以红色及绿色荧光蛋白为标记基因的血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白2真核表达载体的构建及其在293-T细胞中的共表达

背景:血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白具有协同促进血管生成的作用。目的:构建在真核细胞中表达人血管内皮生长因子165的红色荧光蛋白表达载体和携带人骨形态发生蛋白2的绿色荧光蛋白表达载体,共转染真核细胞以研究血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白2在293-T细胞内的表达和定位。设计:随机对照实验。单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所国家重点实验室。材料:实验于2002-09/2004-03在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所国家重点实验室完成。pCDNA3.1( )/骨形态发生蛋白2由美国UCLA大学Dr.Bostrom惠赠;pDsRed1-N1由ProfessorRogerY.Tsien,UniversityofCalifornia,SanDiego,USA惠赠。pUC18/血管内皮细胞生长因子165,293-Tcells由本实验室保存。方法:根据已知的人血管内皮生长因子165序列,设计在目的片段两端分别携带酶切位点的两条引物,用聚合酶链反应从质粒pUC18/血管内皮生长因子165中扩增出去除终止密码子的人血管内皮生长因子165片段,定向克隆至含报告基因的质粒pDsRed1-N1中,构建重组质粒pDsVEGF165Red1-N1;同时,构建pIRES2-骨形态发生蛋白2-加强型绿色荧光蛋白表达载体。以DOTAP为介导,将重组质粒共转染293-T细胞,48h后用激光共聚焦显微镜检测报告基因红色荧光蛋白和加强型绿色荧光蛋白的表达,使用反转录聚合酶链反应及免疫印迹方法检测血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白2在细胞内表达。主要观察指标:质粒的酶切鉴定及重组质粒在293-T细胞中mRNA及蛋白水平的表达。结果:重组质粒经酶切、聚合酶链反应和DNA序列测定证明构建正确,目的基因在293-T细胞中在mRNA及蛋白水平获得表达。激光共聚焦显微镜观察到红色荧光蛋白和加强型绿色荧光蛋白在细胞内共定位的情况。结论:成功构建pDsVEGF165Red1-N1和pIRES2-骨形态发生蛋白2-加强型绿色荧光蛋白2种含报告基因的真核表达载体,两者共转染后能在真核细胞中表达,为研究血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白2在细胞内的相互作用提供了一个重要而方便的工具。     

3种非甾体抗炎药对大鼠骨关节炎关节软骨细胞IL-1β、TNF-α、IL-1α表达的影响

目的 研究厚朴Magnolia officinalis干燥叶中具血管活性作用部位的化学成分。方法 采用现代色谱技术对厚朴叶中具有血管活性部位乙醇提取物的氯仿萃取部位和正丁醇萃取部位进行分离和纯化,根据化合物谱学数据进行结构鉴定。结果 从厚朴叶中分离得到了16个化合物,分别鉴定为厚朴酚（1）、厚朴醛B（2）、台湾擦木酚（3）、丁香脂素（4）、4, 4′, 5-三羟基-1, 1′-双-2-丙烯基联苯（5）、落叶松脂素（6）、(7S, 8R) syringoylglycerol（7）、松柏苷（8）、苄基-β-D-阿洛糖苷（9）、阿福豆苷（10）、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷（11）、南酸枣苷（12）、5, 7-二羟基色原酮-7-O-β-D-葡萄糖苷（13）、erigeside C（14）、tachioside（15）、尿嘧啶苷（16）。结论 化合物5～8为首次从该植物中分离得到,其中化合物9～16为首次从该属植物中分离得到。     

周期系列盆腔时实超声检测排卵的应用

本文介绍16个周期系列盆腔时实超声观察卵泡的生长和排卵。描叙了膀胱大小、子宫位置与卵巢显示的关系。并将卵泡图像的变化与血清激素水平、宫颈粘液评分和基础体温对照。排卵前24h卵泡直径14—26mm     

99Tcm-MDP骨显像观察骨水泥阻塞兔骨干髓腔后远侧骨血流和代谢

目的 用^99Tc^m-亚甲基二膦酸盐（MDP）显像观察骨水泥阻塞兔股骨近中段骨干髓腔对其股骨远端骨血流和代谢的近、远期影响.方法 兔左侧后肢股骨髓腔内灌注聚甲基丙烯酸甲酯TJ骨水泥（PMMA）,而右侧不灌注作为正常对照,制作骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔的兔模型.将24只实验兔根据不同的观察时间段随机分成术后当天（T0）、术后4周（T4）、术后8周（T8）、术后16周（T16）4组,每组6只.对模型兔双侧后肢股骨行动态（血流相）和静态（骨相）显像,选取双侧后肢股骨远端相同的感兴趣区（ROI）,算出实验侧/对照侧放射性比值,并进行比较.结果 T0、T4组实验侧放射性计数均比对照侧明显降低,T8、T16组实验侧放射性计数均超过对照侧,T16组最高;实验侧/对照侧各时间段放射性比值比较：T0与T8、T0与T16、T4与T16、T8与T16、T4与T8组间差异均有显著性（P均＜0.05）,而T0与T4组间差异无显著性（P＞0.05）.骨动态显像和静态显像的变化趋势完全一致.结论 骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔后严重破坏了骨内和髓内的血液循环状态,引起局部血流动力学改变,导致股骨远端的血供和代谢状况发生变化.     

新疆生产建设兵团卫生监督员群体素质现状分析

对新疆生产建设兵团卫生监督员群体素质现状进行了分析，结果表明：卫生监督员数量尚可，与兵团人群分布基本适应，但平均年龄偏大。兵团、师（局）两级卫生监督员的学历、职称尚可，但基层团场的监督员学历偏低、职称构成不尽合理。提示应严格把关，注重人员素质，加强队伍管理，重视解决年龄结构问题，加强培训工作。以提高卫生监督员整体素质，更好地完成监督执法任务。     

骨水泥阻塞骨干髓腔后远侧骨干骨内压和骨血流改变的实验研究

[目的]探讨骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔后对股骨远端骨内压和骨血流的影响.[方法]采取兔左侧股骨髓腔内灌注PMMA骨水泥而右侧不灌注作为正常对照的方法,制作骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔的兔动物模型.将32只实验兔分成5组,随机取出8只不做模型作为正常对照组,其余24只制作模型后,根据不同的观察时间段随机分成术后当天（T0）、术后4周（T4）、术后8周（T8）、术后16周（Ti6）4个观察组,每组6只.使用生理测压仪,对正常和模型动物双侧股骨远端骨内压进行测量和比较.采用核素骨显像（ECT）方法,对模型动物双侧股骨远端动态和静态显像进行检测和比较.[结果]（1）骨内压：正常兔股骨远端双侧骨内压无差异性（P＞0.05）：T0、T4、T8、T16实验侧骨内压明显增高,双侧有差异性（P＜0.01）.造模后在不同观察时间段对照侧骨内压均无差异性（P＞0.05）,实验侧处于持续骨内高压状态,T0与T4、T0与T8、T0与T16、T4与T8、T8与T16均无差异性（P＞0.05）,T4与T16有差异性（P＜0.05）;（2）核素骨显像：T0、T4实验侧核素计数均比对照侧明显降低,T8、T16实验侧核素计数均超过对照侧,T16最高;各时间段实验侧/对照侧核素计数比值中T0与T8、T0与T16、T4与T16、T8与T16、T4与T8均有差异性（P＜0.05）,而T0与T4无差异性（P＞0.05）.核素骨动态和静态显像的变化趋势完全一致.[结论]骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔后严重破坏了骨内和髓内的血液循环状态,引起了局部血流动力学的改变.导致股骨远端的骨内压和骨血流发生了一系列的变化,骨内压持续升高并长期存在.     

离体时间对自体骨移植愈合影响的实验研究

目的：探讨自体移植骨离体4h内对移植骨成骨能力的影响。方法：取兔髂骨常温下置于0．9％生理盐水中，分别于取骨后0、1、2、3、4h行异位肌袋植骨，植骨分冲洗与不冲洗骨髓两种。异位肌袋植骨行ALP染色、：PAS染色和HE染色等组织形态学检查和形态计量学分析。结果：组织学检查显示术后3天各组移植骨中均有骨细胞和成骨细胞成活，但无新骨形成。术后1周各组均有新骨样组织形成，2周新骨组织增多，其后新骨组织增多并逐渐向编织骨和板层骨组织转变。形态计量学分析结果显示异位肌袋植骨各组没有显著性差异。结论：取骨后置于0.9％生理盐水中4h内对自体移植骨本身的成骨能力没有影响，冲洗骨髓并不影响移植骨的成活以及成骨能力，故将移植骨取下后置于0．9％生理盐水中是合理的方法，取骨后立即植骨或取骨后4h内再植入对自体移植骨的愈合没有明显影响。     

脉冲电磁场、碱性成纤维细胞生长因子促进坐骨神经延长的实验研究

目的探讨减轻周围神经在缓慢牵拉过程中的损伤，增加神经延长率的方法。方法采用改良的组织扩张器，对大白兔坐骨神经行扩张延长的同时，辅以脉冲电磁场（ＰＥＭＦ）及碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）处理。最后，测定神经延长率（ＮＥＲ）、运动传导速度（ＭＣＶ）及组织病理观察。结果ＮＥＲ在ＰＥＭＦ组及ｂＦＧＦ组均显著高于对照组，而ＭＣＶ的降低却显著较轻。组织病理显示，ＰＥＭＦ及ｂＦＧＦ组的神经变性轻，雪旺氏细胞增殖，新生毛细血管及髓鞘却较明显。结论ＰＥＭＦ及ｂＦＧＦ可减轻神经在扩张期间的损伤，增加延长率     

指端离断原位缝接术(附19例报告)

本文报告我院1972年11月至1979年2月，末节手指完全性离断后原位缝接19例（21个手指）的治疗，效果及远期随诊。