230例健康献血者卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感染的血清学检测

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcomaassociated herpesvirus，KSHV)又称人疱疹病毒8型(HHV-8)，是1994年美国学者Chang等首先从AIDS患者卡波氏肉瘤(KS)组织中发现的一种新的肿瘤病毒，目前被认为是KS的致病因子。KS是AIDS患者最易患的一种血管瘤，在AIDS患者中的发病率可高达50％。后来的研究表明，KSHV与多中心性卡斯特莱曼病、原发渗出性淋巴病等多种疾病有关。另外，流行病学研究表明，     

七年制医学微生物学实验教学改革的初探

医学微生物学是一门实验科学，实验技术是其不可缺少组成部分。它不仅是学生了解和掌握微生物学实验基本方法和操作技术的一个学习过程，也为学生进一步深入学习其他生命科学持别是分子生物学实验技术奠定基础。本课程在细菌学、病毒学及特微等方面培养学生基本实验方法及技能，包括：显微镜的适当使用，怎样制片染色，无菌技术转移和接种细菌，选择各种各样培养基接种分离并鉴定细菌、细     

Construction of a recombinant adenovirus Vector of human papillomavirus type 16 L1_E7c

Human papillomaviruses (HPV) that infect thegenital tfact are associated with human anogenital tyactcancer, especially cervical cancer. HPVs are thought to bethe primary causative agent in more than >90% ofcervical cancers, with type 16 being the most frequentlyfound type in human cervical cancers.ll] Low-riskHPV6/ll infections can cause condylomata throughsexual transmission. The advance of research on acandidate prophylactic vaccine against papillomavirusinfection has been made. Expressi…     

龋病及牙周炎患者唾液中HP检测及意义

采用Taqman实时荧光定量PCR技术分别对无慢性胃炎史的龋病、牙周炎患者及正常对照者唾液标本中的幽门螺杆菌（HP）进行检测。结果龋病患者唾液中HP阳性率为14.28%,HP-DNA拷贝数为（1744.77±673.33）拷贝/μl;牙周炎患者分别为25%、（2177.56±403.22）拷贝/μl;正常对照者未检测到HP阳性者,HP-DNA〈500拷贝/μl。结论HP不是无慢性胃炎史的健康人群口腔中的常驻菌群,但重症的龋病和牙周炎与HP在口腔中的定植有关。     

GM-CSF 增强HPV16DNA疫苗免疫效果的研究

目的：探讨GM－CSF增强HPV16E6c DNA疫苗免疫效应的作用。方法：（1）将C57BL／6小鼠18只分为1，2，33个组。DNA免疫前，每只小鼠胫骨前肌注射0．25％的布比卡因100μl，24h后，1组注射pcDNA3.1为对照组；2组注射pcDNA3.1E6c;3组注射pcDNA3.1E6c GM-CSF,2周后加强免疫1次；（2）加强免疫2周后，取小鼠脾脏及血清进行免疫功能测定。结果：（1）T细胞增殖实验结果：^3H-TdR掺入率；1组为6736，2组为15732，3组为26959，2组比1组提高了133．5％，3组比1组提高了278．7％，比2组提高了71．4％，经t检验表明，3组间的两两比较差异均有统计学意义，P＜0．01；（2）E6CTL表位合成肽特异性刺激后IFN－γ的产量：1组无IFN－γ产生，2组为624．8，3组为832．9，3组比2组提高了33．3％，经t检验表明，两组间差异有统计学意义，P＜0．01；（3）特异性抗体的产生：1组为0．04233，2组为0．4575，3组为0．8125，2组是1组的9．8倍，3组是1组的18．2倍，3组比2组提高了77．6％。经t检验表明，3组间的两两比较差异均有统计学意义，P＜0．01。结论：GM－CSF可有效的提高HPV16E6c DNA疫苗的细胞和体液免疫效应。     

噬菌体抗体库技术构建HPV16 E7人源化单克隆抗体

目的：构建抗ＨＰＶ１６Ｅ７的噬菌体抗体库。方法：由感染者抗凝血中分离外周淋巴细胞，提取细胞总ＲＮＡ，以逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ），用人ＩｇＧ　Ｆａｂ基因特异引物，从合成的ｃＤＮＡ中分别扩增出抗体轻链和重链可变区基因，回收纯化ＰＣＲ产物。用ＳｐｅＩ＋ＸｈｏＩ酶切重链可变区基因，ＸｂａＩ＋ＳａｃＩ酶切轻链可变区基因，先后克隆入噬菌体载体ｐＣｏｍｂ３。结果：ＰＣＲ产物经电泳证实分子量大小正确，酶切电泳证实质粒构建正确。结论：成功构建抗体轻链和重链基因克隆，建立抗ＨＰＶ１６Ｅ７噬菌体抗体库。     

人tRNAser基因真核表达质粒的构建及对FRL-19肝癌细胞的高效转染

目的:构建人tRNAser(CGA)基因与真核表达载体pSV2neo的重组体,探讨细胞高效转染新方法,研究tRNA种类及丰度对转录后翻译水平的影响;为探索基因治疗新思路打下基础。方法:EcoRI酶切pGEM-TeasytRNAser(CGA)质粒释放目的基因tRNAser(CGA)片断,与pSV2neo载体构成重组体,双酶消化鉴定重组载体插入方向。扩增纯化构建的pSV2neotRNAser(CGA)质粒,经脂质体和Plus试剂混合包装,转染FRL-19肝癌细胞株。用Hirt方法提取胞浆DNA,做Southernblot。结果:用Nsil和BamHI双酶切鉴定获得正确方向的重组质粒pSV2neotRNAser(CGA),DNA测序显示其序列正确。Southernblot结果显示:在400bp处可见一条特异DNA条带,说明pSV2neotRNAser(CGA)已转入FRL-19细胞。结论:成功构建人pSV2neotRNAser(CGA)真核表达质粒。Plus试剂可明显提高脂质体转染FRL-19细胞的效率。     

低危型HPV的E7含量与尖锐湿疣临床相关性研究进展

E7是人乳头瘤病毒(HPV)的一种早期转化蛋白，与尖锐湿疣的治疗效果和复发存在着密切的关系，也是研制HPV治疗性疫苗及特异高效抗HPV药物的主要靶抗原。     

以Ad41为载体的轮状病毒VP6基因重组腺病毒的遗传稳定性研究

目的 对前期制备的以Ad41为载体的可表达A组轮状病毒VP6基因的非复制型重组腺病毒进行连续传代,观察其遗传稳定性,为进一步研发疫苗做准备.方法 在293TE7细胞上,对本室前期构建的重组腺病毒rvAd41-VP6 (o)连续传代14代,每隔2代通过PCR鉴定VP6(o)基因的插入,通过Western Blot技术鉴定目的蛋白的表达.结果 PCR分析表明,rvAd41-VP6(o)在连续传代的过程中,其基因组中都有特异性的VP6基因稳定整合;Western Blot证实了rvAd41-VP6 (o)可稳定表达VP6,这说明rvAd41-VP6(o)有较好的遗传稳定性.结论 重组腺病毒rvAd41-VP6 (o)在体外具有良好的生物学性质,可用于下一步动物免疫研究.     

PGRN缺失型腹膜巨噬细胞对细菌脂多糖的体外炎症应答

目的   观察颗粒蛋白前体(PGRN)对细菌脂多糖(LPS)诱导腹膜巨噬细胞(PM)炎症应答的影响。方法   诱导提取野生型(WT)小鼠及PGRN基因敲除小鼠(KO)腹膜细胞(PEC),观察PEC数目、形态和类型;流式细胞术检测PEC的巨噬细胞表面标志物CD11b、F4/80。LPS分别处理WT或KO小鼠PM,LPS、重组PGRN或LPS加重组PGRN分别处理WT小鼠PM,培养24h后收集细胞上清,ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素12(IL-12),Griess法检测一氧化氮(NO)。 结果   PGRN缺失对小鼠PEC的数目、成分及巨噬细胞表面标志物CD11b、F4/80的表达无明显影响;与WT组相比,LPS诱导PGRN KO来源的PM分泌较高水平的TNF-α、IL-1β、IL-12及NO。外源给予重组PGRN后,LPS诱导WT组PM分泌TNF-α、IL-1β、IL-12及NO的水平降低。结论   PGRN缺失使PM对LPS的刺激产生了更强的炎症反应;外源性给予重组PGRN则可抑制LPS诱导PM 释放前炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-12及炎症介质NO。