血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-(1-7)对大鼠血管平滑肌细胞肾素(原)受体表达的影响

目的: 研究血管紧张素Ⅱ(Ang II)和血管紧张素-(1-7) 对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)肾素(原)受体 表达的影响。方法: 将VSMCs按以下分组:(1)对照组:不加干预因素;(2)不同浓度AngⅡ组:分别加入AngⅡ10、100、1 000 nmol/L;(3)不同浓度Ang-(1-7)组:分别加入Ang-(1-7) 10、100、1 000 nmol/L; (4)AngⅡ+ losartan(AT₁受体拮抗剂)组:losartan 10^-6 mol/L预处理30 min后,再加入AngⅡ100 nmol/L; (5)AngⅡ+ PD123319(AT₂受体拮抗剂)组: 先用10^-5 mol/LPD123319预处理30 min后,再用终浓度为100 nmol/L AngⅡ;(6)CGP42112A(AT₂受体激动剂)组:加入10^-7 mol/L CGP42112A。各组用real-time PCR法和Western blotting法检测(P)RR的表达情况。结果: 与对照组比,不同浓度AngⅡ可以促进(P)RR mRNA和蛋白的表达,并且呈浓度依赖性(均P<0.01);不同浓度Ang-(1-7)可抑制 (P)RR mRNA和蛋白表达(均P<0.01),各浓度之间比较无显著差异(均P>0.05);加入CGP42112A可以促进(P)RR mRNA和蛋白的表达(均P<0.01),与AngⅡ处理组比较,加入PD123319可抑制(P)RR mRNA和蛋白表达(均P<0.01),加入losartan不能抑制(P)RR mRNA和蛋白表达(P>0.05)。结论: AngⅡ可通过AT₂受体促进(P)RR mRNA和蛋白表达,而Ang-(1-7) 可抑制(P)RR mRNA和蛋白的表达。     

肾素(前体)受体miRNA干扰质粒的构建及鉴定

目的 设计及构建肾素(前体)受体微小干扰核糖核酸(miRNA)质粒,并鉴定出有效干扰质粒.方法 设计及构建4对肾素(前体)受体的pcDNATM6·2-GW/EmGFPmiR miRNA及1对阴性对照miRNA干扰质粒,通过测序鉴定.将干扰质粒用LipofectamineTM 2000转染大鼠血管平滑肌细胞,通过顺时转染获得细胞系,倒置荧光显微镜下观察绿色荧光及流式细胞术确定转染效率,Real-time PCR和Western blot检测4对干扰质粒、阴性对照质粒肾素(前体)受体的mRNA及蛋白表达水平.结果 测序显示肾素(前体)受体干扰序列及读框完全正确,倒置荧光显微镜及流式细胞术结果显示干扰质粒瞬时转染的大鼠血管平滑肌细胞系的转染效率均在60%以上.Real-time PCR和Western blot结果显示X2-2-3、X2-3-3干扰质粒对肾素(前体)受体 mRNA及蛋白有较好的抑制效果.结论 成功构建了肾素(前体)受体干扰真核表达载体,筛选出有效干扰质粒,为进一步研究肾素(前体)受体在大鼠血管平滑肌细胞中的作用提供参考.     

大学生运动损伤的原因及预防

体育运动不仅可以调节大学生的学习生活而且也增强大学生的身体素质。但是不合理的体育锻炼不但不能促进大学生的身体素质的提高,而且可以损伤大学生的身体健康,更能影响大学生的心理健康。所以,让大学生了解一些运动损伤的预防知识,对其合理地从事体育锻炼,促进其身体健康都将     

编码大鼠AT1-R mRNA的shRNA真核表达载体的构建

目的构建编码大鼠AT1-R mRNA的shRNA真核表达载体质粒,为利用基因沉默技术从转录后水平进行高血压治疗的研究做准备。方法根据大鼠AT1-R mRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆进入载体pGenesil-1,并进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体,经测序证明与设计的相同,获得大鼠AT1受体的shRNA表达载体质粒。结论构建的编码大鼠AT1-R mRNA的shRNA真核表达载体可进入哺乳细胞内表达短发夹RNA,经Dicer酶裂解成siRNA并降解靶基因mRNA,而达到基因干扰的作用。为利用其进行自发性高血压大鼠的降压治疗研究奠定了基础。     

血管紧张素转换酶短发夹RNA对自发性高血压大鼠的降压效果

背景高血压是多基因遗传病,与基因表达异常有关。因此,寻找一种长期有效的、通过调节体内基因表达而控制高血压的基因疗法,可能是解决高血压的最终临床方案。目的用 RNA 干扰技术下调血管紧张素转换酶(ACE)表达,观察其对自发性高血压大鼠(SHR)血压及肾脏表达 ACE 的影响。方法 SHR 随机分为3组:空白对照组(注射生理盐水);病毒对照组(注射对照腺病毒:Ad5-EGFP);治疗组(注射表达 ACE 基因特异性短发夹 RNA 的重组腺病毒载体:Ad5-EGFP-ACE-shRNA);同时设 WKY 正常血压对照组(注射生理盐水)。以上各组大鼠均于实验的第1天单次尾静脉注射给药。干预前后检测尾动脉压及心率的变化。于注射后第3天,取主动脉、肺、心肌、肾脏组织,荧光显微镜下观察对 Ad5-EGFP-ACE-shRNA 的吸收情况。并用 RT-PCR 及 Western blot 法检测肾组织中 ACE mRNA 及蛋白的表达。结果治疗组尾动脉压于注射后第3天明显下降(19.0±3.2)mmHg,第13天时下降(22.1±3.3)mmHg,降压作用至少可持续14天,而空白对照和病毒对照组血压则持续升高。主动脉、肺、心...     

RNA干扰对大鼠血管内皮细胞血管紧张素转换酶表达的抑制作用

目的用RNA干扰技术选择性下调大鼠血管内皮细胞(ECs)上血管紧张素转换酶(ACE)的表达。方法构建携带ACE基因特异短发夹RNA(shRNA)编码序列的质粒载体pACE-shRNA,与脂质体转染剂制备成不同比例的复合物,转染原代培养的大鼠主动脉ECs,在荧光显微镜下检测转染效率,用四甲基氮唑盐比色法检测细胞存活率,选择出质粒与转染剂的最佳配比。然后以最佳配比复合物转染ECs,分别于转染前及转染后24、48、72h通过半定量RT-PCR和Western blot法检测ACE的表达。结果质粒与转染剂的最佳配比为质粒1.0μg、转染剂4μl,此时转染效率为(81.2±6.2)%,细胞生存率为(90.2±4.1)%。以最佳配比复合物转染ECs后24h,ACE的mRNA和蛋白质表达无明显变化;转染后48h,表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);72h时表达更低,只有微弱的条带显示。结论RNA干扰能选择性下调原代培养的大鼠血管ECs上ACE的表达,这可能为心血管疾病基因治疗的研究和应用提供新方法。     

Effects of Ang-( 1-7 ) on the apoptosis of cultured endothelial cells induced by Ang Ⅱ

Objective To investigate the effect of Ang-(1-7) on the apoptosis in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by Ang Ⅱ.Methods HUVECs were isolated and cultured.Cultured HUVECs were incubated for 24 h with Ang-(1-7), Ang Ⅱ, Ang-(1-7) A-779, Ang-(1-7) + Ang Ⅱ, A-779 + Ang Ⅱ + Ang-( 1-7), respectively.Cultured HUVECs without incubating stimulator were chosen as controls.The apoptosis of endothelial cells were detected by flow cytometry.Results The apoptosis of endothelial cells in HUVECs were upregulated by AngⅡ ( 10-6 mol/L) (25.60% ±3.17% vs 2.32% ±0.24%, P ＜0.005).Compared with the AngⅡ group, Ang-(1-7) dose-dependently inhibited the apoptosis of endothelial cells in HUVECs ( (20.04% ± 2.21% ,16.04% ± 1.32 %, 10.04% ±2.05,7.79% ±1.50% vs AngⅡ group 25.60% ±3.17%, P ＜0.05 , P ＜0.05).The effects of Ang-(1-7) could be blocked by A-779 (23.37% ±0.75% vs 20.04% ± 2.21%, 16.04% ± 1.32,10.04% ± 2.05% ,7.79%± 1.50%, P ＜ 0.05 ).Conclusion Ang-(1-7) can attenuate the apoptosis of endothelial cells induced by Ang Ⅱ in HUVECs in a dose-dependent manner.The effects of Ang-(1-7) could be blocked by A-779( P＜0.05).     

二甲基精氨酸二甲基氨基酸水解酶基因多态性与冠心病的相关性研究

目的:研究中国人群二甲基精氨酸二甲基氨基酸水解酶(DDAH)基因单核苷酸多态性(SNP)与冠状动脉性心脏病(coronary heart disease,CHD)的关系。方法:从山西医科大学第二医院选取冠心病患者165例和匹配的对照组192例。并记录所有研究对象的病史、体格检查等临床资料及其它流行病学资料,采取聚合酶链式反应和限制性酶切片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP)检测各组DDAH2基因rs805305位点C/G的基因型并统计各组的基因型频率。用连接酶检测反应(LDR)-测序分型方法检测各组基因rs2272592位点G/A的基因型并统计各组的基因型频率。结果:冠心病组rs805305和rs2272592基因型频率与对照组之间相比较均无显著差异(P0.05)。并在校正了年龄、性别、高血压史、糖尿病史、甘油三酯和胆固醇等传统危险因素的影响后,这种相关性依然不存在。结论:DDAH2基因rs805305位点C/G多态性和rs2272592位点G/A多态性可能与中国人群冠心病发病不相关。     

职业接触抗肿瘤药物对护士外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨职业接触抗肿瘤药物对护士外周血T淋巴细胞亚群的影响。方法选择接触抗肿瘤药物5年以上、每日配制操作5人份以上的护士为接触组；无抗肿瘤药物接触史的健康志愿者为对照组。抽取接触组及正常对照组外周静脉血各2ml，EDTA抗凝，利用流式细胞仪技术观察外周血T淋巴细亚群的变化。结果接触组T淋巴细胞亚群CD4^＋细胞下降，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。CD8^＋有上升趋势，CD4^＋／CD8^＋比值有下降趋势，两组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；CD3^＋及NK细胞接触组与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论抗肿瘤药物可能减低职业接触护士的细胞免疫功能。     

加强青年医师科研能力的培养

加强青年医师创新意识和科研能力的培养,对于提高医疗队伍整体科技水平,用好现有人才,稳住关键人才,特别是对于培养未来人才具有重要意义.