉴定,构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα包含有大约1 640 bp的插入片段,与预期大小一致;表达载体经测序鉴定,其插入片段碱基序列与RORα基因的cDNA序列完全一致。用构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞后,筛选到可稳定传代的RORα/MGC803细胞株。Real-time PCR与Western blot检测显示,RORα/MGC803细胞RORα mRNA和蛋白表达增高。结论成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα和建立高表达RORα基因的RORα/MGC803细胞。     

二烯丙基二硫对人胶质瘤U251细胞增殖及RORα表达的影响

目的探讨二烯丙基二硫（diallyl disulfide,DADS）对人胶质瘤U251细胞增殖及维甲酸相关孤核受体α（RORα）蛋白表达的影响。方法采用MTT比色实验、群体倍增时间分析DADS对人胶质瘤U251细胞的生长抑制效应;Western blot技术分析RORα蛋白在DADS处理U251细胞前后的表达改变。结果DADS浓度从15、22.5、30、37.5到45mg/L处理U251细胞,其吸光值比对照组低,而且随浓度增加逐渐降低（P〈0.05）;相反,随着浓度增加,DADS对细胞增殖的抑制率从32.88%、41.83%、49.50%、59.42%到68.53%逐渐增强（P〈0.05）;未处理的U251细胞群体倍增时间为21.86h,而DADS处理后的细胞,细胞群体倍增时间延长至36.69h（P〈0.05）;Western blot结果发现,DADS处理U251细胞24、48h后,RORα蛋白表达（0.69±0.13、1.37±0.25）较未处理组（0.22±0.16）明显上调（P〈0.05）,且48h处理组高于24h处理组（P〈0.05）。结论DADS可抑制人胶质瘤U251细胞增殖,其抑制增殖作用可能与诱导RORα蛋白表达上调有关。     

GKNs在胃癌中的研究进展

一类胃特异性的蛋白新家族,称为"胃动蛋白"。这些分泌蛋白是胃黏液细胞谱系的产物,其基因家族被认为是胃肠道组织特异性的抑癌基因。胃动蛋白(gastrokines,GKNs)在结构上具有高度保守性,据研究GKNs的功能主要在动态平衡和抑制胃肿瘤上发挥作用。GKNs在正常胃组织中表达,而在胃肿瘤中表达下降或缺失,且其与三叶草因子家族、幽门螺杆菌(Hp)会影响胃癌的发生、发展过程。本文旨在集中已有的证据来证实GKNs有维持胃上皮内环境和肿瘤抑制的作用。     

常见甲状腺良恶性肿瘤的形态定量分析

目的　探讨形态定量指标在常见甲状腺良恶性肿瘤鉴别诊断中的价值并建立数据库 ,为计算机协助诊断疾病打下基础。方法　利用PIPS -2 0 2 0型超清晰图象分析系统对 3 2例甲状腺良性乳头状增生病变 (TBPL)、3 2甲状腺乳头状腺癌 (TPAC)、2 7例甲状腺滤泡性腺瘤 (TFA)、2 4例甲状腺滤泡性腺癌 (TFAC)进行胞核形态定量研究。结果　TBPL与TPAC、TFA与TFAC、TBPL与TFA、TPAC与TFAC八项胞核形态定量参数经统计学处理比较 ,TBPL与TPAC的七项指标有非常显著性差异 (P <0 0 1)、TFA与TFAC的八项指标均有非常显著性差异 (P <0 0 1)、TBPL与TFA的 7项指标有非常显著性差异 (P <0 0 1) ;TPAC与TFAC的八项指标均无非常显著性差异 (P >0 0 1)。结论　形态定量参数可作为鉴别甲状腺常见良恶性肿瘤的参考指标。     

二烯丙基二硫阻滞人胃癌细胞周期的作用及机制

 目的观察二烯丙基二硫(DADS)对人胃癌MGC803细胞周期的影响及其机制。方法应用流式细胞术分析人胃癌MGC803细胞在DADS处理前后细胞周期分布的变化。采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白过氧化酶方法(SP)检测DADS处理前后p21WAF1、Rb、p53、p21ras、Cmyc基因的表达。结果20、25、30、35μ·ml-1DADS的不同浓度处理的MGC803细胞G1期细胞所占比例无影响,S期细胞数减少,而G2期细胞则明显增加,与未处理组比较有显著性差异(P<0.05)。DADS作用后的MGC803细胞,p21WAF1表达明显增加,而Rb表达呈弱阳性,p53、p21ras、Cmyc表达阴性。DMSO处理的MGC803细胞亦呈现同样改变。结论DADS可以阻滞MGC803细胞于G2/M期。其作用机制可能与上调p21WAF1、Rb基因表达,下调p53、ras、Cmyc基因表达有关。     

甲状腺乳头状腺瘤与甲状腺乳头状腺癌形态定量分析

为探寻形态定量参数指标在鉴别甲状腺乳头状腺瘤与乳头状腺癌的价值 ,利用 HPIAS-10 0型图象分析系统对 2 9例甲状腺乳头状腺瘤与 3 2例甲状腺乳头状腺癌进行形态定量测定及比较分析。结果显示 ,甲状腺乳头状腺瘤与甲状腺乳头状腺癌的细胞核面积、核周长、核直径、核体积、核长径、核短径、核长短径比、核形状因子 8项形态定量参数指标中核面积、核周长、核直径、核体积、核长径、核形状因子 6项形态定量参数经统计学处理分析比较 (p <0 .0 1)有高度显著性差异 ,核短径参数指标 (p <0 .0 5 )有显著性差异 ,核长短径比参数指标 (p>0 .0 5 )无显著性差异     

无痛护理管理在腹股沟疝围手术期的护理体会

腹股沟疝是外科常见病和多发病，而围手术期疼痛不仅造成患者主观的痛苦，还会对机体的各个器官产生各种不利影响，如形成血栓、心肺并发症、各种心理障碍等［1］。1995年，美国疼痛协会把疼痛定义为第五生命体征，排在四大生命体征体温、呼吸、脉搏、血压之后［2］。世界医学领域也在倡导无痛护理和人性化服务理念［3］。     

二烯丙基二硫对人胃癌细胞维甲酸相关孤核受体α表达的影响

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)处理前后人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体α(RORα)表达变化情况.方法 将胃癌SGC7901、MGC803细胞分为对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养及细胞形态学观察,采用免疫细胞化学、Western blot分析RORα的表达;半定量RT-PCR检测RORα核酸水平的表达.结果 DADS处理24 h后,胃癌SGC7901、MGC803细胞形态学发生明显改变;RORα在人胃癌SGC7901、MGC803细胞核中呈强阳性表达,与对照组比较表达显著上调;半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24 h后,SGC7901、MGC803细胞中RORα的表达量[(1.09±0.01)与(0.97±0.01)]较对照组[(0.45±0.03)与(0.44±0.02)]显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.01);Western blot分析及灰度扫描显示,DADS处理人胃癌MGC803、SGC7901细胞8、12、24 h后,RORα蛋白表达量较未处理组显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 DADS可诱导人胃癌细胞分化,其诱导分化作用可能与上调RORα表达有关.     

二烯丙基二硫对人胃癌细胞RORα蛋白表达的影响

目的研究二烯丙基二硫(DADS)处理前后人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体α(R ORα)蛋白表达变化情况。方法实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养及细胞形态学观察,采用免疫细胞化学、Western blot分析RORα蛋白水平的表达;半定量RT-PCR检测RORα核酸水平的表达。结果DADS处理24 h后,细胞形态学发生明显改变;R ORα蛋白在人胃癌MKN28、MGC803细胞核中呈强阳性表达,与对照组相比表达明显上调;半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24 h后,RORα蛋白表达在MGC803、MKN28细胞中的(0.97±0.01)、(0.91±0.01)较对照组的(0.44±0.02)、(0.72±0.01)显著上调(P<0.01或P<0.05);Western blot分析及灰度扫描显示,DADS处理人胃癌MGC803、MKN28细胞8、12和24 h后,RORα蛋白表达分别为(0.71±0.03)和(0.79±0.01)、(0.87±0.01)和(0.88±0.02)以及(1.31±0.01)和(0.96±0.02)较未处理组的(0.32±0.01)和(0.68±0.02)明显上调,差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。结论DADS可诱导人胃癌细胞分化,其诱导分化作用可能与上调R ORα蛋白表达有关。