铁死亡在肿瘤的作用机制

铁死亡是近年来发现的一种新型细胞程序性死亡,与传统的细胞凋亡、坏死、自噬不同,它以细胞内游离亚铁离子增多及膜脂质多不饱和脂肪酸过氧化、谷胱甘肽过氧化物酶4合成减少所致脂质活性氧过剩导致细胞死亡为代谢特征。几乎所有生物体内含铁元素,且较正常细胞而言,肿瘤细胞生长、增殖、迁移、侵袭需要大量铁元素维持,铁元素缺乏可导致细胞活力下降,铁元素过多又可导致依赖活性氧的细胞死亡,这表明肿瘤细胞对铁死亡更加敏感。目前在炎症、缺血-再灌注损伤以及肝细胞癌、乳腺癌、胶质瘤等恶性肿瘤中均观察到铁死亡。本文阐述铁死亡对肿瘤作用及其机制的研究进展。     

Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组织中MGMT、TopoⅡα、P-gp的表达变化及意义

目的 观察Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组织中O6甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、拓扑异构酶Ⅱα (TopoⅡα)和P-糖蛋白(P-gp)的表达变化,并探讨其意义.方法 采用免疫组织化学法检测36例Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤、24例Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤及10例正常脑组织中的MGMT、TopoⅡα及P-gp.结果 高级别胶质瘤组织中MGMT、TopoⅡα、P-gp阳性率分别为72.2%、50.0%、66.7%,Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤中分别为29.2%、33.3%、25.0%,正常脑组织中分别为10%、0、0,三者两两比较,P均＜0.01.相关分析表明,Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组织中MGMT与P-gp、TopoⅡα与P-gp有关,r分别为0.444、0.478.结论 高级别胶质瘤中MGMT、TopoⅡα、P-gp表达增高,可根据其表达情况制定个体化的化疗方案.     

siRNA对人脑胶质瘤细胞Survivin基因表达的影响

目的 探讨siRNA敲除Survivin基因的可行性,并观察其对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响.方法 采用人工合成的小干扰RNA(siRNA)体外阻抑人脑胶质瘤细胞T98和SF767 Survivin基因的表达,即时定量PCR方法检测Survivin mRNA表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 Survivin siRNA转染后24 h,T98、SF767细胞中Survivin mRNA表达水平同阴性对照相比下调分别达92.6%、89.5%,48 h后表达量则下降了 80.1%、67.6%.T98细胞在干扰后24、48 h平均凋亡率分别达50.2%、38.4%,SF767分别达40.1%、25.6%,同阴性对照相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 针对Survivin的siRNA Oligo能有效抑制Survivin基因的表达,并诱导细胞凋亡,为RNA干扰技术用于胶质瘤的临床治疗打下了基础.

Abstract：

Objective This study was to investigate the feasibility ofknockdown of Survivin gene with small interfering RNA and to observe the apoptosis in gliomas which was influenced by siRNA.Methods Survivin specific siRNA oligonucleotides were designed and synthesized artificially.This siRNA were transfected into human glioma cells T98 and SF767 to inhibit the expression of Survivin RNA in vitro.The mRNA level of Survivin was detected by real- time quantitative polymerase chain reaction (PCR) and the apoptosis of cells was assayed by flow cytometry (FCM).Methods The expression of Survivin mRNA in siRNA- transfected samples decreased by 92.6% and 89.5% in T98,SF767 cells respectively in 24 hours after transfected with siRNA oligos.The expression amount was declined by 80.1% and 67.6% in 48 hours after RNAi.The apoptosis rate of T98 cells was 50.2% in 24 hours after interfere,and was 38.4% in 48 hours.The apoptosis rate of SF757 cells were 40.1% and 25.6% respectively.There was a significant difference between the RNAi cells and negative controls(P ＜0.01 ).ConclusionThe specific siRNA oligo which was aim to Survivin could knockdown the expression of Survivin mRNA,and induce apoptosis in human glioma cells.The experiment had made the foundation of the clinical RNA interfering technique.     

Dickopff-1的真核表达载体构建及其对SHG44的作用

目的 构建Diekopff-1(DKK-1)的真核表达质粒,研究SHG44转染DKK-1并经BCNU处理后其生物学特性的变化.方法 将纯化扩增的人DKK-1与真核表达载体peDNA3.1连接后转化人大肠杆菌DH5α感受态扩增重组,以LipofectamineTM2000介导将重组质粒转染SHG44细胞,经G418筛选后进行鉴定.BCNU处理转染DKK-1基因后的SHG44细胞,流式细胞仪检测细胞特性变化.结果 扩增获得的816 bp特异片段,重组质粒经鉴定及测序分析结果 完全一致.重组载体转染SHG44细胞经G418筛选后,转染细胞在DNA、mRNA、蛋白水平均有DKK-1的表达.BCNU处理后的未转染、空质粒转染、重组质粒转染的三组SHG44细胞,平均凋亡率分别为1.0%、1.4%、8.0%.结论 本实验成功构建了pcDNA3.1-DKK-1真核表达质粒,并建立稳定表达DKK-1蛋白的胶质瘤细胞株(SHG44-DKK-1).转染DKK-1能增强SHG44对BCNU的敏感性,促进肿瘤细胞的凋亡.     

MGMT-04多肽在人脑胶质瘤原代细胞中模拟抗TMZ耐药作用的实验研究

目的 研究多肽MGMT-04模拟O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)在人脑胶质瘤原代细胞系SHG-140中抗替莫唑胺(TMZ)耐药的实验.方法 首先设计穿膜肽MGMT-04,并加以FITC示踪,再通过免疫荧光定位MGMT-04多肽可以到达细胞核发挥作用.通过流式细胞术检测各处理组SHG-140细胞凋亡的比例,...     

单侧额颞开颅治疗双额叶挫裂伤22例疗效分析

目的总结单侧额颞开颅治疗双额叶挫裂伤的诊治经验与教训。方法对22例双额叶挫裂伤的临床资料进行回顾性分析。结果伤后3个月按GOS分级标准,恢复良好18例,中残2例,重残1例,植物生存1例。结论部分双额叶挫裂伤患者单侧额颞开颅同样能有效清除双额叶挫裂伤,并有缩短手术时间、减轻医源性损伤等优点。     

E选择素、P选择素在人脑胶质瘤中的表达意义

目的通过检测E选择素、P选择素在人脑胶瘤中的表达,探讨其与胶质瘤浸润发展的关系。方法采用免疫组织化学SP法分别检测E选择素、P选择素在61例人脑胶质瘤和8例正常人脑组织中的表达。结果①E选择素、P选择素在胶质瘤组中的阳性表达率分别为60.7%、57.4%;较对照组明显增高（P〈0.05）。②E选择素在胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级组和Ⅲ～Ⅳ级组中的阳性表达率分别为46.9%、75.9%,随肿瘤级别增高表达水平也明显增高（P〈0.05）。P选择素在不同级别胶质瘤中的表达率差异无统计学意义（P〉0.05）。③E选择素、P选择素在人脑胶质瘤中的表达无显著相关（R=0.14498,P=0.2649）。结论E选择素、P选择素可能与人脑胶质瘤的浸润发展有关。     

IL—8单抗对放射性脑损伤保护作用的实验研究

目的：通过建立兔放射性脑损伤模型,研究IL－8单抗对放射性损伤的作用及其机理。方法：30只新西兰兔行脊髓蛛网膜下腔置管,分成二组,照射前30分钟和照射后六天内每天向蛛网膜下腔注入IL－8单抗或生理盐水,分别在7、14、30天处死取样,行病理免疫组化和脑脊液IL－8水平检测。结果：治疗组与对照组各时间段相比,放射发性脑损伤的病理形态学改变减轻。IL－8浓度明显降低（P＜0．001）,胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）、脑一氧化氮合成酶（bNOS）阳性细胞数较NS组显著减少。结论：100Gy剂量能造成放射性脑损伤,蛛网膜下腔注入IL－8单抗对放射性脑损伤具有保护作用。     

75岁以上老年人脑动脉瘤破裂11例的手术治疗

目的 分析７５岁以上老年人脑动脉瘤破裂的手术治疗价值。方法 回顾性分析７５岁以上老年人脑动脉瘤破裂２２例中１１例行显微外科手术治疗的结果。结果 ２２例中,Ｈ＆ＫⅣ～Ⅴ级１０例,死亡６例;Ⅰ～Ⅲ级１２例,死亡３例。早期手术的１１例中,术后恢复良好４例,死亡１例,病死率９．１％。其中Ｈ＆ＫⅣ～Ⅴ级５例,预后良好２例、中残２例、死亡１例;Ⅰ～Ⅲ级６例,良好２例、中残２例、植物人生存２例。总良好率３６．４     

CD44v6、Syndecan-1在人脑胶质瘤中的表达

目的通过研究黏附分子CD44v6、syndecan-1在胶质瘤中的表达,探讨其与胶质瘤浸润发展的关系。方法用免疫组织化学SP法,CD44v6选用石蜡切片,syndecan1采用冰冻切片进行分析研究。结果CD44v6在正常脑组织的阳性表达率50%(4/8),而在胶质瘤中基本不表达8.2%(5/61);syndecan1在胶质瘤中表达为22%(9/41),明显低于对照组阳性表达率75%(6/8)(P<0.05)。但两者的表达在胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级组与Ⅲ～Ⅳ级组中相比均无统计学差异(P>0.05)。结论CD44v6的表达缺失可能是胶质瘤不发生颅外转移的原因之一,syndecan-1与胶质瘤的浸润发展有一定的相关性。