菊花防护晶状体上皮细胞氧化损伤及信号转导机制的实验研究

目的通过菊花影响过氧化氢（H2O2）氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）信号转导的实验研究，探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞和分子机制。方法将传代培养的牛LEC与H2O2共同孵育复制氧化损伤模型，同时加入菊花水提取液孵育后，四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性、荧光分光光度法检测LEC内的钙离子浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量，探讨不同浓度菊花及孵育12h、24h和36h的影响。结果①H2O2组LEC活性下降，菊花使氧化损伤的LEC活性显著增高（P〈0．01），呈浓度依赖关系和时间依赖关系。（②H2O2组LEC的[Ca^2＋]i升高，菊花使氧化损伤所致的LEC的[Ca^2＋]i显著降低（P〈0.01），并呈时间-效应关系。③H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降，菊花可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0．01）、cGMP水平显著升高（P〈0．01），也呈时间-效应关系。结论通过[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号转导系统及其相互作用调节生物学效应，可能是菊花防护LEC氧化损伤及减少细胞凋亡的细胞和分子生物学机制。     

莪术抑制晶状体上皮细胞增殖的信号转导机制

目的 探讨天然药物莪术（rhizoma curcumae，RC）对体外培养的晶状体上皮细胞（1ensepithelial cell，LEC）增殖的抑制作用，并从信号转导方面研究其抑制LEC增殖的作用机制，为寻求防治后发性白内障（after cataract）的确切有效药物提供实验依据。方法 用牛LEC进行原代和传代培养，取第三代细胞。用10ng／ml重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinant human basic fibroblast growth factor，rhbFGF）诱导LEC增殖。同时分别将5mg／ml、10mg／ml、20mg／ml的莪术作用于增殖状态下的LEC72小时。（1）通过四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色测定法检测莪术对LEC增殖的抑制程度；（2）用钙荧光指示剂Fura-2／AM测定莪术抑制LEC增殖时细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）变化;（3）用放射免疫分析法测定莪术抑制LEC增殖时细胞内环化腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）和环化鸟苷酸（cyclicguanosine monophosphate，cGMP）浓度变化。结果 莪术可明显抑制LEC增殖。抑制LEC增殖时细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）升高，细胞内cAMP浓度显著升高，细胞内cGMP浓度显著降低，cAMP／cGMP比值升高，并具有剂量依赖关系。结论 诱导[Ca^2＋]i升高，激活细胞内Ca^2＋信号转导途径；上调细胞内cAMP水平，下调细胞内cGMP水平，使cAMP／cGMP比值升高，激活细胞内cAMP-PKA、cGMP-PKG信号转导途径可能是莪术抑制LEC增殖的作用机制之一。莪术能够明显抑制LEC增殖的作用，有望成为防治后发性白内障的有效药物。     

细胞凋亡抑制剂防护晶状体上皮细胞氧化损伤的信号转导机制

目的：旨在探讨细胞凋亡抑制剂阿魏酸钠（SF）、五味子乙素（Sch B）、菊花（FC）、车前子（SP）对氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内Ca^2＋、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响，揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制。方法：将四种药物与H202造成氧化损伤的体外培养牛LEC共同孵育后，进行以下研究：1、采用四甲基偶氮唑兰（MTT）法观察在不同时间和浓度条件下LEC活性的变化。2、采用荧光分光光度法测定不同时间细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）。3、采用放射免疫法测定不同时间LEC内cAMP、cGMP的含量。观察药物的剂量效应与时间效应。     

清开灵对内毒素性发热家兔的解热机制研究

目的　探讨清开灵注射液 (简称清开灵 )对内毒素性家兔发热的解热机制。方法　复制内毒素性家兔发热模型 ,以数字温度计测量结肠的温度 ,用放免法测定下丘脑中的IL 1β和cAMP、脑脊液中的cAMP、腹中隔区 (VSA)的精氨酸加压素 (AVP)的含量。结果　①清开灵对内毒素性发热家兔有显著性的解热效应 (P <0 0 1) ;②明显抑制下丘脑IL 1β及cAMP的生成 (P <0 0 1) ;③显著降低脑脊液 (CSF)中cAMP及腹中隔区AVP的含量 (P <0 0 1)。结论　清开灵对内毒素性发热的重要解热机制可能与抑制内生致热原和中枢发热介质的生成 ,促进解热物质的释放有关     

光凝联合药物治疗糖尿病性黄斑水肿

目的观察多波长激光光凝联合药物治疗糖尿病性黄斑水肿的治疗效果,评价视网膜光凝结合药物治疗糖尿病性黄斑水肿的疗效。方法根据荧光素眼底血管造影选择糖尿病性黄斑水肿患者106例（170眼）,随机分为1、2两组。两组患者均接受了视网膜光凝治疗,其中2组58例（96眼）在光凝治疗基础上服用中药,中重度水肿者联合球后注射曲氨萘德。治疗前后检查两组患者视力、眼底和眼底荧光血管造影。结果根据患者视力和黄斑水肿情况,对两组疗效进行比较,光凝联合药物治疗组较单纯光凝组视力改善明显,黄斑水肿吸收较单纯光凝组快,总有效率为47.9%,高于单纯光凝组的31.1%,两组疗效差异有统计学意义（P〈0.05）。结论视网膜光凝治疗糖尿病性黄斑水肿时联合服用中药,严重者配合注射曲氨萘德较单纯应用光凝治疗效果更好。     

运用升清降浊法辨治湿性年龄相关性黄斑变性

湿性年龄相关性黄斑变性（wAMD）是一种引起老年人严重视力下降的退行性病变,在中医学上属“视瞻昏渺”的范畴。临床多认为wAMD是由脾肾亏虚所致,病证多属本虚标实。脾肾气虚导致气机不畅、清阳不升、浊阴不降,津液输布障碍、血脉闭阻产生的痰、湿、瘀等病理产物瘀阻于脉道而发为本病。因此,治疗wAMD应着重以补益脾肾,调整气机、升清降浊为治则。在临床治疗本病时,注重运用升降理论,调补脾肾,调畅气机,畅达气、血、津液,常可达到脏腑清浊调和,目得所视。     

密蒙花方防护糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞损伤机制探讨

目的　探讨密蒙花方防治糖尿病视网膜病变大鼠早期视网膜神经细胞损伤的作用机制,为临床实践提供实验依据。方法　采用清洁级雄性Sprague-Dawley（SD） 大鼠120只,其中正常组30只,其余大鼠采用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠动物模型,造模成功后随机分为模型组及密蒙花方组,密蒙花方组采用密蒙花方灌胃3个月,模型组用与密蒙花方组等容的蒸馏水灌胃。给药1个月后,采用TUNEL法检测大鼠视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）凋亡情况;分别在给药1个月、2个月、3个月后采用高效液相色谱法检测各组大鼠视网膜中谷氨酸含量;PCR以及Western blot法检测视网膜中Sigma-1R mRNA和蛋白表达情况。结果　给药1个月后,TUNEL法检测结果示,密蒙花方组RGCs凋亡数少于模型组。高效液相色谱法检测结果示,给药1个月、2个月、3个月后,模型组较正常组谷氨酸含量均增加（均为P＜0.01）,密蒙花方组谷氨酸含量较模型组均降低（均为P＜0.01）。给药3个月后,正常组、模型组和密蒙花方组视网膜Sigma-1R mRNA相对表达量分别为1.71±0.11、0.67±0.09和1.50±0.14,Sigma-1R蛋白相对表达量分别为0.39±0.02、0.16±0.02和0.30±0.01;与正常组相比,模型组Sigma-1R mRNA及蛋白水平均降低（均为P＜0.01）;与模型组相比,密蒙花方组Sigma-1R mRNA及蛋白水平均升高（均为P＜0.01）;密蒙花方组与正常组之间差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　糖尿病视网膜病变早期即出现视网膜神经细胞的凋亡及损伤,密蒙花方可通过谷氨酸和Sigma-1R介导机制干预糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞损伤,从而起到阻止糖尿病视网膜病变进一步发展的作用。     

糖尿病性干眼患者血清炎症细胞因子的变化及意义

目的探索糖尿病性干眼患者血清炎症细胞因子的变化特点。方法糖尿病性干眼、糖尿病无干眼、非糖尿病性干眼、正常人各20人(40只眼),检测血清白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,使用双通道视觉质量分析系统(OQAS)测定客观散射指数(OSI),分析糖尿病性干眼患者OSI与血清IL-1β及TNF-α的相关性。结果糖尿病性干眼者的血清IL-1β、TNF-α及OSI分别为(69.63±12.02)pg/ml,(57.67±11.98)pg/ml,1.53±0.35;糖尿病无干眼者为(53.45±9.21)pg/ml,(52.20±6.39)pg/ml,0.93±0.30;非糖尿病性干眼为(58.41±7.77)pg/ml,(53.98±7.20)pg/ml,1.12±0.22;正常人为(48.69±7.49)pg/ml,(44.94±3.9)pg/ml,0.64±0.18。正常人的血清IL-1β、TNF-α以及OSI均低于其他三组(P0.05)。糖尿病性干眼者的OSI值与血清IL-1β呈正相关(r=0.771,R~2=0.594,P0.001),与血清TNF-α亦呈正相关(r=0.762,R2=0.581,P0.001),得到的回归方程分别为:OSI=0.541+0.032×IL-1β(F=70.330,P0.001);OSI=-1.994+0.083×TNF-α(F=23.878,P=0.001)。正常人组的血清IL-1β、TNF-α浓度与OSI均无明显相关性。结论体内持续微炎症状态在糖尿病性干眼的发生、发展过程中起重要的作用。     

清开灵注射液对实验性发热的作用研究

目的 :复制家兔内毒素和内生致热原性发热模型 ,观察清开灵对实验性发热的作用。方法 :采用雄性日本大耳白家兔 ,体重 2 2～ 3 0ｋｇ。实验分两部分进行 ,第一部分观察清开灵对内毒素和内生致热原性发热的解热效应。 48只家兔随机分成 6组 :生理盐水对照组 (ｉｍ .1ｍＬ/ｋｇ) ;清开灵组 (ｉｍ .1ｍＬ/ｋｇ) ,内毒素组 (ｉｖ .5μｇ/ｋｇ) ;内毒素 清开灵组 (ｉｍ .清开灵 1ｍＬ/ｋｇ ,0 .5ｈ后ｉｖ ,内毒素 5μｇ/ｋｇ) ;内生致热原组(ｉｖ .1ｍＬ/ｋｇ) ;内生致热原 清开灵组 (ｉｍ .ＱＫＬ ,0 .5ｈ后ｉｖ,内生致热原 1ｍＬ/ｋｇ)。第…     

密蒙花方对单纯型糖尿病视网膜病变患者视网膜功能的影响

目的观察密蒙花方对单纯型糖尿病视网膜病变眼底荧光血管造影(FFA)、视野平均敏感度(MS)、视网膜电图震荡电位(ERG-OPs)的影响。方法将确诊为气阴两虚的单纯型糖尿病视网膜病变患者63例(112只眼)随机分为治疗组及对照组,分别给予密蒙花方及羟苯磺酸钙治疗,连续用药3个月。观察治疗前后FFA和视野MS、ERG-OPs的变化。结果治疗组FFA表现改善优于对照组(P0.01);治疗组和对照组MS均提高(P0.05),但治疗组优于对照组;治疗组OPsO1峰潜伏期缩短(P0.05)。结论中药密蒙花方可改善单纯型糖尿病视网膜病变的眼底情况,提高视野MS值,对ERG-OPs也有一定的作用,使视网膜血流情况稳定,是防治早期糖尿病视网膜病变的有效药物。