PCR-SSCP检测急性白血病患者N-ras基因突变及临床意义初探

目的 探讨N-ras基因突变与急性白血病发生的关系。方法 采取骨髓和外周血白细胞提取DNA．用PCR-SSCP分析技术分别对急性白血病患者、正常对照组的N-ras基因突变进行检测。结果 84例急性白血病患者中25例发生N-ras基因突变，基因变异频率为29．8％，其中急性淋巴细胞白血病为18．6％，急性髓细胞白血病为41.4％；11例随访6个月，7例N-ras基因突变消失，4例N-ras基因突变持续存在；正常对照组未发现N-ras基因突变、结论 N-ras基因突变对急性白血病患者的预后具有一定的参考价值。     

核因子-κB参与小鼠Hepcidin基因的转录调控

目的探讨核因子-κB（NFKB）参与Hepcidin基因急性时相表达转录调控的可能性及其分子机制。方法腹腔注射脂多糖（LPS）建立小鼠急性时相反应模型，检测Hepcidin表达与LPs的剂量效应和时间效应关系；电泳迁移率变动实验（EMSA）初步探讨NF-κB参与Hepcidin基因转录调控的可能性；构建NFicBp65亚基特异的小干扰RNA（siRNA）表达载体pAVU6＋27-NF-κB，DOTAP脂质体法瞬时转染小鼠原代肝细胞，观察NF-κB p65基因沉默后Hepcidin表达改变以及LPS诱导Hepcidin表达情况。结果Hepcidin表达与LPS注射剂量和时间呈正相关，50μg LPS注射后l0h，Hepcidin表达达到峰值。EMSA显示53～64bp位点出现明显的滞后带。NF-κBP65特异的SiRNA表达载体瞬时转染原代肝细胞后，基因沉默效率为50％～67％，转染细胞Hepcidin的表达水平明显下降，且并不能被LPS显著诱导。结论NF-κB参与Hepcidin转录调控，p65亚基是其上调Hepcidin基因表达的关键组分，53～64bp是p65亚基的作用位点。     

B细胞活化因子的纯化和复性参数的优化研究

目的获得高纯度和高活性的B细胞活化因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF).方法重组原核表达载体pQE-80L-BAFF112-285在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导表达rhBAFF112-285,超声碎菌,提取包涵体,经Ni2 -NTA亲和层析和Sepharcryl S-200凝胶过滤层析纯化后,选择不同氧化还原条件进行复性,进而检测其生物学活性.结果得到了有较高纯度和较好生物学活性的rhBAFF112-285蛋白.结论优化了BAFF蛋白的纯化和复性的参数,所获结果为进一步研究创造了条件.     

烫伤大鼠肝葡萄糖激酶、肌己糖激酶活性及红细胞三磷酸腺苷含量的变化

为进一步探讨损伤后糖代谢状况，我们测定了３０％体表烫伤后大鼠不同时间的血糖和血乳酸，并比较休克期（伤后６ｈ）和高代谢期（伤后７２ｈ）的肝葡萄糖激酶及比目鱼肌已糖激酶（Ⅱ型）活性。结果显示血乳酸水平在伤后６ｈ和４８ｈ各有一个高峰，可能分别是应激和代谢紊乱的表现。血糖水平在伤后６ｈ明显升高，但６ｈ内波动很大。伤后７２ｈ肝葡萄糖激酶活性显著降低（Ｐ＜０．０５），可能与创伤后血糖升高，糖异生增强及胰岛素抵抗等现象有关。伤后比目鱼肌已糖激酶活性及红细胞三磷酸腺苷（ＡＴＰ）含量未发现明显变化。     

基因诊断的基本策略与临床应用

基因诊断是利用分子生物学和分子遗传学的技术，从DN/RNA水平检测、分析基因的存在和结构、变异和表达状态，从而对疾病作出诊断的方法。基因诊断又称DNA诊断，它是20世纪70年代末迅速发展起来的一项应用技术，目前已应用于许多疾病的临床诊断，仅就基因诊断的特点、基本策略以及临床应用简述如下。     

表观遗传学修饰对BDNF基因表达的影响

<正>脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)是继神经生长因子(NGF)之后发现的又一重要的神经营养因子。它能够维持神经元在中枢及周围神经系统正常的生理功能,对神经元的存活、分化、生长发育起重要作用,并能促进损伤神经元的再生等。近年来对BDNF基因表     

1836例孕中期唐氏综合征产前筛查与诊断的临床研究

目的 探讨孕妇孕中期胎儿唐氏综合征(DS)为主的先天缺陷筛查的临床应用价值.方法 应用时间分辨荧光免疫法测定1 836例孕中期(15～20+6周)孕妇血清中甲胎蛋白(AFP)和游离β绒毛膜促性腺激素(free β-hCG)的浓度,应用 Multicalc 软件计算唐氏综合征风险度,风险切割值为1/ 270,对高风险孕妇进行羊水细胞染色体核型分析及B超检查进行确诊.结果孕15～20+6周孕妇血清AFP浓度随孕周的增加而增加,free β-hCG浓度随孕周的增加而减少.1 836例孕妇中,共筛出高危孕妇118例,阳性率6.43%,其中唐氏征高危110例,有98例接受羊膜腔穿刺,占筛查DS高危孕妇的89.09%.发现胎儿染色体异常和其他异常共5例,假阳性率为6.15%.其中DS综合征1例,染色体平衡易位1例,经B超检查发现胎儿其他异常3例.结论 孕中期产前筛查是预测异常胎儿和不良妊娠结局的重要指标.产前诊断是防止先天缺陷发生的重要手段之一.     

细胞焦亡在肠道炎性损伤中作用的研究进展

肠道炎性损伤常伴发肠道黏膜损伤、肠壁通透性增强、肠动力紊乱等,产生的炎症因子随血液循环扩散到全身,严重时可引起多器官衰竭。细胞焦亡是近年发现的一种由gasdermin蛋白家族成员介导的细胞程序性死亡方式,主要表现为质膜大泡形成,细胞持续肿胀直至细胞膜破裂,细胞内容物释放,从而激活强烈的炎症反应,并使炎症反应级联扩大。细胞焦亡广泛参与各种疾病的发生,其在炎症中的作用机制仍是目前研究的热点,由胱天蛋白酶(caspase)-1介导的细胞焦亡经典途径和caspase-4/5/8/11介导的细胞焦亡非经典途径与肠道炎症的发生和发展关系密切。因此,探讨细胞焦亡的信号通路和分子机制及其在脓毒症肠道损伤、炎性肠病、感染性肠炎和肠道肿瘤中的作用,对肠道炎性损伤的防治具有重要意义。