CpG-ODN诱导白血病HL60细胞分化和凋亡的研究

目的:研究含CpG基序的寡核苷酸对白血病HL60细胞的作用。方法:设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)、不含CpG基序的寡核苷酸(nonCpG-ODN)和含甲基化CpG基序的寡核苷酸(ZpG-ODN)分别作用于白血病HL60细胞,MTT法测定HL60细胞抑制效应,硝基四氮唑蓝还原实验和细胞表面CD14分子表达状况分析HL60细胞诱导分化结果,流式细胞仪和透射电镜观察HL60细胞的凋亡现象,免疫组化检测HL60细胞后caspase3、Bcl-2和Bax的表达状况。结果:CpG-ODN对白血病HL60细胞有诱导分化和诱导凋亡作用,nonCpG-ODN和ZpG-ODN无此作用。结论:CpG-ODN可直接诱导白血病HL60细胞分化和凋亡,此为白血病免疫治疗提供了新的途径。     

HPV58E6基因的克隆及体外表达

目的克隆并体外表达HPV58E6,为E6致癌作用和疫苗的研究奠定基础.方法通过PCR方法从HPV58全基因克隆中扩增出HPV58E6基因片段,利用基因重组技术,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游,体外转录成mRNA后,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中表达生物素标记的HPV58E6蛋白,化学发光法检测,X光胶片曝光显影鉴定.结果酶切电泳证实质粒构建正确,SDS-PAGE电泳显示在相当于HPV58E6分子量约18.8kD的位置出现条带,X光胶片亦在相应位置出现印迹条带.结论成功表达了含有生物素标记的HPV58E6蛋白,为其致癌作用和治疗的研究奠定基础.     

巨细胞病毒感染人脐静脉内皮细胞后RAGEmRNA的时序性表达及其意义

目的：研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)糖基化终产物受体(RAGE)表达的影响，探讨HCMV感染致动脉粥样硬化的作用机制。方法：用HCMV感染HUVEC，采用RT PCR方法检测不同感染时段细胞RAGEmRNA的表达。结果：HCMV感染HUVEC后，0?h时RAGEmRNA有基础水平的表达，4?h开始升高，8?h时表达水平明显升高，随感染时间延长，表达量逐渐增高，感染24?h时达高峰，48?h开始回落，72?h表达量仍维持在较高的水平，显著高于0?h。各时段与0?h比较，均有统计学意义(P＜0.01)。结论：HCMV感染人脐静脉内皮细胞后能够促进RAGE mRNA的表达，并且呈时间依赖性。HCMV有可能通过上调RAGE介导内皮细胞的炎症反应，促进动脉粥样硬化的发生、发展。     

加强实验教学改革，提高医学微生物学教学质量

为提高医学微生物学实验教学质量,激发学生学习兴趣、培养科学思维、掌握实验操作技能,进行了一些改革和探索。文章从整合实验教学内容,开发综合性试验;引入设计性实验教学法,发挥学生主观能动性;加强实验室建设,重视生物安全方面以及改进实验教学手段,增添实验内容等方面进行了阐述。     

含E型沙眼衣原体MOMP基因的重组腺病毒和DNA疫苗联合免疫效果的研究

目的探讨E型沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）DNA疫苗和重组腺病毒联合免疫小鼠诱导的免疫效应。方法构建、纯化重组腺病毒Ad-MOMP及重组真核表达质粒pVAX1-MOMP。设计4种免疫方案,分别为DNA免疫（ DNA组）、重组腺病毒免疫（ Ad组）、DNA初次免疫-重组腺病毒加强免疫（ DNA/Ad组）、重组腺病毒初次免疫-DNA加强免疫（ Ad/DNA组）。末次免疫后2周检测小鼠血清特异IgG、IgG1、IgG2a、IgA抗体,阴道分泌物SIgA抗体及脾淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-10水平。结果DNA组诱导较弱免疫应答,未产生SIgA抗体及Th1反应。 Ad组诱导出Th1反应及SIgA抗体,且血清抗体显著高于DNA组。联合免疫均能诱导明显强于单独免疫的黏膜SIgA、血清抗体及Th1反应。 Ad/DNA组的Th1反应强于DNA/Ad组;而DNA/Ad组的血清抗体和黏膜抗体水平强于Ad/DNA组。结论Ad-MOMP能诱导黏膜免疫及Th1细胞免疫应答,DNA/Ad及Ad/DNA联合免疫产生的特异性免疫应答明显强于单独免疫。其中Ad/DNA的Th1反应优势更明显,DNA/Ad的血清抗体和黏膜抗体反应更强。接种顺序会影响联合免疫的强弱及类型,这为Ct疫苗的设计研究提供新的思路和实验依据。     

牛乳头瘤病毒E6蛋白与p73蛋白的相互作用

为进一步探讨和阐明E6蛋白的致癌机制以及充分认识新发现的抑癌基因p73的作用，在体外通过免疫共沉淀法研究p73和牛乳头瘤病毒1型E6蛋白（BPI－1E6）的相互结合情况，后将表达p73和BPV－1E6的质粒导入SAOS－2细胞内，进一步研究细胞内E6蛋白对p73蛋白的诱导调亡和转录活化功能等生物学活性的影响。结果发现，BPV－1E6与p73蛋白结合较弱，且未检测到E6能诱导p73蛋白的降解。在SAOS－2细胞内，BPV－1E6蛋白确实能部分抑制p73蛋白的诱导细胞凋亡的功能，并且p73蛋白的转录激活作用也有影响，但这种影响作用颇弱。     

人乳头瘤病毒6b型重组减毒沙门菌的构建及表达

目的：构建HPV6b L1-E7嵌合基因重组减毒沙门菌，为进一步粘膜免疫奠定基础。方法：用PCR方法扩增获得HPV6b的L1－E7嵌合基因片段，TA克隆后，再将L1－E7基因克隆入pTETnir15沙门菌表达质粒。用电转化法将重组表达质粒导入鼠伤寒减毒沙门菌S.BRD509(ΔaroA,ΔaroC)中，厌氧诱导其表达，蛋白样品做SDS－PAGE凝胶电泳和western blot分析。结果：用BamHI和SalI双酶切重组表达质粒pTETnir15-6bL1E7可释放2389bp和1554bp两片段，结果与预计相符。western blot结果显示，重组沙门菌在约56KD处有明显特异蛋白条带，而对照菌则无。结论：该重组沙门菌能特异地表达HPV6b L1-E7融合蛋白，人乳头瘤病毒HPV6b L1-E7重组减毒沙门菌构建成功。     

HPV16 L1-E7蛋白疫苗诱导小鼠产生抗体及细胞免疫应答的研究

目的：探讨嵌合性病毒样颗粒HPV16 L1－E7蛋白疫苗接种于动物体内诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法：以本室构建的HPV16 L1－E7嵌合蛋白疫苗腹腔注射免疫BALB／c小鼠，在初次免疫后，分别于第3，4，5周采血ELISA检测特异性抗体的产生。并耳皮下注射HPV16L1蛋白，检测特异性DHT反应，在末次免疫2周后，取小鼠脾细胞，用HPV 16 L1－E7蛋白刺激，检测T细胞增殖反应及血清IFN－γ水平。结果：HPV16 L1－E7蛋白疫苗免疫小鼠可有效产生HPV16 L1抗体及特异性DTH反应，加强免疫后，抗体水平升高，两者水平均高于对照组（P＜0．01），HPV16 L1－E7嵌合蛋白疫苗免疫后取小鼠脾细胞，在特异性HPV16 L1－E7蛋白抗原刺激下，特异性T淋巴细胞明显增殖，被免疫小鼠血清中出现高水平IFN－γ。结论：嵌合母亲产颗粒HPV16 L1－E7蛋白可诱导小鼠产生高滴度抗体，HPV16L1特异性TDH参与的超敏反应及细胞免疫应答的细胞因子，这为研究预防HPV感染和治疗HPV相关性肿瘤的疫苗提供了实验资料。